Imunofenotipizacija hemoblastaza

Značajan napredak u hematoloških studijama povezane u posljednjih nekoliko godina uz korištenje suvremenih imunoloških metoda i automatiziranih alata za analizu i sortiranje stanice periferne krvi i koštane srži - cytometers protoka. Tradicionalna morfološka i citokemijske proučavanje bolesti supstrat stanica (krv, crvena koštana srž, limfni čvorovi, slezena, itd), u mnogim slučajevima, posebno u limfoproliferacijskih bolesti, ne otkrivaju cijelu paletu mogućnosti među morfološki slične oblike i identificirati porijeklo patološkom klon , Ti se problemi mogu riješiti samo proučavanjem imunoloških svojstava stanica. Svaka faza diferencijacije hematopoetskih stanica ima svoj vlastiti skup antigena koji se nalaze na međunarodnoj klasifikaciji poznatoj kao diferencijacije i diferencijacije su podijeljeni u klastere, označena kao CD.

Na blok diferencijacije neoplastičnih promjena može pojaviti u bilo kojoj fazi razvoja normalne stanice, što rezultira u stanični klon patološki supstrat definiranje bolesti i koji imaju istu imunoloških (ili fenotipski) karakteristiku. Nakon studija tih markera na stanicama može se odrediti bilo kojem obliku ili izvedbi bolesti u skladu, na primjer na temelju imunološke stanice fenotip diferencijalnoj dijagnozi, koji je najteže u limfoproliferativnih poremećaja, zato što su glavni stanični supstrata patoloških bolesti su gotovo isti tip stanica morfoliški.

Fenotipizacija omogućuje korištenje monoklonska protutijela tipičan blastic stanice i odrasle mijeloične krv, mono-, limfocita serije u prisutnosti antigena (diferencijaciju receptora) u stanične stijenke. U dijelu "Procjena imunološkog stanja organizma", djelomično su opisane karakteristike i dijagnostička značajnost staničnih markera; U nastavku je kratak opis antigenskih staničnih markera primijenjenih na dijagnozu hemoblastoze. Na membrane krvnih stanica i crvene koštane srži mogu se identificirati sljedeći antigeni (markeri).

• CD2 je monomerni transmembranski glikoprotein. Ona je prisutna na površini svih cirkulirajućih T-limfocita i nekih NK-limfocita. CD2 sudjeluje u procesu alternativne aktivacije T-limfocita. Detekcija CD2 pomoću monoklonskih protutijela u kliničkoj praksi koristi se za fenotipiranje akutnih leukemije T-stanica, limfoma, kroničnih upalnih i imunodeficientnih stanja.
• CD3 - proteinski kompleks povezan s antigen specifičnim T-staničnim receptorom, glavni je funkcionalni marker T-limfocita. Omogućuje prijenos aktivacijskog signala iz membrane na citoplazmu stanice. Određivanje CD3 navedeno za dijagnosticiranje akutne leukemije T-stanica, limfome (CD3 nije izražen u ne-T stanice limfnih neoplazme), i imunodeficijencije bolesti.
• CD4 - transmembranski glikoprotein izražen podskup T pomagač (zavojnice) koji čini oko 45% limfocita u perifernoj krvi. U ranim fazama razvoja limfocita u timusu, CD4 antigena, kao i CD8, izrazio sve kortikalne limfocita. Medularni timociti, čiji je fenotip sličan zrelim CD4 + T-stanicama periferne krvi (T-pomoćnici), već izražavaju CD4 ili CD8 receptore. U perifernoj krvi, do 5% stanica istodobno je obilježeno CD4 i CD8. Mala ekspresija CD4 je moguća na nekim monocitnim stanicama. CD4 ekspresira u većini slučajeva, limfom T-stanica, uključujući i mycosis fungoides, i u HTLV-u pridružen T stanica (HTLV leukemije - humani T-limfotropični virus - Human T-limfotropični virus).
• CD5 - glikoprotein s jednim lancem, prisutan na svim zrelim T-limfocitima i većini timocita, slabo je ekspresiran B-limfocitima. CD5 je detektiran na neoplastičnim stanicama kronične limfocitne leukemije B-stanica i središnjem limfomu. U ostalim vrstama malignih limfoidnih bolesti - folikularni limfom, leukemije dlakave stanice, limfom velikih stanica - CD5 nije ekspresiran.
• CD7 je jednolančani protein, najraniji marker za diferencijaciju T-stanica. Izražava se pro-T-limfocitima čak i prije nego što migriraju u timus. CD7 je detektiran na većini NK stanica, slaba ekspresija je zabilježena na monocitima. B-limfociti i granulociti ne sadrže ovaj antigen. Definicija CD7 koristi se za dijagnozu limfoma, dječje limfoblastične leukemije T-stanica.
• CD8 je protein koji se sastoji od dva polipeptidna lanca povezana disulfidnim mostovima. Izražava se podpopulacijom citotoksičnih i supresorskih T limfocita, koji sadrže 20-35% limfocita perifernih krvi. Ovaj antigen također ima NK limfocite, kortikalne timocite, 30% medularnih timocita i subpopulaciju crvenih stanica koštane srži. CD8 se ispituje za kvantitativnu procjenu sadržaja T-supresora (vidjeti poglavlje "T-limfociti-supresori u krvi" gore).

