Medicinski stručnjak članka
Nove publikacije
Analiza polimorfizma duljine restrikcijskih fragmenata
Posljednji pregledao: 05.07.2025
Svi iLive sadržaji medicinski se pregledavaju ili provjeravaju kako bi se osigurala što je moguće točnija činjenica.
Imamo stroge smjernice za pronalaženje izvora i samo povezujemo s uglednim medijskim stranicama, akademskim istraživačkim institucijama i, kad god je to moguće, medicinski pregledanim studijama. Imajte na umu da su brojevi u zagradama ([1], [2], itd.) Poveznice koje se mogu kliknuti na ove studije.
Ako smatrate da je bilo koji od naših sadržaja netočan, zastario ili na neki drugi način upitan, odaberite ga i pritisnite Ctrl + Enter.
Široko rasprostranjena upotreba različitih restrikcijskih endonukleaza za analizu kromosomske DNA otkrila je ogromnu varijabilnost ljudskog genoma. Čak i male promjene u kodirajućim i regulatornim regijama strukturnih gena mogu dovesti do prestanka sinteze određenog proteina ili do gubitka njegove funkcije u ljudskom tijelu, što obično utječe na fenotip pacijenta. Međutim, otprilike 90% ljudskog genoma sastoji se od nekodirajućih sekvenci, koje su varijabilnije i sadrže mnoge takozvane neutralne mutacije ili polimorfizme, te nemaju fenotipsku ekspresiju. Takve polimorfne regije (lokusi) koriste se u dijagnostici nasljednih bolesti kao genetski markeri. Polimorfni lokusi prisutni su u svim kromosomima i povezani su sa specifičnom regijom gena. Određivanjem lokalizacije polimorfnog lokusa moguće je utvrditi koji je gen povezan s mutacijom koja je uzrokovala bolest kod pacijenta.
Za izolaciju polimorfnih regija DNA koriste se bakterijski enzimi - restrikcijske regije, čiji su produkt restrikcijska mjesta. Spontane mutacije koje se javljaju na polimorfnim mjestima čine ih otpornima ili, obrnuto, osjetljivima na djelovanje specifične restrikcijske regije.
Mutacijska varijabilnost u restrikcijskim mjestima može se otkriti promjenom duljine restrikcijskih fragmenata DNA njihovim odvajanjem elektroforezom i naknadnom hibridizacijom sa specifičnim DNA sondama. U odsutnosti restrikcije u polimorfnom mjestu, na elektroforegramima će se otkriti jedan veliki fragment, a u njegovoj prisutnosti bit će prisutan manji fragment. Prisutnost ili odsutnost restrikcijskog mjesta u identičnim lokusima homolognih kromosoma omogućuje prilično pouzdano označavanje mutiranog i normalnog gena te praćenje njegovog prijenosa na potomstvo. Dakle, pri proučavanju DNA pacijenata u oba kromosoma kod kojih je restrikcijsko mjesto prisutno u polimorfnoj regiji, na elektroforegramu će se otkriti kratki fragmenti DNA. Kod pacijenata homozigotnih za mutaciju koja mijenja polimorfno restrikcijsko mjesto, otkrit će se dulji fragmenti, a kod heterozigotnih pacijenata kratki i dugi fragmenti.
[ 1 ], [ 2 ], [ 3 ], [ 4 ], [ 5 ], [ 6 ], [ 7 ], [ 8 ], [ 9 ]