Hematopoetske matične stanice žumanjske vrećice

Očito, razne proliferativna i diferencijacije hematopoetskih matičnih stanica potencijom zbog osobitosti njihovog ontogenetskom razvoja, jer u procesu ontogeneze u ljudskom promjene čak lokalizaciju glavnih područja hematopoeze. Hematopoetske progenitorske stanice žumanjke vrećice fetusa predane su formiranju isključivo eritropoetičke stanične linije. Nakon migracije primarnog GSK u jetru i slezenu u mikrookolišu ovih organa, spektar redaka komisije se širi. Posebno, hematopoetske matične stanice stječu sposobnost stvaranja stanica limfnih linija. U prenatalnom razdoblju, hematopoietičke prekursorske stanice dospijevaju u zonu konačne lokalizacije i koloniziraju koštanu srž. U procesu razvoja fetusa u krvi fetusa nalazi se značajan broj hemopoetskih stanica stabljike. Na primjer, u 13. Tjednu trudnoće, razina HSC doseže 18% od ukupnog broja mononuklearnih krvnih stanica. U budućnosti, tu je progresivno smanjenje u njihovom sadržaju, ali neposredno prije rođenja broj HSC u krvi pupkovine se ne razlikuje od njihove brojnosti u koštanoj srži.

Prema klasične ideje, prirodna promjena u lokalizaciji hematopoeze tijekom embrionalnog razvoja sisavaca provodi migracije i provedbe nove mikro okolinu pluripotentne matične stanice - od žumanjčana vreća u jetri, slezeni i koštanoj srži. Od ranih stadija zametka razvoja hematopoetskih tkiva sadrži veliki broj matičnih stanica, što smanjuje kao trudnoće, najviše obećava za dobivanje hematopoetskih matičnih stanica smatra krvotvorni fetalna jetrena izolirati iz abortnogo materijala na 5-8 tjedana gestacije.

[1], [2], [3], [4], [5], [6]

Podrijetlo hematopoetskih matičnih stanica

Činjenica da embrionska formacija eritrocita potječe iz krvnih otoka vrećice žumanjaka, nema sumnje. Međutim, in vitro diferencijaciju hematopoetskih potencijal x žumančanom vrećicom stanica je vrlo ograničena (razlikovati se pretežno eritrocita). Treba napomenuti da je transplantacija krvotvornih matičnih stanica iz žumanjčana vreća nije u mogućnosti vratiti hematopoezu za dugo vremena. Pokazalo se da ove stanice nisu prethodnik GSK odraslog organizma. Istina GSK pojaviti ranije, na 3-5 tjedana razvoja fetusa u zoni stvaranja želučanog tkiva i endotelu krvnih žila (paraaortic splanchnopleura, P-SP), a umjesto oznake aorte obogaćivanje gonada i primarne bubrega - u polju ili tako mesonephros nazvanu AGM-područje. Pokazalo se da stanice AGM-regija nisu samo izvor HSC, ali endotelne stanice krvnih žila, a osteoblasti, procesi koji su uključeni u formiranju kostiju. Na 6. Tjednu trudnoće rane hematopoetske ishodišne stanice iz AGM-okruga putovanja do jetre, koja je glavne organe krvotvornih fetusa prije rođenja.

Budući da je ova točka je izuzetno važan u smislu transplantacije stanica, problem podrijetla HSC tijekom embrionalnog čovjeka zaslužuje detaljniji prikaz. Klasična ideja da hematopoetskih matičnih stanica sisavaca i ptica koji su izvedeni iz adneksalnih izvora, na temelju istraživanja Metcalf i Moore, koji je prvi koristi tehnika kloniranja GSK i njihove potomke, izoliran iz žumanjčana vreća. Rezultati njihovog rada bili su temelj za teoriju migracija, prema kojem GSK, nastao u žumanjčana vreća, dosljedno zauzimati prolazne i konačne hematopoetskih organa u procesu formiranja u svojim okoline. Tako je ustanovljeno da generacija GSK, u početku lokalizirana u vrećici žumanjaka, služi kao stanična osnova za konačnu hematopoezu.

