Corynebacteriae

Difterija je akutna infektivna bolest pretežno djetinjstva koja se očituje dubokom opijanjem tijela s toksinom difterije i karakterističnom fibrinskom upalom na mjestu patogena. Ime bolesti dolazi od grčke riječi difterija - kože, filma, budući da je na mjestu uzgoja patogena gusta, sivkasto-bijela filma.

Difterije - Corynebacterium diphtheriae - prvo opažen u 1883, E. Klebs u dijelovima filma dobivenog u čiste kulture 1884. F. Leffler. Godine 1888. E. Ru i A. Yersen otkrili su njegovu sposobnost proizvodnje egzotoksina, koji igra važnu ulogu u etiologiji i patogenezi difterije. Potvrda 1892. Antitoičnog seruma E. Beringa i njegova uporaba od 1894. Godine za liječenje difterije omogućila je značajno smanjenje smrtnosti. Uspješni napad na ovu bolest započeo je nakon 1923. Godine u vezi s razvojem G. Rayon metode dobivanja difterije toksoida.

Uzrok uzročnika difterije pripada rodu Corynebacterium (klasa Actinobacteria). Morfološki se karakterizira činjenica da su stanice u obliku klupka zadebljane na krajevima (grčki sogupe - mace), oblikuju grananje, osobito u starim kulturama i sadrže granularne inkluzije.

Rod Corynebacterium uključuje veliki broj vrsta, koji su podijeljeni u tri skupine.

• Corynebacteri su paraziti ljudi i životinja i patogeni za njih.
• Corynebacteri, patogeni za biljke.
• Nepatogeni korynebakterije. Mnoge vrste Corynebacterium su normalni stanovnici kože, sluznice grla, usne grla, očiju, dišnih puteva, uretre i genitalnih organa.

[1], [2], [3], [4], [5]

Morfologija corynebakterija

C. Difterija - ravni ili blago zakrivljeni štapići duljine 1,0-8,0 μm i promjera 0,3-0,8 μm, ne stvaraju spore i kapsule. Vrlo često imaju blistere na jednom ili oba kraja, često sadrže metakromatske granule - volute žitarice (polimetafosfate), koje kad plavičasto s metilenskim plavim dobivaju plavkasto-ljubičaste boje. Za njihovo otkrivanje predloženo je poseban način bojenja prema Neisseru. U ovom slučaju, štapovi su obojeni slamnatožute žute boje, a zrnci žute boje tamno su smeđi i obično se nalaze na polovima. Corynebacterium difteria je dobro obojen s anilinskim bojama, Gram-pozitivan, ali u starim kulturama često je obezbojen i ima negativnu Gram-boju. Karakterizira ga izražen polimorfizam, osobito u starim kulturama i pod utjecajem antibiotika. Sadržaj G + C u DNA je oko 60 mola%.

Biokemijska svojstva corynebakterija

Difterije bacillus je aerobni ili fakultativne anaerobnost temperature optimum 35-37 ° C rasta (15-40 ° C za rast graničnog), optimalni pH 7,6-7,8. Medijima hranjivih tvari nije jako zahtjevan, ali raste na mediju koji sadrži serum ili krv. Difterije selektivan za bakterije su valjane ili serum Medij Roux Leffler, rast na njih pojaviti u 8-12 sati kao konveksan, veličinu igle kolonije sivo bijelo ili žuto-krem boje. Njihova površina je glatka ili blago granulirana, na periferiji kolonije nešto više prozirna nego u sredini. Kolonije se ne spajaju, što rezultira kulturom koja izgleda kao šljiva kože. Rast juha se manifestira kao jedinstvena oblak ili juha ostane prozirna, a formira se na njezinoj površini mekog film koji se postupno podebljava, raspada i pahuljice riješiti na dno.

Značaj bakterija difterije je njihov dobar rast na krvi i mediju seruma koji sadrži koncentracije kalijeva telurita koji potiskuju rast drugih bakterijskih vrsta. To je zbog činjenice da C. Diphtheria rekonstruira kalijev telurit u metalni tellurij, koji je pohranjen u mikrobne stanice, daje kolonijama karakterističnu tamnosivu ili crnu boju. Korištenje takvih medija povećava postotak sjetve bakterija difterije.