• CD10 je endopeptidaza povezana sa staničnom membranom. CD10 izražava mlade oblike limfocita B i subpopulaciju kortikalnih limfocita. CD10 ekspresiraju sve stanice ALL.
• CD11c ekspresioniraju makrofage, monocite, granulocite, NK stanice i stanice leukemije dlakave stanice na staničnoj membrani.
• CD13 - glikoprotein izražen stanice mijelomonocitnoj niza (ishodišne stanice, neutrofili, bazofili, eozinofili, monociti i stanica mijeloidne leukemije). Odsutan je u T i B limfocitima, eritrocitima i trombocitima.
• CD14 je površinski membranski glikoprotein. Uglavnom se izražavaju monociti i makrofagi. CD14 se detektira u više od 95% monocita periferne krvi i koštane srži. U akutnoj mijeloblastičnoj leukemiji opažena je snažna ekspresija CD14. U akutnoj i kroničnoj limfoblastičnoj leukemiji ovaj antigen nije ekspresiran.
• CD15 je oligosaharid. Sudjeluje u procesima fagocitoze i kemotaksije. Ovaj antigen prisutan je na površini zrelih granulocita i Berezovsky-Sternbergovih stanica. Ekspresija CD15 antigena detektirana je u Hodgkinovoj bolesti. U ne-Hodgkinovim limfomima CD15 se u većini slučajeva ne otkriva.
• CD16 se eksprimira na površini granulocita, monocita, makrofaga i NK stanica. Svi limfociti koji eksprimiraju ovaj antigen imaju sposobnost stanične citotoksičnosti ovisne o antitijelima. CD16 je određen kod tipiziranja kroničnih mijelocitnih leukemija, kako bi se karakterizirale NK stanice.
• CD19 je glikoprotein prisutan na svim periferijskim B limfocitima, kao i na svim B prekursorima. Odsutan je na plazma stanicama. Ovo je najraniji marker B-stanica, igra važnu ulogu u reguliranju aktivacije i proliferacije B-limfocita. CD19 se eksprimira na svim neoplastičnim stanicama akutne leukemije podrijetla B stanica, te je također prisutna u nekim oblicima akutne monoblastne leukemije.
• CD20 je ne-glikozilirani protein. U ontogenezi B limfocita, CD20 antigen pojavljuje se nakon CD19 u fazi diferencijacije limfocita prije B stanice. Odsutan je na plazmi membrani plazma stanica. Izražava se u ALL, kroničnoj limfocitnoj leukemiji B stanice, leukemiji dlakave stanice, Burkittovom limfomu i vrlo rijetko u akutnoj monoblastičnoj leukemiji.
• CD21 je glikoprotein, u značajnoj količini prisutan je na B-limfocitima u limfoidnim organima iu maloj količini na B-stanicama periferne krvi. CD21 je receptor za Epstein-Barr virus.
• CD22 je protein koji se sastoji od dva polipeptidna lanca. Izražava se na membrani većine B-limfocita, uključujući i progenitorske stanice (prolymphocytes). Antigen se ne ekspresira na B-limfocitima (plazma stanice) nakon njihove aktivacije. Najizraženija ekspresija CD22 je otkrivena na stanicama s leukemijom dlakave stanice, slabo - u mijeloidnim leukemijama i ne-T-stanicama ALL.
• CD23 je glikoprotein ekspresiran aktiviranim B-limfocitima periferne krvi u mnogo većoj mjeri. CD23 posreduje citotoksičnost i fagocitozu ovisnu o IgE pomoću makrofaga i eozinofila.
• CD25 je jednolančani glikoprotein identificiran kao receptor s niskim afinitetom za IL-2. Taj receptor eksprimiran je na aktiviranim T-limfocitima i, pri manjoj gustoći, na aktiviranim B-stanicama. U perifernoj krvi zdravih ljudi antigen je prisutan u više od 5% limfoidnih stanica.
• CD29 je fibronektinski receptor. To je široko rasprostranjeno u tkivima, izraženo je leukocitima. CD29 detekcija na periferijskim krvnim stanicama koristi se za tipizaciju subpopulacije T stanica koje imaju CD4 + CD29 + fenotip, koji se naziva pomoćnik tipa 2 (Th2). Te stanice, kroz proizvodnju limfokina, sudjeluju u realizaciji humoralnog imunološkog odgovora.
• CD33 je transmembranski glikoprotein. Ona je prisutna na površini stanica mijeloidnih i monocitnih serija. Na površini monocita i, u manjoj mjeri, nalazi se granulociti periferne krvi. Približno 30% crvenih stanica koštane srži eksprimiraju CD33, uključujući mijeloblaste, promijelocite i mijelocite. Antigen je odsutan na membranama pluripotentnih matičnih stanica. CD33 se koristi za karakterizaciju stanica u mijeloidnim leukemijama. Stanice leukemije limfoidnog i eritroidnog porijekla ne eksprimiraju CD33.
• CD34 je fosfoglikoprotein, izražen pomoću hematopoetskih progenitorskih stanica, uključujući monopotentne matične stanice. Najizrazitiji izraz Ar zapažen je u ranim progenitorima; kada stanice zrele, ekspresija marker pada. CD34 se također nalazi na endotelnim stanicama. CD34 se koristi za karakterizaciju stanica akutne mijelogene i limfoblastične leukemije. Kod kronične limfocitne leukemije i limfoma, ekspresija CD34 antigena nije otkrivena.

