Karyotyping

Za proučavanje kromosoma često se koriste kratkotrajne kulture krvi, kao i stanice koštane srži i kulture fibroblasta. Krv isporučena u laboratorij s antikoagulansom podvrgava se centrifugiranju za precipitaciju crvenih krvnih stanica, a leukociti se inkubiraju u mediju kulture 2-3 dana. Fitohemaglutinin se dodaje u uzorak krvi, jer ubrzava aglutinaciju eritrocita i stimulira podjelu limfocita. Najprikladnija faza za proučavanje kromosoma je metafaza mitoze, pa se kolhicin koristi za zaustavljanje podjele limfocita u ovoj fazi. Dodavanje ovog lijeka u kulturu dovodi do povećanja udjela stanica koje su u metafazi, tj. U fazi staničnog ciklusa, kada se najbolje vide kromosomi. Svaki kromosom replikira (proizvodi vlastitu kopiju) i nakon prikladnog bojanja vidljivo je u obliku dva kromatida pričvršćena na centromere ili središnje suženje. Stanice se zatim tretiraju hipotoničnom otopinom natrijevog klorida, fiksiraju i oboje.

Za bojanje kromosoma češće se koriste Romanovsky-Giemsa boja, 2% acetaminomina ili 2% acetazarina. Oni kljucaju kromosome u potpunosti, ravnomjerno (rutinska metoda) i mogu se koristiti za identifikaciju numeričkih anomalija ljudskih kromosoma.

Kako bi se dobila detaljna slika strukture kromosoma, identifikacija (određivanje) pojedinačnih kromosoma ili njihovih segmenata, koriste se različite metode diferencijalnog bojenja. Najčešće korištene metode su Giemsa, kao i G- i Q-savijanje. Mikroskopski pregled lijeka duž duljine kromosoma otkriva niz boja (heterokromatina) i neobloženih (eukromatina) bendova. Lik u poprečnom štipaljku dobivenom u ovom slučaju omogućuje identifikaciju svakog kromosoma u skupu, budući da izmjene pruga i njihove veličine su strogo individualne i konstantne za svaki par.

Fotografira se metafazne ploče pojedinih stanica. Pojedinačni kromosomi su izrezani iz fotografija i zalijepljeni na list papira kako bi; takva slika kromosoma zove se kariotip.

Korištenje dodatnih bojenja, kao i nove metode za dobivanje kromosomskih pripravaka, koje omogućuju duljinu istezanja kromosoma, značajno povećavaju točnost citogenetske dijagnostike.

Razvijena je posebna nomenklatura koja opisuje ljudski kariotip. Normalan kariotip muškarca i žene određen je kao 46, XY i 46, odnosno XX. U Downovom sindromu, karakteriziranu prisutnošću dodatnog kromosoma 21 (trisomija 21), ženski kariotip opisan je kao 47, XX 21+, a muškarci - 47, XY, 21+. U nazočnosti strukturne anomalije kromosoma potrebno je upozoriti na promijenjenu dugu ili kratku ruku: slovo p označava kratku ruku, q dugu ruku i t translokaciju. Stoga, kada je kratka ruka kromosoma 5 (sindrom "mačka-krik") izbrisan, ženski kariotip opisan je kao 46, XX, 5p-. Majka djeteta s translociranim Downovim sindromom - nosač uravnotežene translokacije 14/21 ima kariotip od 45, XX, t (14q, 21q). Kromosom translokacije nastaje kada se dugi krakovi kromosoma 14 i 21 spoji, kratke ramene su izgubljene.

Svako je rame podijeljeno na četvrti, a oni zauzvrat - u segmente, a oni i drugi označeni su arapskim brojkama. Centromar kromosoma je polazna točka za brojanje regija i segmenata.

Tako se za topografiju kromosoma upotrebljavaju četiri markera: broj kromosoma, simbol ramena, broj područja i broj segmenta unutar određene regije. Na primjer, 6p21.3 zapis znači da se radi o 6. Kromosomskom paru, njegovu kratkom kraku, površine 21, segment 3. Postoji više izbornih likovi, posebno pter - na kraju kratkog kraka, qter - na kraju duge ruke.

Metoda citogenetskog istraživanja omogućuje otkrivanje brisanja i drugih promjena u kromosomima samo u veličini od približno 1 milijuna baza (nukleotida).

[1], [2], [3], [4]