Corynebacterium diphtheriae fermentira glukoza, maltoza, galaktoza čime se dobije kiselinu bez plina, ali ne fermentira (obično) saharoze ima tsistinazu nemaju ureaza i nisu indol. Na tim osnovama, oni su različiti od onih coryneform bakterija (diphtheroids), koji su više vjerojatno da će se pojaviti na sluznici oka (Corynebacterium xerosus) i nazofarinksa (Corynebacterium pseiidodiphtheriticum) i drugih diphtheroids.

U prirodi postoje tri glavne varijante (biotip) difterije bacilusa: gravis, intermedini i mitisa. Razlikuju se morfološkim, kulturnim, biokemijskim i drugim svojstvima.

Podjela difterijske bakterije u biotipove napravljena je uzimajući u obzir oblike difterije kod bolesnika s kojima su oni dodijeljeni najvećom frekvencijom. Tip gravisa češće se izdvaja od bolesnika s teškim difterijom i uzrokuje bjesnoće skupine. Tip mitisa uzrokuje lakše i sporadičnije slučajeve bolesti, a tip intermedijuma zauzima međupoložaj između njih. Corynebacterium belfanti, koji se prethodno pripisuje biotipu mitisu, izdvaja se u zasebnom, četvrtom, biotipu. Njegova glavna razlika od biotipa gravis i mitisa je sposobnost vraćanja nitrata u nitrite. Soj Corynebacterium belfanti imaju izražene ljepljive svojstva, a među njima se nalaze i toksigenske i netoksigne varijante.

[6], [7], [8], [9], [10]

Antigena struktura corynebakterija

Corynebacterium je vrlo heterogen i mozaik. Uzročnici difterije svih triju tipova otkrili su nekoliko desetaka somatskih antigena, prema kojima su podijeljeni u serotipove. U Rusiji je usvojena serološka klasifikacija prema kojoj se razlikuju 11 serotipova difterijske bakterije od kojih su 7 primarna (1-7) i 4 dodatna, rijetka serotipa (8-11). Šest serotipova (1, 2, 3, 4, 5, 7) su od gravis tipa, a pet (6,8,9,10,11) su mitis tipa. Nedostatak metode serotipizacije je da mnogi sojevi, naročito netoksični, imaju spontanu aglutinaciju ili polaglutnostljivost.

[11]

Corynebacterium diphtheriae

Predložene su različite sheme tipiranja faga za diferencijaciju bakterija difterije. U Shemi D. M. Krylova koristeći set faga 9 (A, B, C, D, F, G, H, I, K) mogu biti unošeni većinu Toksikogene i nontoxigenic sojeva tipa gravis. S obzirom na osjetljivost prema navedenoj faga, kao kulturu, antigena svojstva i sposobnost za sintezu proteina koritsiny (baktericidna) MD Krylov pridružen odvojene grupe 3 Vrsta Corynebacteria gravis (I-III). U svakoj od njih postoje podgrupe toksigenskih i netoksigentnih analoga uzročnika difterije.

Otpornost corynebakterija

Corynebacterium diphtheriae pokazuje veliku otpornost na niske temperature, ali brzo propada na visokoj temperaturi: na 60 ° C - 15-20 min, kod ključanja - nakon 2-3 min. Sve dezinficijensi (lizol, fenol, kloramin, itd.) U uobičajenoj koncentraciji uništavaju ga za 5-10 minuta. Međutim, uzročnik difterije podnosi dobro sušenje i može dugo ostati održiv u suhoj sluzi, sline, u česticama prašine. U finom raspršenom aerosolu, bakterije difterije ostaju održive tijekom 24-48 sati.

Faktori patogenosti corynebakterija

Patogenost Corynebacterium diphtheriae određena je prisutnošću brojnih čimbenika.

