Medicinski stručnjak članka
Nove publikacije
Lančana reakcija polimeraze (PCR) u dijagnostici zaraznih bolesti
Posljednji pregledao: 05.07.2025
Svi iLive sadržaji medicinski se pregledavaju ili provjeravaju kako bi se osigurala što je moguće točnija činjenica.
Imamo stroge smjernice za pronalaženje izvora i samo povezujemo s uglednim medijskim stranicama, akademskim istraživačkim institucijama i, kad god je to moguće, medicinski pregledanim studijama. Imajte na umu da su brojevi u zagradama ([1], [2], itd.) Poveznice koje se mogu kliknuti na ove studije.
Ako smatrate da je bilo koji od naših sadržaja netočan, zastario ili na neki drugi način upitan, odaberite ga i pritisnite Ctrl + Enter.
PCR je jedna od metoda DNA dijagnostike koja omogućuje povećanje broja kopija detektiranog dijela genoma (DNK) bakterija ili virusa milijunima puta pomoću enzima DNA polimeraze. Testirani dio nukleinske kiseline specifičan za određeni genom se više puta umnožava (amplificira), što omogućuje njegovu identifikaciju. Prvo se molekula DNA bakterija ili virusa zagrijavanjem dijeli na dva lanca, zatim se u prisutnosti sintetiziranih primera DNA (nukleotidni slijed je specifičan za genom koji se određuje) vežu na komplementarne dijelove DNA, a drugi lanac nukleinske kiseline se sintetizira nakon svakog primera u prisutnosti termostabilne DNA polimeraze. Dobiju se dvije molekule DNA. Postupak se ponavlja više puta. Za dijagnostiku je dovoljna jedna molekula DNA, tj. jedna bakterijska ili virusna čestica. Uvođenje dodatne faze u reakciju - sinteze DNA na molekuli RNA pomoću enzima reverzne transkriptaze - omogućilo je testiranje RNA virusa, poput HCV virusa. PCR je trostupanjski proces koji se ciklički ponavlja: denaturacija, vezanje primera, sinteza DNA (polimerizacija). Sintetizirana količina DNA identificira se ELISA testom ili elektroforezom.
PCR može koristiti različite biološke materijale - krvni serum ili plazmu, strugotinu uretre, biopsiju, pleuralnu tekućinu, cerebrospinalnu tekućinu itd. PCR se prvenstveno koristi za dijagnosticiranje zaraznih bolesti poput virusnog hepatitisa B, virusnog hepatitisa C, virusnog hepatitisa D, CMV infekcije, spolno prenosivih infekcija (gonoreja, klamidija, mikoplazma, ureaplazmatske infekcije), tuberkuloze, HIV infekcije itd.
Prednost PCR-a u dijagnosticiranju zaraznih bolesti u odnosu na druge metode istraživanja je sljedeća:
- zarazni agens može se otkriti u bilo kojem biološkom okruženju tijela, uključujući materijal dobiven tijekom biopsije;
- moguće je dijagnosticirati zarazne bolesti u najranijim fazama bolesti;
- moguće je kvantitativno procijeniti rezultate istraživanja (koliko virusa ili bakterija se nalazi u proučavanom materijalu);
- visoka osjetljivost metode; na primjer, osjetljivost PCR-a za detekciju DNA virusa hepatitisa B u krvi je 0,001 pg/ml (približno 4×10² kopija /ml), dok je osjetljivost metode hibridizacije DNA korištenjem razgranatih proba 2,1 pg/ml (približno 7×10³ kopija /ml).
[