Neuronske matične stanice

Eksperimentalni dokaz za mogućnost regeneracije stanica CNS dobiveni su mnogo ranije otkriće istraživanja embrionalnih matičnih stanica, koje je pokazalo prisutnost u neokorteksa, hipokampusu i mirisni žarulja od moždanih stanica odraslih štakora, uzbudljive 3H-timidinom, odnosno sposobnost za sintezu proteina i podjele. Natrag u 60-ih godina prošlog stoljeća, pretpostavlja se da su ove stanice preteča neurona i izravno su uključeni u učenje i pamćenje. Malo kasnije pokazala prisutnost sinapsi de novo formiranih u neuronima i prvi rad na upotrebu embrionalnih matičnih stanica da se izazove neyronogeneza in vitro. Na kraju pokusa XX stoljeća s usmjerenom diferencijacije ESCs u neuronskim ishodišne stanice, dopaminski i serotoninski neuroni dovela do revizije klasičnih pojmova sposobnost živčanih stanica sisavaca za regeneraciju. Brojne studije pokazale su uvjerljivo koliko stvarnost rekonstrukcije neuronskih mreža i dostupnost neyronogeneza tijekom razdoblja postnatalnog organizmu sisavaca.

[1], [2], [3], [4], [5], [6]

Izvori neuronskih matičnih stanica

Živčane matične stanice izolirane u operacijama u subventrikularnoj predjelu bočne komore i dentatnog girusa hipokampusa, koji se nalazi u kulturi stanica kako bi se dobilo neurosfera (neuronske sfere), a nakon dispergiranja i preformirovaniya prošlost - sve većih staničnih tipova u CNS ili u posebnoj okolini, nove mikrosfera. U suspenziji kulture tkiva disociranom izoliranih iz fetalnih područja mozga periventrikularne također nastati neurosfera.

Markeri nezrelih stanica mozga su nestin, beta-tubulina III (neurona marker linija), vimentin, GFAP i NCAM, za identifikaciju Imunocitokemijska monoklonskih antitijela koji se koriste. Nestin (protein neurofilamenta intermedijernog tipa IV) izražava multipotentne neuroektodermalne stanice. Taj protein je korišten za identifikaciju i izolaciju multipotentnih CNS-neuroepitelne prekurzorskih stanica s monoklonskim antitijelima štakora-401, koji se može otkriti i do 95% stanica neuronskih embrija štakora cijevi jedanaestog dana gestacije. Nestin nije izražen u diferenciranim potomstva živčanih matičnih stanica, a prisutna u ranim živčanim prekurzorskih stanica, nakon mitoze neurona i ranim neuroblasts. Pomoću tog markera identificirane su neuroepitelne progenitorske stanice i dokazana je postojanje matičnih stanica u središnjem živčanom sustavu. Vimentin (intermedijer neurofilament protein tipa III) se izražava živaca i glijalnih kletkami- prekursora, kao neurona, fibroblasti i stanice glatkih mišića. Slijedom toga, oba imunocitokemijska obilježivača nemaju specifičnost potrebnu za odvojenu identifikaciju neuronskih stabala i progenitorskih stanica. Uporaba beta-tubulina III uspostaviti neuronske loze matičnih stanica, dok je tipa I astrociti identificirane ekspresijom GFAP i oligodendrociti izraženo posebno galaktocerebrozid (Ga! C).

Mitogen za živčane stanice su prekurzorskih FGF2 i EGF, podržava proliferaciju prekurzorskih stanica u kulturi sa stvaranjem neurosfera. Podijeli živčanih matičnih stanica stopa povećava značajno utjecao FGF2, te pomoću kombinacije FGF2 + EGF. Proliferativni učinci FGF2 posredovani su receptorima FGF2-R1. Heparin pojačava afinitet vezanja na receptor za FGF2 i značajno povećava njegovu mitogeno djelovanje na neuroepitelne stanice. U ranim fazama embriogeneze FGF2 receptora prisutnih u teleneefalon štakora, u kasnijim fazama lokalizacije zone ograničenog klijetke. Masa ekspresija FGF2-R1 post-mitotičke stanice je promatrana na kraju razdoblja ranog neurogeneze. Za početni period razvoja telencefalon karakterizirana niskom ekspresijom EGF receptora, uglavnom u stanicama ventralne regije. U kasnijim stadijima embriogeneze ekspresija EGF-R raste u dorzalnom smjeru. U mozgu glodavaca ima visoki afinitet EGF receptor transformirajući beta faktor rasta (TGF-beta-R), i koji je poželjno da se veže. Indirektno, funkcionalna uloga EGF-R pokazuju podaci na kortikalnu disgenezu prednjem mozgu nastalu u kasnom razdoblju od embriogeneze i postnatalna pažnjom na, snižavanje funkcija prednjem mozgu, korteks i ektopija smrti hipokampalnih stanica iz knockout miševa gen EGF receptora. Nadalje, za formiranje neurosfera apsolutno neophodno je prisustvo u mediju kulture TGF-a. Nakon uklanjanja faktora rasta iz uvjetovana stanica srednje zaustaviti podjele i prolaze spontano diferencijaciju u obliku neurona, astrociti i oligodendroblastov.