Čimbenici prianjanja, kolonizacije i invazije

Strukture odgovorne za adhezije nisu identificirane, ali bez njih bakterija difterije nije mogla kolonizirati stanice. Njihovu ulogu izvode neke komponente stanične stijenke patogena. Invazivna svojstva uzročnika su povezana s hijaluronidazom, neuraminidazom i proteazom.

Otrovni glikolipid sadržan u staničnoj stijenci patogena. Predstavlja 6,6'-diestera trehaloze sadrži korinemikolovuyu kiselina (S32N6403) i korinemikolinovuyu kiselina (Sz2N62Oz) u ekvimolarnom odnosu (trehaloza 6,6'-dikorinemikolat). Glikolipid ima razoran učinak na stanice tkiva na mjestu širenja patogena.

Exotoxin, koji određuje patogenost patogena i prirodu patogeneze bolesti. Nesotigne varijante C. Difterija ne uzrokuju difteriju.

Eksotoksin je sintetiziran kao neaktivni prekursor, jedan polipeptidni lanac s m. 61 kD. Njegova aktivacija se izvodi svoju bakterijske proteaze koja reže na dva polipeptida povezana disulfidnim mostovima između peptida A (21 kDa masa) i B (39 kDa) masa. Akceptor peptid obavlja funkciju - prepozna receptora veže na njega i stvara intramembranska kanal kroz koji ulazi u stanicu i peptida prodaje biološke aktivnosti toksina. Peptida je enzim ADP-riboziltransferazu koji omogućava prijenos adenozin difosfat riboze iz NAD na jedan od aminokiselinskog ostatka (histidin) na protein faktor elongacije EF-2. Kao rezultat modifikacije EF-2 gubi svoju aktivnost, a to dovodi do supresije sinteze proteina u koraku ribosoma translokacije. Toksin je sintetiziran samo one C. Diphtheriae, koje su u svojim kromosomske gene pregledaju pretvaranje profaga. Kod plazmida koji kodira sintezu toksin je monocistronske, a sastoji se od 1,9 tisuća parova baza i ima toxP promotor i 3 mjesta :. ToxS, toxA i toxB. Zemljište toxS kodira 25 aminokiselinskih ostataka peptida (pruža prinosa toksina kroz membranu u periplazmatski prostor bakterijske stanice), toxA signal - toxB 193 aminokiselinskih ostataka peptida A i - 342 aminokiselinskih ostataka u toksin peptida. Gubitak stanica profaga ili mutacija u Tox-plazmida bi stanica malotoksigennoy. Naprotiv, lysogenization nontoxigenic C. Diphtheriae pretvaranje faga pretvara ih u Toksikogene bakterija. To je dokazano nedvosmisleno: toxigenicity od difterije bakterija ovisi o njihovoj lysogenization pretvara Tox-korinefagami. Korinefagi integriran u kromosomu coryneform bakterija korištenjem rekombinacije mehanizam na specifičnom mjestu i difterije bakterijskih sojeva mogu sadržavati u kromosomu na 2 mjesta rekombinacije (attB) i korinefagi integrirani u svakoj od njih istoj frekvenciji.

Genetička analiza je niz nontoxigenic soj bakterije difterije provedena obilježenih DNA sonde koje nose fragmente Tox-operon korinefaga pokazali da je njihova kromosomi su DNA sekvence homologne Tox-operon korinefaga ali kodiraju neaktivne ili polipeptida, ili u " tiho "stanje, tj. Neaktivno. S tim u vezi je vrlo važan epidemiološki pitanje je da li nontoxigenic bakterije difterije pretvoriti u Toksikogene in vivo (u tijelu), baš kao što je to in vitro? Mogućnost poput pretvorbe nontoxigenic kultura u Corynebacteria Toksikogene pomoću fag pretvorbe prikazan je u pokusima na zamorcima, embrija kokoši i bijele miševe. Međutim, da li se to događa u toku prirodnog procesa epidemija (i ako postoji, kako često), a to nije bilo moguće utvrditi.

S obzirom na činjenicu da je toksin difterije u tijelu bolesnika je selektivno i specifične učinke na pojedinim sustavima (uglavnom utječe sympatho-nadbubrežna sustav, srce, krvne žile i perifernih živaca), onda očito, ne samo što inhibira biosintezu proteina u stanicama, ali i uzrokuje druge poremećaje metabolizma.