Hematopoetske ishodišne stanice iz žumanjčane vrećice su među prvim krvotvornih ishodišnih stanica. Njihov fenotip su opisali AA4.1 + CD34 + c-kit +. Za razliku od HSC zrele koštanu srž, ne izražavaju Sca-1 antigena i MHC molekula. Čini se da je pojava marker antigena na površini membrane GSK žumanjčana vreća kulturom odgovara njihovoj diferencijaciji tijekom embrionalnog razvoja s formiranjem počinjenih linije hematopoezu: smanjuje razinu ekspresije CD34 antigena i Thy-1 povećava ekspresiju CD38 i CD45RA, pojavljuju HLA-DR molekula. U slijedećem inducirana citokina i faktora rasta, in vitro ekspresija struke počinje antigene specifične za hematopoetskih progenitor stanica iz dotične stanične linije. Međutim, rezultati istraživanja embrionalnih hematopoeze u predstavnika tri razreda kralježnjaka (vodozemaca, ptica i sisavaca), a posebno je analiza porijekla HSC su odgovorni za konačni hematopoeze u postnatalnom ontogeneze, za razliku od klasične ideje. Utvrđeno je da su predstavnici svih navedenih skupina u embriogeneze formirana dva zasebna područja u kojima se pojavljuje GSK. Extraembryonic „klasična” regija predstavljen žumančanom vrećicom ili njegovih analoga, a nedavno identificirani intraembrionalnaya HSC lokalizacije zona sadrži aortni para-mezenhimu i AGM-području. Danas, može se reći da su vodozemci i ptice definitivni HSC izvedeni iz intraembrionalnyh izvora, dok je u sisavaca i čovjeka GSK dijelu žumanjčana vreća u konačni hematopoeze je još uvijek nemoguće u potpunosti eliminirati.

Embrionalni hematopoiesis u jajeta vreća je u suštini osnovna eritropoeze, koji je karakteriziran očuvanja jezgre u svim stadijima eritrocita sazrijevanja i tipom sinteze fetalnog hemoglobina. Prema najnovijim podacima, val primarne eritropoezeje završava u vrećici žumanjaka 8. Dana embrionalnog razvoja. Slijedi razdoblje akumulacije konačnih eritroidnih progenitorskih stanica - BFU-E, koje se formiraju isključivo u vrećici žumanjaka i prvo se pojavljuju 9. Dana gestacije. U sljedećoj fazi embriogeneze već formirana definitivno eritroidnih pra stanica - (!) CFU-E, kao i mastocita i CFU-GM. Ona se temelji na postojanju tog gledišta da su definitivne ishodišne stanice nastaju u žumanjčana vreća, migriraju kroz krvotok, akumulira u jetri i brzo pokretanje prve faze intraembrionalnogo hematopoeze. Prema takvim prikazima, iz žumanjčane vrećice mogu se uzeti u obzir, s jedne strane, kao mjesto primarne eritropoeze, a drugi - kao prvi izvor konačnih hematopoetskih stanica prekursora u embrionalnom razvoju.

Pokazano je da stanice koje tvore kolonije s visokim proliferativna potencijala mogu odvojiti od žumanjčane vrećice je već na 8. Dana trudnoće, tj davno prije zatvaranja krvožilnog sustava embrija i žumanjčana vreća. Štoviše dobiveni iz jajeta vrećica s visokom proliferativni potencijal in vitro koloniziranja stanica, veličina i stanični pripravak koji se ne razlikuje od odgovarajućih parametara rasta kulture matičnih stanica koštane srži. Istovremeno, sa stanicama kolonija ponovnog zasađivanja jajeta vrećice s velikim potencijalom proliferativni nastaju znatno više kolonija stanica i tvori kćeri multipotentnim prekurzorskih stanica nego koštane srži hematopoetskih ishodišnih stanica.

Konačni zaključak o ulozi krvotvornih matičnih stanica u žumanjčana vreća konačni hematopoeze može dati rezultate u kojima su autori dobivaju liniju endotelnih stanica u žumanjčana vreća (G166), koji učinkovito podržava njegovu proliferaciju stanica s fenotipskih i funkcionalnim karakteristikama HSC (AA4.1 + WGA +, niska gustoća i slaba ljepila). Sadržaj najkasnije kada se uzgajaju na feeder sloj stanica u S166 za 8 dana za više od 100 puta. Miješani kolonije koje rastu na podlogu stanične linije S166, identificirane su makrofaga, granulocita megakariocita, monocite i eksplozije, a stanice preteče stanica B i T limfocita. Žumanjčana vreća stanice, rastu na sloj endotelnih stanica imaju sposobnost da se i održava se reproduciraju u eksperimentima autora na tri prolaza. Oporavak kroz njih hematopoeze kod odraslih miševa s teškim kombinaciji imunodeficijencije (SCID) u pratnji formiranje svih vrsta leukocita, kao i T i B limfocita. Međutim, autori u svojim istraživanjima koriste stanice žumanjčana vreća od 10 dana embrija, od kojih je unutrašnju i intraembrionalnye vaskularni sustav već je zatvorena, da ne isključuje prisutnost među stanicama žumanjčana vreća GSK intraembrionalnogo podrijetla.