S obzirom na to je matičnih stanica reagregacijom disociranog neurosfera i kultura se provodi u mediju kulture koji sadrži EGF i osnovne FGF ili FGF2, ali bez dodatka seruma. Pokazano je da EGF inducira proliferaciju matičnih stanica subependimnoy zoni bočne komore, a osnovni FGF potiče proliferaciju matičnih stanica strijatuma, hipokampusa, neokorteksa i optičkog živca zrelog mozga. Kombinacija EGF-a i osnovne FGF je apsolutno neophodan za proliferaciju aktivni matičnih stanica izoliranih iz ependimalnim trećeg i četvrtog ventrikula u prednjem mozgu, kao i spinalni kanal lumbalne i torakalne leđne moždine.

Nakon suspenzija disocijacije živčanih matičnih stanica u kulturi u plastičnim posudama ili više jažica bez ljepila supstrata povećati veličinu novih neurosfera oblikovan, koji obično traje oko 3 tjedna. Metoda višestruke disperzije i reprodukcije neurosfera omogućava dobivanje dovoljnog broja linearnih klonova multipotentnih matičnih stanica za intracerebralnu transplantaciju. Ovo se načelo također temelji na stvaranju banke matičnih stanica izoliranih iz ljudskog embrionalnog mozga. Njihovo dugo (nekoliko godina) kloniranje omogućava dobivanje stabilnih linija neuronskih matičnih stanica, od kojih nastaju kateholaminergični neuroni tijekom inducirane diferencijacije.

Ako neurosfera nisu dispergirane i uzgaja na adhezijskih podlogama u mediju koji nemaju faktore rasta, proliferacijom matične stanice počinju spontano diferencirati da tvori neuronske stanice preteče i glija stanice s ekspresijom markera svih tipova živčanih stanica: MAP2, Tau-1 NSE, NeuN, beta tubulin III (neuroni), GFAP (astrociti) i Izračunato, 04 (oligodendrociti). Nasuprot tome, u kulturama živčanih matičnih stanica u omjeru neurona u više od 40% od diferenciranih stanica (u glodavaca - od 1 do 5%) stanica u miševa i štakora, ali je puno manje oligodendrocita, što je vrlo važno u stanične terapije gledište demijelinizacijske bolesti. Problem je riješen dodavanjem kulture srednje B104 koji stimulira formiranje mielinprodutsiruyuschih stanice.

Kada uzgojene neuralne stanice ishodišnih srži humanog embrija u mediju koji sadrži osnovne EGF, FGF i LIF, broj redaka neuronskih prekurzorskih stanica povećava u 10 milijuna puta. In vitro propagirane stanice zadržavaju sposobnost da migriraju i diferenciraju u neuronske i glijalne elemenata nakon transplantacije u mozgu odraslih štakora. Međutim, in vivo, broj podjela multipotičnih progenitorskih stanica je ograničen. Opetovano napomenuti da je Hayflick granica za „odrasle” živčane stanice (oko 50 mitoze) još nedostižna čak u eksperimentu - stanica u obliku neurosfera zadržavaju njihova svojstva samo za 7 mjeseci, a samo na 8 prolaza. Smatra se da je to zbog načina mogućnosti za njihovu disperziju tijekom pasaža (tipizacije ili mehaničke sile), što drastično smanjuje proliferativna aktivnost stanica zbog smanjene međustaničnih veza. Doista, ako se umjesto dispergiranja metode podjele neurosfera u 4 dijela koristi, održivost stanica tijekom prolaska je značajno povećana. Ova tehnika omogućava uzgoj ljudskih živčanih matičnih stanica za 300 dana. Međutim, nakon tog razdoblja, stanice gube mitotičku aktivnost i prolaze kroz degeneraciju ili idu u fazu spontane diferencijacije s formiranjem neurona i astrocita. Na temelju toga, autor smatra da su 30 mitoze ograničavajući broj podjele za kultivirane neuronske matične stanice.