Za otkrivanje toksičnosti bakterija difterije mogu se koristiti sljedeće metode:

• Biološki testovi na životinjama. Intrakutana infekcija zamoraca s filtratom bouillon kulture difterijske bakterije uzrokuje nekrozu na mjestu primjene. Jedna minimalna smrtonosna doza toksina (20-30 ng) ubija zamorac težine 250 g subkutanom injekcijom 4-5 dan. Najkarakterističnija manifestacija djelovanja toksina je poraz nadbubrežnih žlijezda, povećana je i oštro hiperemična.
• Infekcija zametaka pilića. Toksin difterije uzrokuje smrt.
• Infekcija staničnih kultura. Difterijska toksin uzrokuje poseban citopatski učinak.
• Metoda ispitivanja imunosorbenta povezanih enzimom na krutoj fazi uporabom antitoxina obilježenih peroksidazom.
• Upotreba DNK sonde za izravno otkrivanje toksoperona u kromosomu difterijske bakterije.

Međutim, najjednostavniji i najčešći način određivanja toksičnosti difterijske bakterije je serološka metoda precipitacije u gelu. Bit je kako slijedi. Traka sterilnog filter papira mjerenje 1,5 x 8 cm navlaži antitoksičan difterije seruma koji sadrži 500 AE 1 ml, te se nanosi na površinu medija u petrijevku. Šalica se suši u termostatu 15-20 minuta. Ispitivane kulture inokuliraju se s plakovima na obje strane papira. Na jednom šalicu posijano je nekoliko sojeva, od kojih jedan, za koje se zna da je toksičan, služi kao kontrola. Čaše s kulturama inkubirane su na 37 ° C, rezultati omogućuju 24-48 sati. Zbog interdiffusion gel protuotrov i toksina na mjestu njihove interakcije tvori bistru precipitinsku liniju koja spaja sa precipitinsku kontrolne linije Toksikogene soja. Trake nespecifične taloženja (formiraju, ako je serum protuotrov prisutan osim male količine drugih antimikrobnih antitijela) pojaviti kasnije, blagi i ne spajaju s trakom za kontrolu taloženje soja.

Postinfekcijski imunitet

Snažne, uporni, praktički cjeloživotni, ponovljeni slučajevi bolesti se rijetko vide - u 5-7% pacijenata koji su se oporavili. Imunost je uglavnom protutijela, antimikrobna antitijela su manje važna.

Da bi se procijenio razina antidiphtherijske imunosti, Shikov test je prije bio široko korišten. U tu svrhu, 1/40 dim toksina za zamorac ubrizgano je intradermalno djeci u volumenu od 0,2 ml. Ako ne antitoksičan imunitet 24-48 sati na mjestu injekcije pojavljuje se crvenilo i oteklina više od 1 cm u promjeru. Takva pozitivna reakcija Schick označava potpunu odsutnost anti-toksin, ili da je sadržaj manji od 0,001 AU / ml krvi. Negativna reakcija Chick se opaža kada je sadržaj antitoxina u krvi veći od 0,03 AE / ml. Ako je sadržaj antitoxina ispod 0,03 AE / ml, ali iznad 0,001 EE / ml, reakcija Shick može biti ili pozitivna ili ponekad negativna. Osim toga, sam toksin ima izraženu alergijsku svojinu. Stoga, kako bi se utvrdilo razinu otpornosti antidiphtheria (kvantitativni sadržaj protuotrov) bolje korištenje TPHA diagnosticum s eritrocita osjetljivi na tetanusa difterije.