Istovremeno, analiza potencijal diferencijacije hematopoetskih stanica u ranim stadijima razvoja, prije kombiniranja odabrani krvožilni sustav embrija i žumančanom vrećicom (8-8.5 dana gestacije) pokazala prisutnost prekursora T i B stanica u žumanjku vreće, ali ne i u tijelu embrija , In vitro postupak u dva koraka kultivacije sustava na monosloju epitelnih stanica i subepitelno timusa mononuklearnih stanica su diferencirani u jajeta vrećica pre-T i zrele T-limfocita. Pod istim uvjetima kulture, ali na monosloju stromalnim stanicama jetre i koštane srži mononuklearnih stanica iz jajeta vreće su diferencirani u pre-B stanice i odrasle IglVT-B-limfocitima.

Rezultati ovih istraživanja ukazuju na mogućnost razvoja stanice imunološkog sustava od extraembryonic jajeta vreće tkiva, formiranje primarne T i B stanične linije ovisno o faktorima hematopoetskih strome mikrookolini embrionalnih organa.

Drugi autori također pokazala da žumanjčana vreća stanice s potencije obuhvaća limfnog diferencijaciju, a formirana limfociti ne razlikuju od onih antigene karakteristike u zrelim životinjama. Nađeno je da stanice jajeta vrećica 8-9 dana embrija može vratiti timusa-stanica u atimotsitarnom pojavom zrelog CD3 + CD4 + - i CD8 + limfocita SDZ + posjeduje uređenu repertoar T staničnih receptora. Dakle, timus može naseljeno stanica adneksalnih podrijetla, ali to je nemoguće isključiti mogućnost migracije na timusu ishodišne stanice T limfocita iz intraembrionalnyh izvora-stanica.

Međutim, transplantacija hematopoetskih stanica žumanjčane vrećice u ozračenim odrasle primatelja nije uvijek završile repopulacijskih dugo devastiranih područja hematopoetskih lokalizacija tkiva, a in vitro stanice žumanjčane vrećice čine slezene kolonije mnogo manji od stanice AGM-području. U nekim slučajevima, preko žumanjčana vreća stanica 9 dana embrija je još uvijek moguće postići dugoročno (do 6 mjeseci) naseljavanju od krvotvorni ozračeni primatelja. Autori vjeruju da su stanice žumanjčane vreće fenotipska CD34 + c-kit + po svojoj sposobnosti da repopulate devastiranog organe krvotvornih, ne samo da se ne razlikuju od onih u AGM-regije, ali i učinkovitije vratiti hematopoeze, kao u žumanjčana vreća su sadržani gotovo 37 puta više ,

Treba naglasiti da su u eksperimentima, hematopoetske stanice jajeta vrećica s marker antigena GSK (c-kit + i / ili CD34 + i CD38 +), koji su uvedeni izravno u jetru ili abdominalne vena potomstva ženki miševa koji su primili injekcije busulfan do 18. Dana trudnoće. U tim novorođenih životinja vlastiti mijelopoezu bio oštro depresivan zbog eliminacije krvotvornih matičnih stanica uzrokovanih busulfan. Nakon transplantacije, HSC iz jajeta vreće za mjeseci i u perifernoj krvi primatelja prepoznaje zrnca sadrže oznaku donatora - glitserofasfatdegidrogenazu. Nađeno je da se vreća jajeta GSK smanjen sadržaj limfne stanice, mijeloidne i eritroidnih loze u krvi, timus, slezena i koštana srž, naznačen time, da je razina himerizam bila je veća u slučaju, ne intrahepatičkih intravenskih jajeta vrećice stanica. Autori sugeriraju da HSC od žumanjčana vreća zametaka ranim fazama razvoja (do 10 dana) za uspješno izmirenje krvotvornih organa odraslih primatelja kojima je potrebna preliminarnom suradnjom s hematopoetskog mikrookoliša jetre. Moguće je da je u embriogeneze postoji jedinstven stupanj razvoja, kada su stanice žumanjčana vreća, selice prvenstveno u jetri, a zatim steći sposobnost kolonizirati stromi formira organe odraslih primatelja.