Kod kultiviranja ljudskih živčanih matičnih stanica in vitro, formiraju se uglavnom GABA-ergonski neuroni. Bez stvaranja posebnih uvjeta, neuralne ishodišne stanice daju dopaminergičnih neurona (potrebnih za staničnu terapiju Parkinsonove bolesti) samo u prvih prolaza, nakon čega su svi neuroni u kulturi sastoji isključivo GABAergijskih stanica. U glodavaca, indukcija dopaminergičkih neurona in vitro inducirati IL-1 i IL-11, kao i fragmente membrana živčanih stanica, LIF i GDNF. Međutim, ova metoda nije bila uspješna za čovjeka. Međutim, kada je intraccrcbral transplantacija GABA-Ergić neurona in vivo pod utjecajem faktora mikro okolini nastati živčane stanice s različitih fenotipa posrednika.

Pretraživanje neurotropni faktor kombinacija pokazala da FGF2 i IL-1 inducira dopaminergičkim neuroblasts, koji, međutim, nisu u mogućnosti proizvesti dopaminergički neuroni. Diferencijacija matičnih stanica hipokampusa glutamatergičke pobudnim inhibitorne GABA neurona utječe neurotrofine, A EGF i IGF1 potakne nastajanje glutamatergnih i GABA neurona iz živčanih prekurzorskih stanica ljudskog embrija. Postepeno dodavanje kulture retinoične kiseline i neurotropin 3 (NT3) značajno povećava diferencijaciju matičnih stanica hipokampusa dospijevaju mozak neuronima različitih medijatora prirode, a korištenjem kombinacije iz mozga derivirani neorotropni faktor (BNDF), NT3 i GDNF u kulturama hipokampusa i neokortikalne dostupan piramidalnih neurona.

Dakle, rezultati brojnih istraživanja ukazuju na to da, kao prvo, matične stanice iz različitih moždanih struktura pod utjecajem specifičnih čimbenika lokalne tkiva su sposobni za razlikovanje in vivo u neuronskim fenotipova svojstvene tim strukturama. Drugi cilj inducirane diferencijacije živčanih matičnih stanica in vitro kloniranjem prekurzorskih stanica daje mogućnost dobivanja neuronske i glija stanica sa željenim karakteristikama za fenotipska intracerebralnog transplantaciju u različitim oblicima mozga patologije.

Nema sumnje da su pluripotentne matične stanice dobivene iz embrija ili odraslom središnjem živčanom sustavu, može se smatrati kao izvor novih neurona i koriste u klinici za liječenje neuroloških poremećaja. Međutim, glavna prepreka za razvoj praktičnog stanica Neurotransplantation je činjenica da je većina živčanih matičnih stanica ne diferenciraju u neurone nakon implantacije u nonneural zrelog CNS području. U zaobilazeći ovu prepreku, on je predložio vrlo originalan inovativnu tehniku koja omogućuje in vitro kako bi se dobila čista populaciju neurona iz fetalnih živčanih matičnih stanica nakon transplantacije u CNS-u odraslih štakora. Autori tvrde da je diferencijacija implantiranih stanica ovom metodom rezultira stvaranjem kolinergičnog neurona fenotipa, zbog utjecaja mikro-okolne faktore. Predložena tehnologija od interesa u smislu razvoja novih terapija na bazi matičnih stanica i zamijenili oštećene zbog traume ili neurodegenerativnih bolesti neurona kao kolinergički neuroni igraju vodeću ulogu u razvoju motornih funkcija, funkcija memorije i učenja. Posebno kolinergičnih neurona dobivene iz humanih embrionalnih matičnih stanica može se koristiti za zamjenu motoričkih neurona koji su izgubljeni u amiotrofična lateralna skleroza, ozljede leđne moždine. Trenutno nema informacija o tome kako razvoj značajan iznos kolinergičkih neurona stanovništva izveden matičnih mitogen stanica. Autori predlažu prilično jednostavan, ali učinkovit način poticanja mitogen prethodno nastalih primarne embrionalnih živčanih matičnih stanica u smjeru razvoja u gotovo čistom neurona nakon implantacije u nonneural i neurogeni CNS kod štakora zoni odraslih. Najvažniji rezultat njihovog rada je konverzija dovoljno velikog broja transplantiranih stanica u kolinergičkih živaca kada je ubačen u prosjeku membrane i leđne moždine.