Epidemiologija difterije

Jedini izvor infekcije je osoba - bolestan, oporavak ili zdrav nosilac. Infekcija se javlja kroz kapljica u zraku, klima-prašine strane, kao i kroz razne predmete koji su bili u uporabi u bolesnika ili zdravih bakterija prijevoznika: Kuhinjske, knjige, posteljinu, igračke, itd U slučaju infekcije hrane (mlijeko, vrhnje, itd .... Itd.), moguće je dobiti zaražen putem prehrambene rute. Najmasovniji izlučivanje patogena javlja se u akutnom obliku bolesti. Međutim, najviše epidemiološki važni su ljudi s brisanim atipičnim oblicima bolesti, budući da često nisu hospitalizirani i nisu odmah vidljivi. Pacijent difterije je zarazan tijekom cijelog razdoblja bolesti i dijela perioda oporavka. Prosječno razdoblje bakterijskog transporta u konvalescentima varira od 2 do 7 tjedana, ali može trajati i do 3 mjeseca.

Posebnu ulogu u epidemiologiji difterije igraju zdrave bakterijske nosače. U uvjetima sporadičnog pobola, oni su glavni distributeri difterije, pridonoseći očuvanju patogena u prirodi. Prosječno trajanje prijevoza toksigenskih sojeva je nešto manje (oko 2 mjeseca) od netoksičnih sojeva (oko 2-3 mjeseca).

Razlog za stvaranje zdravog nosača toksigenskih i neotigentnih bakterija difterije nije u potpunosti otkriven, budući da ni visoka razina antitooksne imunosti ne osigurava uvijek potpuno oslobađanje organizma od patogena. Možda je razina antibakterijskog imuniteta od određene važnosti. Prijevoz toksigenskih sojeva difterijske bakterije je od primarne epidemiološke važnosti.

[12], [13], [14], [15], [16], [17], [18], [19],

Simptomi difterije

Ljudi bilo koje dobi su osjetljivi na difteriju. Uzročeno sredstvo može prodrijeti u ljudsko tijelo kroz sluznice različitih organa ili kroz oštećenu kožu. Ovisno o lokalizaciji procesa, razlikuju se difterija grla, nosa, grkljana, uha, oka, genitalnih organa i kože. Mogući mješoviti oblici, na primjer difterija grla i kože itd. Razdoblje inkubacije - 2-10 dana. S klinički izraženom obliku difterije, lokalizacija patogena proizvodi karakterističnu fibrinsku upalu sluznice. Toksin koji proizvodi patogen najprije utječe na epitelne stanice, a zatim na obližnje krvne žile, povećavajući njihovu propusnost. Efluenta eksudata sadrži fibrinogen, koagulacije što ima za posljedicu formiranje na površini sluznice sivo-bijele filmski napadima koji čvrsto zalemljen na određeno tkivo trganjem od njega uzrok krvarenja. Posljedica poraza krvnih žila može biti razvoj lokalnog edema. Posebno opasno je difterija ždrijelo, jer to može uzrokovati difterije sapi zbog edema larinksa sluznice i glasnica, koja je ranije umre od gušenja 50-60% bolesnika s djecom difterije. Difterijski toksin, koji ulazi u krv, uzrokuje opću duboku opijenost. Djeluje prvenstveno na kardiovaskularni, simpatički nadbubrežni sustav i periferne živce. Tako, simptomi difterije nastaju iz kombinacije lokalnih simptoma, ovisno o mjestu ulaznih vrata, i opće simptome uzrokovane trovanjem toksin, očituju se u obliku nepokretljivost, pospanost, bljedilo kože, snižavanje krvnog tlaka, miokarditis, paralizu i ostale poremećaje perifernih živaca. Difterija u cijepljenoj djeci, ako je prisutna, javlja se u pravilu u blagom obliku i bez komplikacija. Smrtnost u razdoblju prije primjene seroterapije i antibiotika bila je 50-60%, sada - 3-6%.

Laboratorijska dijagnostika difterije

Jedina metoda mikrobiološke dijagnoze difterije je bakteriološka, uz obvezno ispitivanje izolirane korynebakterije za toksigenicitet. Bakteriološke studije o difteriji provode se u tri slučaja:

• za dijagnozu difterije kod djece i odraslih osoba s akutnim upalnim procesima na području grla, nosa, nazofarinksa;
• o epidemiološkim indikacijama osoba koje su bile u kontaktu s izvorom uzročnika difterije;
• osobe koje su nedavno primljene u sirotište, dječje vrtiće, pansionne škole i druge posebne ustanove za djecu i odrasle osobe, kako bi se među njima identificirali mogući bakterijski nosači difterije bacil.

