Analiza polimorfizma duljine restrikcijskog fragmenta
Posljednji pregledao: 23.04.2024
Svi iLive sadržaji medicinski se pregledavaju ili provjeravaju kako bi se osigurala što je moguće točnija činjenica.
Imamo stroge smjernice za pronalaženje izvora i samo povezujemo s uglednim medijskim stranicama, akademskim istraživačkim institucijama i, kad god je to moguće, medicinski pregledanim studijama. Imajte na umu da su brojevi u zagradama ([1], [2], itd.) Poveznice koje se mogu kliknuti na ove studije.
Ako smatrate da je bilo koji od naših sadržaja netočan, zastario ili na neki drugi način upitan, odaberite ga i pritisnite Ctrl + Enter.
Široka upotreba raznih restrikcijskih endonukleaza za analizu kromosomske DNA otkrila je veliku varijabilnost u ljudskom genomu. Čak i male promjene u kodiranju i regulatornih područja strukturnih gena može dovesti do prestanka određenog sinteze proteina ili gubitak njegove funkcije u ljudskom tijelu koji obično utječe na fenotip pacijenta. Međutim, oko 90% humanog genoma sastoji nekodirajućem sekvence koje su hlapljive i pružaju više tzv neutralnim mutacija ili polimorfizama i nemaju ekspresiju fenotipski. Takva polimorfna mjesta (loci) koriste se u dijagnostici nasljednih bolesti kao genetičkih markera. Polimorfni lokusi prisutni su u svim kromosomima i povezani su s određenom regijom gena. Lokalizacija polimorfnih lokusa, može se postaviti s kojima je genom je povezan mutaciju koja je uzrokovala bolest u bolesnika.
Kako bi se izolirale polimorfne regije DNA, koriste se bakterijski enzimi - restrikcijski enzimi, čiji proizvod su restrikcijska mjesta. Spontane mutacije koje se javljaju u polimorfnim mjestima čine ih otporne ili, obrnuto, osjetljive na djelovanje specifičnog restrikcijskog enzima.
Mutacijska varijabilnost u restrikcijskim mjestima može se detektirati mijenjanjem duljine ograničenih DNA fragmenata, razdvajanjem pomoću elektroforeze i kasnije hibridizacije s specifičnim DNA probama. U nedostatku ograničenja na polimorfnom mjestu, na elektroforemrama će se detektirati jedan veliki fragment, a ako je prisutan, bit će prisutan manji fragment. Prisutnost ili odsutnost restrikcijskih mjesta u identičnom loci homolognih kromosoma omogućuje dovoljno pouzdano označiti mutanta i normalan gen i pratiti njegov prijenos na potomstvo. Dakle, kada je DNK istraživanje pacijenata u oba kromosoma koje postoji ograničenje mjesto u polimorfnih regiji na electrophoregram će prepoznati kratke fragmente DNA. Pacijenti homozigota za mutacije, što mijenja polimorfnih ograničenje stranica će se identificirati fragmenti veće dužine i heterozigoti - kratke i duge fragmenata.
[