Nadalje, za preformiranje živčane stanice u mozgu 8 tjedana ljudskog embrija holiyergicheskie neurona in vitro korteksa je predloženo da se koriste različite kombinacije slijedećih trofičkih faktora i kemikalije: rekombinantni osnovne FGF, EGF, LIF, amino-terminalni zvuka peptid mišji (Shh-N ), trans retinoična kiselina, NGF BDNF, NT3, NT4, prirodne i mišji laminin heparin. Početna linija ljudskih matičnih stanica neuronske (K048) se održava in vitro, dvije godine i 85 prolazi izdržao nepromijenjene proliferacije i diferencijacije svojstva, očuvanje normalne diploidne kariotip. Undispersed neurosfera 19-55 drugog prolaza (38-52 tjedana, e) zasađena na poli-D-lizin i laminin, i tada se tretira sa gore navedenih faktora u različitim koncentracijama, kombinacije i sekvence. Kombinacija koja se sastoji od osnovnog FGF, heparin i laminin (skraćenica FHL), s obzirom na jedinstveni učinak. Nakon jednog dana embrija kultiviranje živčane matične stanice u mediju sa ili bez FHL SHH-N (kombinirane Shh-N + FHL u kratica SFHL) uočeno brzo umnožavanje glavne planarne stanice. Svi drugi dan protokol (na primjer kao što je bazičnog FGF + lamininom), s druge strane, doveli su do ograničenog radijalnog širenja vretenastom stanica, a ove stanice nije ostavio srž neurosfera. Nakon 6 dana aktivacije i naknadne deset diferencijaciju koji sadrži B27, na rubu kuglica FHL-aktiviranih polipolyarnye velike neuronske stanice nalik pronađeno. U drugom protokolu, većina skupine neuronskih stanica su mali i bipolarna ili unipolarne. Imunocitokemijske analiza pokazala je da mali (<20 mikrona), bipolarna ili monopolarna stanice ili GABA-nergičnog ili glutamatergnih dok većina velikih polipolyarnyh stanice koji se nalazi na rubu FHL aktivirane neurosfera pokazao kolinergički kao markeri izražene su svojstveni kolinergičkih neurona (Otočić-1 i ChAT). Neke od tih neurona istovremeno izrazio synapsin 1. Kao rezultat, pet serija nezavisnih pokusa, autori su otkrili da je ukupna populacija stanica u pojedinim područjima 45,5% diferencira u neurone TuJl +, dok kolinergičke (ChAT ^) neuroni je samo 27,8 % stanica u istoj populaciji. Nakon još 10 dana diferenciranja in vitro, osim kolinergičkih neurona u FHL-aktiviranih neurosfera su znatne količine malih neurona - glutamatergnih (6,3%), GABA-nergičnog (11.3%), i astrocitima (35,2% ) i nestinozitivnih stanica (18,9%). Kod upotrebe kombinacije faktora rasta kolinergičnih neurona su odsutni, a stanice su se formirale rubni neurosfera ili astrocite, ili manji glutamatergnih i GABA-nergičnog neuroni. Praćenje backup i aktivni potencijali koriste patch Clamp cijelih stanica pokazala je da nakon sedam dana FHL-aktivirajući polipolyarnyh veliku većinu stanica imala ostatak potencijal čine -29.0 ± 2.0 mV, u nedostatku akcijskog potencijala. Nakon 2 tjedna odmora potencijalnih povećava do -63.6 ± 3,0 mV koji se djelovanje potencijala promatrane za vrijeme indukcije depolarizirajućim struja i 1M tetrodotoksina blokiran, koji ukazuju da je funkcionalna aktivnost nezrelih kolinergičnih neurona.

Nadalje, autori su otkrili da sama ili SFHL- aktivacija in vitro FHL- ne rezultira u formiranju zrelih neurona, i pokušao utvrditi je li sposoban izveden preko FHL SFHL ili matične stanice na diferencijaciju u kolinergičkih živaca kada su transplantirane u zrelim štakora CNS. Za ovu injekcijom aktiviranih stanica u regiji neurogene provedeno (hipokampus) i nonneural u nekoliko područja, uključujući dio prefrontalnog korteksa prosječne membrane i leđne moždine odraslih štakora. Praćenje ugrađenih stanica provedeno je pomoću CAO - ^ p vektora. Poznato je da OCD oznake istovremeno obje ultrastrukture stanice i stanične procese (molekulskoj razini) bez propuštanja i prikladan za izravnu vizualizaciju. Nadalje, OPP-označeni živčane matične stanice podržavaju neurona i glija profil diferencijacije identične profile netransformiranih embrionalnih matičnih stanica mozga.