U tom smislu treba napomenuti da je himerizam stanice imunološkog sustava često se promatra nakon transplantacije stanica koštane srži u ozračeni primatelja spolno zrelih - u krvnim stanicama donatora posljednjih fenotipova u dovoljno velikim količinama nalaze se među B- i T-limfocita i granulocita primatelja da traje najmanje 6 mjeseci.

Morfološke metode hematopoetskih stanica u sisavaca prvi otkrio na 7. Dan embrionalnog razvoja i predstavlja hematopoetskih otoka u žilama žumanjčana vreća. Međutim, prirodni hematopoetski diferencijacije u jajeta vreće ograničen primarni eritrociti očuvanje jezgre i sintezu fetusa hemoglobina. Međutim, tradicionalno se smatralo da žumanjčane vrećice je jedini izvor HSC migraciju na organe krvotvornih za razvoj fetusa i dati definitivne hematopoezu u odraslih životinja, budući da je pojava HSC u tijelu embrija je zatvaranje krvožilnog sustava embrija i žumanjčana vreća. U prilog ovom smislu, u skladu s podacima koje je u in vitro kloniranja stanicama žumančanom vrećicom dovesti do granulocita i makrofaga, a in vivo, - slezene kolonija. Zatim tijekom pokusa presađivanja utvrđeno je da su hematopoetskih stanica u žumanjčana vreća, koja je u žumanjčana vreća su u stanju razlikovati samo u osnovnim crvenih krvnih stanica u mikro jetre novorođenčeta i odrasle SCID miševa devastiran timus ili stroma ulagač stječe sposobnost da ponovo napučivanje hematopoetskih organa s obnovi sve linije hemopoeze čak iu odraslim životinjama primatelja. U načelu to omogućuje da ih klasificiramo kao prave GSK-ove - kao stanice koje funkcioniraju u postnatalnom razdoblju. Pretpostavlja se da je žumanjčana vreća uz AGM regiji, izvor HSC za definitivnu hematopoeze u sisavaca, međutim, još uvijek nije jasno o njihovom doprinosu razvoju krvotvornog sustava. Biološki osjećaj postojanja u ranim embriogenezama sisavaca dvaju hemopoetskih organa s sličnim funkcijama također nije razumljiv.

Nastavlja se traženje odgovora na ova pitanja. In vivo nije dokazati prisutnost jajeta vrećica embrija 8-8,5 dana stanica-stanica u smanjenju sublethally ozračene SCID miševa s teškim nedostatkom T i B limfociti. Hematopoetske stanice žumanjke krvi injicirane su i intraperitonealno i izravno u tkivo slezene i jetre. Nakon 16 tjedana, primatelji prepoznaje TCR / CD34 \ CD4 + i CD8 + T-limfocita i B-220 + IgM + B stanice označene antrhgenami donor MHC. U tijelu, 8 - 8,5 dana embrija matičnih stanica, sposobnih za takvu obnovu imunološkog sustava, autori nisu pronašli.

Žumančanom vrećicom hematopoetske stanice posjeduju visok proliferativni potencijal, a sposobni su za dugoročnu sebe reprodukciju in vitro. Neki autori su identificirali ove stanice kao osnovu za dugoročnu HSC (oko 7 mjeseci) generacije eritroidnih pra stanica razlikuje od rodonačelnika koštane srži eritroidnih linije pasaža dulje trajanje, velike veličine kolonije, povećana osjetljivost na faktore rasta i dužem proliferacije. Nadalje, u odgovarajućim uzgoja jajeta vrećice stanica in vitro uvjetima nastaju i progenitorskih stanica limfnog serije.

