Konfokalna mikroskopija

Konfokalna mikroskopija trenutno se smatra jednom od najperspektivnijih metoda za in vivo snimanje kože, zbog čega je interes za nju neobično velik i među kliničarima i među predstavnicima istraživačkih instituta.

[ 1 ], [ 2 ], [ 3 ], [ 4 ]

Mogućnosti konfokalne mikroskopije

U dermatologiji se konfokalna laserska mikroskopija koristi za:

• proučavanje prodiranja spojeva u kožu (putovi prodiranja, kinetika, distribucija u koži);
• promatranje funkcioniranja žlijezda (određivanje aktivnog i pasivnog stanja);
• studije mikrocirkulacijskog sloja (uključujući i u stvarnom vremenu);
• dijagnostika neoplazmi.

Bez rasprave o prednostima i nedostacima gore spomenutih vrsta konfokalne mikroskopije, napominjemo da je posljednjih godina fluorescentna laserska konfokalna mikroskopija postala sve popularnija.

[ 5 ], [ 6 ], [ 7 ]

Konfokalna mikroskopija za pregled kože

Konfokalni mikroskop pruža dvije neprocjenjive mogućnosti - proučavanje tkiva na staničnoj razini u stanju fiziološke vitalne aktivnosti i demonstraciju rezultata istraživanja (tj. stanične aktivnosti) u četiri dimenzije - visini, širini, dubini i vremenu. Za kvalitetu slike i dubinu istraživanja najvažniju ulogu igra sposobnost tkiva da propušta svjetlost, drugim riječima, njegova prozirnost. Metoda konfokalne mikroskopije je beskontaktna, svjetlosni snop ne uzrokuje nikakvu štetu ili nelagodu pacijentu koji se pregledava ili pokusnoj životinji.

Za pregled kože koristi se konfokalna skenirajuća laserska mikroskopija (CSLM). Metoda omogućuje pregled epiderme i papilarnog sloja dermisa s rezolucijom bliskom histološkoj. Svi rezultati pregleda prikazuju se na monitoru i spremaju kao paket slikovnih datoteka (kao mikrofilm (u dinamici) ili mikrofotografije).

Postoje dvije vrste metode:

• reflektirajući (reflektirajući CSLM) - temelji se na činjenici da različite unutarstanične i međustanične strukture imaju različite indekse loma svjetlosti, što omogućuje dobivanje kontrastne slike.
• fluorescencija (fluorescencija CSLM) - koristi lasersku svjetlost koja prodire u kožu i pobuđuje u njoj egzo- ili endokromofore, koji kao odgovor počinju emitirati fotone (tj. fluorescirati).

Lateralna rezolucija je minimalna udaljenost između točaka smještenih na horizontalnoj ravnini, tj. ravnini paralelnoj s površinom kože. Aksijalna rezolucija je minimalna udaljenost između točaka smještenih na ravnini okomitoj na površinu kože.

[ 8 ], [ 9 ], [ 10 ], [ 11 ], [ 12 ], [ 13 ], [ 14 ]

Povijest konfokalne mikroskopije

Ideja o stvaranju mikroskopa sposobnog prikazati presjek živog tkiva na staničnoj razini aktivno se razvijala prije 130 godina. Glavni element modernih mikroskopa dizajniran je krajem 19. stoljeća i bio je rotirajući disk s malim rupicama raspoređenim u spiralu. Ovaj disk izumio je 1883. godine njemački student Paul Nipkow, po kojem je i dobio ime - Nipkow disk (ili Nipkow disk). Izum se temeljio na sposobnosti svjetlosti, koja prolazi kroz male rupice u disku i povećalo, da prodre duboko u tkivo i osvijetli fragment stanice na udaljenosti od površine. Kada se disk brzo okreće, fragmenti tvore jednu sliku. Pomicanjem strukture dalje od ili bliže objektu moguće je mijenjati dubinu optičkog presjeka tkiva koje se proučava.

Tek pojavom videorekordera 1980-ih i računala sposobnih za obradu slika početkom 1990-ih postalo je moguće stvoriti i učinkovito koristiti moderne mikroskope koji se koriste danas.