Jedan do dva tjedna nakon implantacije 5 x 10 ⁴ aktiviranih i označavaju živčanih matičnih stanica nađene su u leđnoj moždini i mozgu štakora, RH + stanice su uglavnom u blizini mjesta ubrizgavanja. Procesi migracije i integracije bili su promatrani već mjesec dana nakon transplantacije. Raspon migracija varirati ovisno o mjestu injekcije: uvođenje dio u prefrontalnoj kori OCD + stanica su smješteni u 0.4-2 mm od mjesta ubrizgavanja u slučaju ugradnje u sredini membrane hipokampus ili leđne moždine stanica migrirao mnogo veći udaljenost -, 1-2 cm cijepljene stanice lokalizirane u središnjem živčanom sustavu je veliku strukture, uključujući frontalni korteks, prosječnog membrane, hipokampusu i leđne moždine. OCD-označene neuronske elementi vidljivi su već na 1. Tjednu nakon transplantacije, dok je njihov broj znatno povećao nakon 1 mjeseca nakon operacije. Stereološkog analiza je pokazala višu stopu preživljavanja od implantiranih stanica u različitim strukturama mozga, u usporedbi s leđnoj.

Poznato je da pohranjuju regionalna populacija matičnih stanica, transformacija u zrele stanice su regulirani posebnim faktorima tkiva u većini tkiva sisavaca odraslih. Proliferacija matičnih stanica, diferencijacije prekurzorskih stanica i formiranja specifičnog strukturi mozga neuronskih fenotipova u vivo u mnogo većoj mjeri izražen u fetalnog mozga, kao što je određeno u prisutnosti visokih koncentracija morfogenetskih faktora lokalnom mikrookolišu - neurotrofina BDNF, NGF, NT3, NT4 / 5, i rast faktori FGF2, TGF-a, IGF1, GNDF, PDGF.

Gdje su neuronske matične stanice?

Utvrđeno je da su živčane matične stanice izražavaju glija fibrilarne kisele proteine koji uključuju zrele stanice neuralne linije pohranjuju se samo na astrociti. Stoga, rezervoar stabljike u zrelom središnjem živčanom sustavu može biti astrocitne stanice. Doista, u mirisni žarulja i nazubljenih brazdi neurona su identificirani, podrijetlom iz GFAP-pozitivni prethodnik, što je u suprotnosti s tradicionalnim pogledima o ulozi praotac radijalne glija, okvirni sporazum se ne izražava u dentale gyrus u odrasloj dobi. Moguće je da u središnjem živčanom sustavu postoje dvije populacije matičnih stanica.

Pitanje lokalizacije matičnih stanica u subventrikularnoj zoni također ostaje nejasno. Prema nekim autorima, ependimalnim stanice tvore sfere u klonova kulture koje nisu istinite neurosfera (subependimy klonirane stanice), jer samo sposobnost da se diferenciraju u astrociti. S druge strane, nakon što je fluorescentni marker ili virusnog označavanje ependimalnim stanicama otkrivene u stanicama subependimnogo sloj i olfaktornih bulbusa. Takve označene stanice in vitro oblikuju neurosfere i razlikuju se u neurone, astrocite i oligodendrocite. Nadalje, pokazano je da je oko 5% ependyma stanica izražava markere stabljike - nestin, Notch-1 i Mussashi-1. Pretpostavlja se da je mehanizam asimetričnog mitoze povezane s nejednake raspodjele Notch-1 membranski receptor, pri čemu je potonji ostaje na ovisnih stanica membrana lokalizirane u području ependimalnim, a matične stanice koje migriraju u sloju subependimny gubi na taj receptor. Iz ove točke gledišta, subependimnuyu zona može se smatrati kao sakupljač prekurzorskih neurona i glija stanica prekursora generirane iz matičnih ependimalnim sloja. Prema drugim autorima, u repne subventrikularni zoni formirana samo glija stanice, a stanice su izvor neyronogeneza njušku-bočni odjela. U trećoj varijanti, prednji i stražnji dijelovi subventrikularne zone lateralnih ventrikula dobivaju ekvivalentne neurogene potencijale.