Ovi podaci ukazuju na opći izvor žumanjka vreće GSK, naznačen time što manje od nastali i stoga imaju veliki proliferativni potencijal od matičnih stanica koštane srži. Međutim, unatoč činjenici da je žumance vreća sadrži pluripotentne ishodišne stanice, dugoročno podržavaju različite linije krvotvornog diferencijacije in vitro, jedini je kriterij korisnosti GCW je njihova sposobnost da repopulate dugotrajne hematopoetskih organa primatelja, hematopoetskih stanica koje su genetski manjkav ili oštećen. Dakle, ključno pitanje je da li su pluripotentne stanice žumanjčane vreća migrirati i kolonizirati hematopoetskih organa i tselesoorbrazno revidirati poznato djelo, koje je pokazalo njihovu sposobnost da ponovo napučivanje organe krvotvornih spolno zrelih životinja s formiranjem glavnih krvotvornih linije. U embrija ptica u 70-tih godina su identificirani intraembrionalnye izvora definitivno HSC koji je već bio doveden u pitanje ustaljene predodžbe o porijeklu adneksalnih GSK, uključujući i predstavnike drugih razreda kralješnjaka. U posljednjih nekoliko godina bilo je publikacija o prisutnosti sisavaca i ljudi sličnih intraembrionalnyh stranice sadrže GSK.

Još jednom napominjemo da je temeljna znanja u ovom području je izuzetno važno za transplantaciju praktičnu stanica, što ne samo da pomažu definirati željeni izvor HSC, ali i utvrditi osobitosti interakcije osnovnih hematopoetskih stanica iz genetski stranih organizama. Poznato je da primjena ljudskih hematopoetskih matičnih stanica u fetalnom ovce jetre organogenezu embrija u stadiju dovodi do proizvodnje kimernih životinja, krvi i koštane srži su stabilno određena od 3 do 5% ljudskih hematopoetskih stanica. U tom slučaju, ljudska HSC ne mijenjaju kariotip, zadržavajući visoku stopu proliferacije i sposobnost razlikovanja. Osim toga, transplantirane ksenogenična HSC nije u sukobu sa imunološki sustav i fagocitnim stanicama organizma domaćina i nije se transformirao u tumorskim stanicama, koje čine osnovu za intenzivnom razvoju postupaka za intrauterini korekcije nasljednih bolesti koristeći ESCs ili HSC transfektirane s nedostatkom gena.

No, u kojoj fazi embriogeneze korisnim za obavljanje takve korekcije? Stanice za prvi put, odlučan da hematopoeze kod sisavaca se pojaviti odmah nakon implantacije (dan 6 trudnoće), kada su morfološke karakteristike krvotvornog diferencijacije i vjerojatnih krvotvornih organa još nisu dostupni. U ovoj fazi, raspršene stanice embrija miša može repopulate hematopoetskih organa ozrači primatelja oblikuju eritrocite i limfocite, različite od stanice domaćina ili iz hemoglobina vrsti odnosno glitserofosfatizomerazy i dodatni marker kromosom (TB) donora stanica. U sisavaca, poput ptica, zajedno s žumanjčana vreća do zatvaranja ukupne vaskularne kreveta direktno u tijelo embrija u para-aorte splanhnoplevre pojaviti hematopoetskih stanica. Od AGM dodijeljeno područje hematopoetskih stanica AA4.1 + fenotipa identificiran kao multipotentnih hematopoetskih stanica koje tvore Ti B-limfocite, makrofage megakariocita i. Fenotipski, te stanice multipotentnih ishodišne vrlo blizu HSC u koštanoj srži odraslih u životinja (CD34 + c-kit +). Broj multipotentnih AA4.1 + stanica među svim AGM-stanica područje je mala - da nisu više od 1/12 dio.

U ljudskom zametku, pronađena je i homologna AGM regija životinja, intraembrionska regija koja sadrži HSC. Štoviše, kod ljudi više od 80% multipotentnih stanica s visokim proliferacijskim potencijalom nalaze se u tijelu embrija, iako su takve stanice prisutne u vrećici žumanjaka. Detaljna analiza njihove lokalizacije pokazala je da se stotine takvih stanica skupljaju u kompaktne skupine koje se nalaze u neposrednoj blizini endotela ventralne stijenke dorzalne aorte. Fenotipski su CD34CD45 + Lin stanice. Naprotiv, u vrećici žumanjaka, kao iu ostalim hematopoetskim organima embrija (jetra, koštana srž), takve su stanice pojedinačne.

Prema tome, humane embrionalne AGM-regija sadrži grozdova hematopoetskih stanica koje su usko povezane s trbušne aorte dorzalnog endotela. Taj kontakt može se pratiti i imunokemijska razini - i nakupine hematopoetskih stanica i endotelnih stanica koje eksprimiraju faktor rasta vaskularnog endotela, Flt-3 liganda i njihovih receptora Flk-1 i STK-1, kao transkripcijski faktor leukemije matičnih stanica. Derivati AGM-području mezenhimalne predstavljen guste tyazhem zaobljeni stanice koje se nalaze duž leđne aorte i dovodi do ekspresije tenascina C - glikoprotein osnovnu supstancu aktivno sudjeluje u procesima interakcije stanica-stanica i migraciju.