• CD41a je eksprimiran pomoću trombocita i megakariocita. Monoklonalna antitijela za otkrivanje CD41a koriste se za dijagnosticiranje megakaryoblastične leukemije. Uz Glązmannovu trombazeniju, ekspresija tog antigena je odsutna ili značajno potisnuta.
• CD42b je membranski glikoprotein koji se sastoji od dva polipeptidna lanca. Oznaka se nalazi na površini pločica i megakariocita. U kliničkoj praksi otkrivanje CD42b se koristi za dijagnosticiranje trombocitopatije - Bernard-Soulierov sindrom.
• CD45RA pripada klasi transmembranskih glikoproteina. Ovo je čest leukocitni antigen. Izražava se na staničnoj membrani B-limfocita, u manjoj mjeri T-limfocita i na zrelim medularnim timocitima. Marker nije eksprimiran pomoću granulocita.
• CD45RO je izoforma male molekularne mase CD45RA - uobičajenog leukocita Ag. Nađene su na T-stanicama (T-limfociti memorije), subpopulacijama B-limfocita, monocita i makrofaga. Monoklonska antitijela na interakciju s najviše CD45RO thymocyte subpopulacija preostalih CD4 + i CD8 + T-limfocita i zrele T-stanice aktivirane. Stanice mijelomonocitnog porijekla, granulociti i monociti također nose taj antigen. Otkriven je u centroblastičnim i imunoblastičnim limfomima.
• CD46-O-glikozilirani dimer. To široko je rasprostranjena u tkivima i izraženi Ti B-limfocite, monocite, granulocite, NK-stanice, pločice, endotelne stanice, fibroblaste, ali nije prisutan na površini eritrocitima. CD46 osigurava zaštitu tkiva od djelovanja komplementa.
• CD61 je antigen trombocita. Izražava se na trombocitima periferne krvi i crvenoj koštanoj srži, kao i na megakaryocitima i megakaryoblastima. Njegova definicija koristi se kao marker za akutnu megakaryoblastičnu leukemiju. Ekspresija antigena je odsutna ili potisnuta kod bolesnika s Glanzmann trombastenijom.
• CD95, također nazvan Fas ili APO-1, transmembranski je glikoprotein, član obitelji receptora faktora tumorske nekroze. Izražava se u značajnim količinama na T-limfocitima perifernih krvi (CD4 + i CD8 +) i, u manjoj mjeri, na B-limfocitima i NK stanicama. Ovaj antigen se također eksprimira na granulocitima, monocitima, stanicama tkiva i neoplastičnim stanicama. Vezanje CD95 na Fas ligand (CD95L) inducira apoptozu u stanicama.
• CD95L ili Fas ligand, membranski protein koji pripada obitelji receptora faktora tumorske nekroze. Ovaj antigen eksprimira se citotoksičnim T limfocitima, NK stanicama i vrlo često tumorskim stanicama; glavni induktor apoptoze u stanicama.
• HLA-DR je monomorfna odrednica molekula klase II glavnog ljudskog histokompatibilnog kompleksa (HLA). Marker je izražen na Langerhansovih stanica, dendritičkih stanica u limfoidnim organima, te određene vrste makrofagi, B limfocitima, aktiviranim T-stanicama i timus epitelne stanice. Test za ovaj marker upotrijebljen je za kvantificiranje aktiviranih T-limfocita s fenotipom CD3 + HLA-DR +.

Pomoću različitih izbora monoklonskih antitijela na markere, moguće je napraviti fenotipski portret stanica karakterističnih za određeni oblik leukemije.

Osim pomoću imunofenotipizacija tehnike za dijagnostiku i diferencijalnu dijagnozu hematoloških zloćudnih bolesti, osobito važno okrenuo njihovo korištenje u procesu liječenja procijeniti stanje remisije i preostalog stanovništva leukemijskih stanica. Poznavajući fenotipske „portret” eksplozija stanice u razdoblju od dijagnoze do tih markera može naći stanica leukemije klon u remisiji, a od povećanja njihovog broja - predvidjeti razvoj recidiva dugo (za 1-4 mjeseci) dok se njenih kliničkih i morfoloških osobina.

[1], [2], [3], [4],