Poželjno izgleda Četvrto utjelovljenje organizacija mozga pričuve u CNS, pri čemu se u subventrikularnoj zoni su tri glavne vrste živčanih matičnih stanica - A, B i C. U prvih stanica eksprimiraju markere neurona (PSA-NCAM, TuJl) i okružene su B stanice, koje su identificirane ekspresijom antigena kao astrocita. C-stanice koje imaju ne antigenske karakteristike neurona i glija, posjeduju visoki proliferativnu aktivnost. Autor uvjerljivo pokazalo da B-stanice su prekursori A-stanica i nastaju de novo neuronima olfaktornog bulbusa. Tijekom migracije, A-stanice su okruženi niti neuronskih prekurzorskih stanica, što značajno razlikuje od mehanizma postmitotičkog neuroblasts putovanje duž radijalne glija stanica embrionalnog mozgu. Migracija je završena u mirisni žarulja mitoze podjele kako A- i B-stanice, koji su derivati uključeni u slojeve granuloznih stanica u glomerularnom sloju olfaktornih područjima mozga.

U mozgu koji se razvija embrija ne diferencira ependimalnim stanicama, a komore uključuju matične stanice množe ventrikula germenativnoy th subventrikularnoj zoni, koje migriraju i primarne neuro- glioblastomima. Na temelju toga, neki autori smatraju da regija subependimnaya zreli mozak sadrži smanjenu germenativnuyu embrionalne neuralne tkivo sastavljeno od astrociti, neuroblasts i neidentificiranih stanica. Pravi živčane matične stanice čini manje od 1% u stanicama stijenke germenativnoy zoni bočne komore. Djelomično zbog toga, a također u vezi s podacima koji subependimnoy zone astrociti su živčane stanice preteče ne isključuju mogućnost astrocitnih glija transdiferencijacija stanica na stjecanje neuronskih fenotipskih karakteristika.

Glavna prepreka konačnom rješavanju problema lokalizacije neuronskih matičnih stanica in vivo je odsutnost specifičnih markera za te stanice. Međutim, vrlo zanimljivo, s praktične točke gledišta, predstavljena izvješća koja živčane matične stanice su izolirane iz središnjeg živčanog sustava odjela koji ne sadrže subependimnyh zone - treći i četvrti komore u prednjem dijelu mozga, leđne kanala torakalne i lumbalne kičmene moždine. Posebno je važno je činjenica da za ozljedu kralježnične moždine poboljšana proliferaciju ependimalnim matičnih stanica središnjeg kanala uz tvorbu prekurzorskih stanica koje migriraju i diferenciraju u astrocite gliomezodermalnogo buragu. Osim toga, prekursorske stanice astro- i oligodendrocita također se nalaze u netaknutoj kičmenoj moždini odraslih štakora.

Dakle, literaturni podaci snažno ukazuju na prisutnost središnjeg živčanog sustava odraslih sisavaca, uključujući i čovjeka, regionalni matičnih rezerve, regenerativno i plastike s kapacitetom, na žalost, je u mogućnosti pružiti samo fiziološke regeneracije procesa stvoriti nove neuronske mreže, ali ne zadovoljava potrebe reparativni regeneracija. To predstavlja problem pronalaženje načina za povećanje sredstava središnjeg živčanog sustava matičnih egzogeni put, koji se ne mogu riješiti bez jasnog razumijevanja mehanizama formiranja centralnog živčanog sustava tijekom embrionalnog razdoblja.

Danas znamo da u procesu razvoja zametka, matične stanice u stanice neuralne cijevi su izvor tri tipa - neuroni, astrociti i oligodcndrocitc, odnosno neuroni i glija stanice izvedene iz zajedničkog prethodnika. Diferencijacija ektoderm u nakupine nervnih prekurzorskih stanica počinje pod utjecajem proneural geni bHLH obitelji proizvoda i blokira ekspresiju proteina transmembranski receptor derivati Notch porodice gena koji ograničavaju određivanje i rano diferencijacije živčanih ishodišnih stanica. S druge strane, ligandi Notch receptora djeluje transmembranski proteini Delta susjedna polja zbog ekstracelularne domene koji su izravno stanica-stanica kontakte sa induktivnim interakciji matičnih stanica.

Daljnja implementacija programa embrionalne neurogeneze nije ništa manje složena i, čini se, treba biti specifična za vrstu. Međutim, rezultati neyroksenotransplantatsionnyh studije pokazuju da matične stanice imaju različita evolucijski konzervativizam, pa živčane matične stanice su u mogućnosti migrirati i razvijati kada su transplantirani u mozak štakora.