Multipotentnih matične stanice AGM-četvrt nakon transplantacije brzo vratiti hematopoezu kod odraslih miševa i izložen dugo vremena (do 8 mjeseci) osigurati učinkovitu hematopoezu. U vrećici žumanjaka stanica s takvim svojstvima, autori nisu otkrili. Rezultati ovog istraživanja su potvrdila drugo djelo koje je pokazalo da su rani stadiji razvoja embrija (10,5 dana) AGM regiji je jedini izvor stanica koje udovoljavaju definiciji GCW, mijeloidne i limfoidne i vraća hematopoezu u odrasloj ozračene primatelja.

Od AGM-dodijeljeno područje strome linije AGM-S3 koji podupiru stvaranje stanica u kulturi CFU-GM počinjene predaka, BFU-E, CFU-E i CFU mješovitog tipa. Sadržaj potonjeg tijekom uzgoja na feeder podsloju AGM-S3 stanica raste od 10 do 80 puta. Dakle, u mikro AGM-regija prisutnih stanica strome, učinkovito podržava krv, pa je AGM-područje može dobro poslužiti embrionalnih organe krvotvornih - konačni izvor HSC, to jest, GSK formiranje hematopoetskih tkiva odraslu životinju.

Napredni immunofenotipirovanie stanični pripravak AGM-regija, pokazala da ne samo žive multipotentnih hematopoetske stanice, već i stanice za predan mijeloidnih i limfoidnih (T i B limfociti) diferencijacije. Međutim, kad je molekularna analiza pojedinačnih CD34 + c-kit + stanica s AGM-regije pomoću lančane reakcije polimeraze otkrila aktiviranje samo betaglobin i mijeloperoksidaze, ali ne i limfoidnih gene koji kodiraju sintezu CD34, Thy-1 i 15. Djelomični specifične gene aktiviranje lozu tipične za ranih ontogenetskih stupnjeva generacije HSC i progenitornih stanica. S obzirom da je broj kommiti- Rowan stanica u AGM-području 10-dnevnog embrija 2-3 reda veličine manji nego u jetri, može se reći da je na dan 10. Embrionalnog hematopoeze u AGM je tek početak, a uglavnom hematopoetske linije već su raspoređene tijekom tog razdoblja.

Doista, za razliku od ranijih (9-11 dana) hematopoetskih matičnih stanica žumanjčana vreća i na području AGM, koji repopulacije hematopoetskih mikroklima za novorođenče, ali ne i za odrasle, hematopoetskih ishodišnih stanica 12-17 dana fetalna jetra ne zahtijeva ranog postnatalnog mikro okolinu i hematopoetskih organa zauzimaju odrasla životinja nije gori od novorođenčeta. HSC nakon transplantacije jetre fetusa odraslih hematopoiesis u ozračenih miševa primaoca je poliklonski u prirodi. Osim toga, korištenjem obilježenih kolonije se pokazalo da je rad utvrđenih klonova bili potpuno pokorava Klonska sukcesije, otkrivena u koštanoj srži odraslih. Dakle, GSK fetalna jetra označena toliko nježne uvjeti bez prestimulyatsii egzogenih citokina, već osnovne atribute odrasle HSC nisu potrebne u ranom post-embrionalne mikro okolini, u stanju dubokog odmora nakon transplantacije i mobilizirao klonoobrazovanie uzastopce u skladu s modelom klonskom sukcesiji.

Očito, to bi trebalo biti više razraditi na fenomen klonskom sukcesiji. Eritropoeze provodi hematopoetskih matičnih stanica s visokom proliferativni potencijal i sposobnost diferencijacije u svim staničnim linijama angažiranih ishodišnih krvnih stanica. Tijekom normalnog intenziteta hematopoeze većine hematopoetskih matičnih stanica u neaktivnom stanju i mobilizira na proliferaciju i diferencijaciju u nizu uzastopnih formiranja klonova. Ovaj se proces naziva klonski slijed. Eksperimentalni dokaz klonalne uzastopce krvotokom dobiveni su u studijama sa GSK označena retrovirusa prijenos gena. U odraslih životinja, hematopoeze je podržan od strane mnogih, u isto vrijeme funkcionira hematopoetskih klonova koji su izvedeni HSC. Na temelju fenomen klonskom sukcesije repopulyatsionny razvio pristup identificirati HSC. Prema tom načelu, razlikovati dugoročno HSC (dugoročni hematopoetska matičnih stanica, LT-HSC), su u mogućnosti vratiti hematopoeze sustav cjeloživotnog učenja i kratkoročno HSC, obavljati ovu funkciju za ograničeno vremensko razdoblje.