Materijal za studiju su sluz iz grla i nosa, filma s krajnika ili drugih sluznica, koje su mjesto na ulaznim vratima patogena. Usjeva proizvesti telluritovye na serumu ili krvi i medij istovremeno despread seruma Roux (presavijeni konjskog seruma) ili Leffler (3 dijela goveđeg seruma i 1 dijela šećera smjese), u kojem se pojavljuje rast već nakon 8-12 sati. Obnovljeni kultura je identificiran Corynebacteria agregat morfološke, kulturne i biokemijska svojstva moguće pomoću metode sumpor i fag tipkati. U svim slučajevima potrebno je provesti toksičnost jednom od gore navedenih metoda. Morfološke osobine Corynebacterium bolje pokusa pomoću tri metode pripreme bojenje razmaza: gram, Neisser i metilen plavo (ili toluidin plavo).

Liječenje difterije

Specifično liječenje difterije je upotreba antitoidni serum koji sadrži najmanje 2000 IU po ml. Serum se daje intramuskularno u dozama u rasponu od 10 000 do 400 000 IU, ovisno o težini tijeka bolesti. Učinkovita metoda liječenja je uporaba antibiotika (penicilini, tetraciklini, eritromicin, itd.) I sulfanilamidni pripravci. Kako bi stimulirali razvoj vlastitih antitoxina, može se koristiti anatoksin. Za oslobađanje bakterijskog transporta treba koristiti one antibiotike na koje je taj corynebakterij vrlo osjetljiv.

Specifična profilaksa difterije

Glavna metoda borbe protiv difterije je masa rutinsko cijepljenje stanovništva. U tu svrhu, razni oblici koriste cjepiva, uključujući i kombinaciju, tj. E. U cilju istovremenog stvaranja imuniteta protiv nekoliko patogena. Najčešće u Rusiji primio DTP cjepivo. Se adsorbira na aluminijev hidroksid suspenzija pertussis ubijenih formalinom ili timerosala (20 milijardi u 1 ml), a sastoji se od difterija toksoid dozu za flokulaciju 30 jedinica i 10 jedinica toksoid tetanusa vezanja 1 ml. Cijepiti djecu od 3 mjeseca starosti, a zatim provesti ponovno cijepljenje: prvo 1,5-2 godina kasnije u dobi od 9 i 16 godina, a zatim svakih 10 godina.

Zahvaljujući masovno cijepljenje počelo u SSSR-u 1959, incidencija difterije u zemlji 1966. Godine u odnosu na 1958. Smanjen 45 puta, a njegova stopa u 1969. Iznosio je 0,7 na 100 000 stanovnika. Slijedio 80-ih godina. XX stoljeća. Smanjenje volumena cijepljenja dovelo je do ozbiljnih posljedica. U godinama 1993-1996. Rusija je bila pod utjecajem epidemije difterije. Odrasli su bili bolesni, uglavnom ne cijepljeni, i djeca. Godine 1994. Registrirano je gotovo 40 tisuća pacijenata. U svezi s tim, nastavljeno je masovno cijepljenje. Tijekom tog razdoblja cijepljeno je 132 milijuna ljudi, uključujući 92 milijuna odraslih osoba. U razdoblju 2000-2001. Pokrivenost djece s cijepljenjem u propisanom razdoblju bila je 96%, a povišena vakcina - 94%. Zahvaljujući tome, incidencija difterije u 2001. Godini pala je za 15 puta u odnosu na 1996. Međutim, kako bi se donijeti pojavu nekoliko sporadičnih slučajeva, potrebno je pokrivenost cijepljenje najmanje 97-98% djece i osigurati masovno ponovnog cijepljenja u kasnijim godinama. Da bi se postigla potpuna eliminacija difterije u nadolazećim godinama, malo je vjerojatno da će biti moguće zbog rasprostranjenog nosača toksigenskih i netoksigentnih bakterija difterije. To će potrajati neko vrijeme za rješavanje ovog problema.