Poznato je da se, što je CNS kod sisavaca ima vrlo nisku sposobnost reparativnim regeneraciju, koji je karakteriziran nedostatkom zrelog mozga bilo koje znakove nove stanice zamijeniti mrtve stanice kao rezultat ozljeda živčanih stanica. Međutim, u slučaju transplantacije neuroblasta, potonji ne samo da preživljavaju, proliferiraju i diferenciraju, već također mogu biti integrirani u moždane strukture i funkcionalno zamjenjuju izgubljene neurone. Kada su predane stanice neurona progenitorske transplantacije, terapeutski učinak bio je znatno slabiji. Takve su stanice pokazale nisku sposobnost migracije. Osim toga, neuronske progenitorske stanice ne reproduciraju arhitekturu neuronskih mreža i funkcionalno se ne integriraju u mozak primatelja. U svezi s tim, pitanja regenerativne reparativno-plastične aktivnosti aktivno se proučavaju u transplantaciji neformiranih multipotičnih neuronskih matičnih stanica.

Studija M. Alexandrova et al (2001), u prvoj izvedbi, eksperimenti su primatelji odraslim ženkama štakora te donori su 15 dana razvoj embrija. Primatelji se ukloni dio zatiljnog korteksa i šupljina transplantirane mehanički suspendira vjerojatne embrija kortikalnog tkiva koja sadrži multipotentnih matičnih stanica u subventrikularnoj ventrikularni i regiju. U drugoj izvedbi, eksperimenti provedeni transplantacija živčanih matičnih stanica 9 tjedana ljudskog fetalnog mozga polovozrelh štakora. Od periventrikularnoj području zameci autora kriške izolirana tkiva mozga su bili smješteni u mediju kulture i F-12 dobiven je ponovljen pipetom u staničnu suspenziju, te uzgajane u posebnom srednje NPBM uz dodatak faktora rasta FGF, EGF - i NGF. Stanice su uzgajane u suspenziji kulture prije formiranja neurosfera koje su dispergirane i ponovno istaloži u kulturi. Nakon 4 prolaza pod općom razdoblja od 12-16 dana kulture, stanice se koristi za transplantaciju. Primatelji su desyatisutochkye zreli štakori i dva mjeseca Wistar štakora, koji su u području bočnog ventrikla ubrizgan 4 ul suspenzije humanih matičnih stanica neuronske bez imunosupresija. Rezultati pokazuju da su stanice disocirane ventrikula i subventrikularni zonu zametka moždane kore oznaka alogenični štakora u odraslom mozgu i dalje razvijati, odnosno faktori razlikuju primatelj mikrookoliša mozga nije blokira rast i diferencijaciju živčanih matičnih stanica embrija. U ranom razdoblju nakon presađivanja multipotentnih stanica nastavio mitoze podjelu i aktivno premješten iz područja transplantacije tkiva u mozgu primatelja. Transplantirane embrionalne matične stanice, koje imaju veliki potencijal migracija, pronađeni su u gotovo svim slojevima kore transplantacije primatelja srži uz stazu i u bijeloj tvari. Dužina migracije put živčanih stanica je uvijek bio značajno niži (do 680 mikrona) od glija stanica (do 3 mm). Strukturni vektori za migracije astrociti su krvne žile i vlaknaste strukture mozga koji je također promatrana u drugim studijama.

Ranije se vjerovalo da se akumulacija označenih astrocita u području oštećenja cerebralnog korteksa primatelja može dovesti do stvaranja glialne barijere između tkiva graft-a i primatelja. Međutim, proučavanje strukture kompaktno lociranih staničnih graftova pokazalo je da je njihova cytoarchitectonics karakterizirana slučajnošću, bez slojevite distribucije transplantiranih stanica. Stupanj poretka presađenih neurona približio je stanicama normalnog moždanog korteksa samo ako nema glialne barijere između donora i primatelja tkiva. Inače, struktura stanica transplantata bila je atipična, a sami neuroni podvrgnuti su hipertrofiji. Neuroimunokemijsko tipiziranje transplantiranih stanica u transplantaciji otkrilo je inhibitorske GABA-hegijske neurone da bi se otkrilo ekspresiju PARV, CALB i NPY proteina. Posljedično, u zrelom mozgu postoje čimbenici mikro okoliša koji mogu podržati proliferaciju, migraciju i specifičnu diferencijaciju živčanih multipotentnih stanica.