Ako uzmemo u obzir hematopoetskih matičnih stanica u smislu repopulyatsionnogo pristup, karakteristika hematopoetskih fetalnih stanica jetre je njihova sposobnost da stvaraju koloniju, koja je u veličini je mnogo više od onih s povećanjem GSK kabel krvi ili koštane srži, a to se odnosi na sve vrste kolonija. Ta činjenica ukazuje na veći kapacitet proliferacije hematopoetskih fetalnih stanica jetre. Jedinstvena značajka hematopoetskih ishodišnih stanica u jetri fetusa - kraće u usporedbi s drugim izvorima staničnog ciklusa, što je važno sa stajališta učinkovitosti naseljavanju hematopoeze u transplantacije. Analiza staničnog sastava hematopoetskih suspenzije dobivene iz izvora zrelog organizma, pokazuje da je u svim fazama pažnjom na razvoj stanica s jezgrom pogodno predstavljeni fazi diferencirane stanice, broj i fenotip koje ovise o starosti donora hematopoetske ontogenetskom tkiva. Posebno, suspenziju mononuklearnih koštane srži i kabel krvnih stanica za više od 50% se sastoji od zrelih limfoidnih stanica, dok je manje od 10% limfocita nađenih u jetri fetusa hemopoetskog tkiva. Nadalje, mijeloidne linije stanica u jetri fetusa i fetalne eritroidnih pogodno prezentirani drugi, dok je u pupkovine krvi i koštane srži granulocit-makrofaga prevladavaju elemenata.

Važno je činjenica da embrionska jetra sadrži cijeli niz najranijih prethodnika hemopoeze. Potonji uključuju eritroidne, granulopoetne, megakariopoietičke i multilinearne stanice koje stvaraju kolonije. Njihovi više primitivni preci - LTC-IC - mogućnosti za proliferaciju i diferencijaciju in vitro za 5 ili više tjedana, ali i održavati funkcionalnu aktivnost nakon primitka presatka u tijelu primatelja u alogenim, pa čak i Ksenogene transplantacija u imunodeficijentnih životinja.

Biološki nadmoć izvedivost u fetalnim stanicama jetre eritroidnih (do 90% od ukupnog broja hematopoetskih stanica) zbog potrebe da se dobije masa eritrocita naglo povećava volumen krvi od fetusa u razvoju. Fetalnog eritropoeze jetre nuklearne eritroidne prekurzore predstavljeni različitim stupnjevima zrelosti sadrži fetalni hemoglobin (a2u7), koji je s obzirom na višu sklonost kisik osigurava učinkovitu apsorpciju potonjeg s majke krvi. Intenziviranje eritropoeze u jetri fetusa je povezana s lokalnom povećanje sinteze eritropoetina (EPO). Važno je napomenuti da se provedba hematopoetskog potencijala hematopoetskih fetalnih stanica jetre dovoljno prisutnost sama eritropoetina, a loze obvezu HSC eritropoeze u koštanoj srži i krvi pupčane zahtijeva kombinaciju citokina i faktora rasta koji se sastoji od EPO, SCF, GM-CSF i IL-3. Ranoj hematopoetskih ishodišnih stanica izoliranih iz jetre fetusa bez receptora za EPO, ne reagiraju na egzogeni eritropoetin. Za indukciju eritropoeze u suspenziju mononuklearnih stanica jetre fetusa zahtjeva prisustvo naprednijim eritropoetinchuvstvitelnyh stanica s fenotipom CD34 + CD38 +, koje eksprimiraju receptor EPO.

U literaturi još uvijek nema konsenzusa o formiranju hemopoeze u embrionalnom razdoblju. Funkcionalno značenje postojanja ekstra- i intraembrijskih izvora hematopoetskih prekursorskih stanica nije utvrđeno. Međutim nema sumnje da embriogeneze ljudske jetre je središnji organ hematopoeze i 6-12 tjedana gestacije je primarni izvor hematopoetskih matičnih stanica koji naseliti slezene, timusa i koštane srži, DDR postići povezane funkcije u pre- i postnatalne razdoblja razvoj.

Ponovno treba istaknuti da je embrionalna jetra u usporedbi s drugim izvorima karakterizirana najvišim sadržajem HSC. Približno 30% CD344 stanica embrionalne jetre ima fenotip CD38. Istovremeno, broj limfoidnih prekursorskih stanica (CD45 +) u ranoj fazi hematopoeze u jetri nije veći od 4%. Utvrđeno je da je, kao i fetus od 7 do 17 tjedna trudnoće, broj B limfocita povećava progresivno s mjesečnim „korak” je 1,1%, dok je razina GSK trajno smanjena.

Funkcionalna aktivnost hematopoetskih matičnih stanica također ovisi o razdoblju embrionalnog razvoja njihovog izvora. Ispitivanje tvori aktivnost jetrenih stanica kolonija ljudskog embrija 6-8 minuta i 9-12 minuta tjedna trudnoće kada je kultiviran u polukrutom mediju u prisutnosti SCF, GM-CSF, IL-3, IL-6 i EPO pokazao da je ukupan broj kolonija u 1 , 5 puta veća kod sjetve HSV embrionalne jetre rano u razvoju. Istovremeno, broj jetrenih ishodišne stanice mijelopoezu kao CFU-GEMM, na 6-8 tjedana embriogeneze je više od tri puta više u 9-12 tjedana trudnoće. Općenito, jetre hematopoetski koloniziranja aktivnost prvom tromjesečju stanica embrionalnog trudnoće je značajno više nego što fetalnih stanica jetre u drugom tromjesečju trudnoće.

Gore navedeni podaci pokazuju da fetalna jetrena početkom embriogeneze karakteriziran, ne samo visok sadržaj ranih hematopoetskih ishodišnih stanica, ali njegova hematopoetske stanice su karakterizirana širokom rasponu diferencijacije u različitim staničnim linijama. Ove karakteristike funkcionalnu aktivnost matičnih hematopoetskih fetalnih stanica jetre može imati neki klinički značaj, jer omogućuju njihovo kvalitativna obilježja očekuje terapeutski učinak kada se izražava transplantaciju čak i malu količinu stanica dobivenih u ranim fazama trudnoće.

Ipak, problem broja hematopoetskih matičnih stanica potrebnih za učinkovitu transplantaciju ostaje otvoren i relevantan. Pokušaji se rješavaju korištenjem visokog potencijala samo-reprodukcije hematopoetskih stanica embrijske jetre in vitro uz njihovu stimulaciju citokinima i čimbenicima rasta. Uz konstantnu perfuziju u bioreaktoru ranog GSC-a embrionalne jetre, nakon 2-3 dana na izlazu, moguće je dobiti broj hemopoetskih stanica stabljike 15 puta veći od njihove osnovne razine. Za usporedbu treba napomenuti da za postizanje 20-strukog povećanja prinosa krvi HSC kabela u istim uvjetima, potrebno je najmanje dva tjedna.

Dakle, fetalna jetra razlikuje od drugih izvora hematopoetskih matičnih stanica što većim sadržajem ugovorenih i ranih krvotvornih ishodišnih stanica. U kulturi sa stanicama jetre fetusa faktora rasta s CD34 + fenotipa CD45Ra1 CD71l0W obliku 30 puta više kolonija sličnih kabel krvnih stanica, i 90 puta više od koštane srži HSC. Najviše izražen u tim izvorima razlike sadržaja ranih hematopoetskih ishodišnih stanica koje tvore kolonije miješanih - broj CFU-GEMM u jetri fetusa prelazi da pupkovine krvi i koštane srži, odnosno 60 do 250 puta.

Važno je i činjenica da je do 18. Tjedna embrionalnog razvoja (u početku hematopoeze u koštanoj srži) u provedbi hematopoetska funkcija uključuje više od 60% stanica jetre. Od prije 13. Tjedna fetalnog razvoja u ljudi su odsutni timus i timocite odnosno, transplantacije hematopoetskih fetalnih stanica jetre od 6-12 tjedna trudnoće značajno smanjuje rizik od reakcije „graft versus host” i ne zahtijeva izbor jednog histocompatible donatora, jer omogućuje relativno lako postići hemopoetski kimerizam.