U kulturi ljudskih matičnih stanica izoliranih iz mozga periventrikularne 9 tjedana starih embrija, M. Alexandrova et al (2001), u četvrtom prolaz nestinpozitivnyh pronađen veliki broj multipotentnih stanica, od kojih su podvrgnuti diferencijaciju in vitro a razvili neurona tipa, što odgovara rezultati istraživanja drugih autora. Nakon transplantacije u mozak odraslih štakora kulture ljudskih matičnih stanica mitotički dijele i premjestiti u tkaninu heterologne primatelja mozga. U transplantaciji stanica autori promatraju dvije populacije stanica - malih i velikih. Nedavna premješten u parenhimu iu strukturama vlakana u mozgu primatelja maloj udaljenosti - do 300 mikrona. Najdulji put migracije (do 3 mm) je karakteristična malih stanica, od kojih su neki razlikuju u astrocite koje su utvrđene upotrebom monoklonskih antitijela za GFAP. Obje vrste stanica nađene su u zidu postraničnu komoru, što ukazuje da je izlaz transplantiranih stanica u njušku migracijskog toka. Astrocitnih izveden živčanih matičnih stanica i ljudskih i štakora premješten pretežno preko kapilara i vlakana konstrukcije primaoca mozga koje se poklapa s podacima drugih autora.

Analiza diferencijacije ljudskih matičnih stanica in vivo upotrebom monoklonskih antitijela na GFAP, CALB i VIM otkrila je stvaranje oba astrocita i neurona. Za razliku od stanica graftova štakora, mnoge ljudske matične stanice bile su vimentin-pozitivne. Slijedom toga, dio ljudskih multipotentnih stanica nije bio diferenciran. Kasnije, isti autori su pokazali da su ljudska živčane matične stanice transplantirane su bez primjene imunosupresije nakon što prolazi kroz presađivanje u mozgu štakora za 20 dana, bez dokaza o imunološkom agresije glija stanice zrele mozga.

Utvrđeno je da je čak i živčane matične stanice Drosophila prizhivlyayutsya i proći diferencijacija u mozgu je toliko udaljena od svojti kukaca, poput štakora. Točnost autora pokusa nije u pitanje: transgenskih Drosophila linije sadrže gene humanog neurotrofnog faktor NGF, GDNF, BDNF, je umetnut u vektor prema Casper Drosophila: šok promotora, tako da se temperatura tijela sisavca automatski poziva njihovu ekspresiju. Autori identificirali stanica Drosophila proizvoda bakterijske galaktozidaze gena histokemijskim X-Gal bojenja. Osim toga, pokazalo se da živčane matične stanice su Drosophila specifično reagirati na neurotrofnim faktorima, kodirani ljudskim genima podataka: transplantaciju stanicama transgenih linija Drosophila sadrže GDNF gene u svojim razlikovanje živčane matične stanice dramatično povećana sinteza tirozin hidroksilazu i gen NGF stanice aktivno proizveden acetilkolinesteraze , Slična reakcija genzavisimye induciran u ksenografta transplantiranih alogenični s njim embrionalnog neuralnog tkiva.

Znači li to da je specifična diferencijacija živčanih matičnih stanica inducirana vidon-specifičnim neurotrofskim faktorima? Prema rezultatima autori ksenograft proizvode neurotropni faktori imaju određeni utjecaj na sudbinu transplantata, koji je tada intenzivno razvila i 2-3 puta veća od veličine transplantata, ušli u mozak bez dodatka usađene. Prema tome, stanice koje sadrže ksenografta neurotrofin gena, osobito gen kodira neurotrofni faktor (GDNF), humani glija-izveden vrše na razvoj transplantata vidonespetsifichesky efekt sličan djelovanjem odgovarajućeg neurotropin. Poznato je da GDNF povećala preživljavanje dopaminskih neurona u embrionalnom srednji štakora i poboljšava metabolizam dopamina ovim stanicama i inducira diferencijaciju tirozin hidroksilaze pozitivnih stanica, povećanje rasta aksona neurona i povećava veličinu tijela. Slični efekti su promatrani u kulturi dopaminergičkih neurona u srednjem mozgu štakora.

Nakon transplantaciju živčanih matičnih stanica u mozgu odraslih štakora pokazuje njihovu aktivnu migracija. Poznato je da se proces migracije i diferencijacije neuronskih matičnih stanica kontrolira skupom posebnih gena. Migratornu ishodišne stanice pokretanje signala do vrha diferencijacije daje produkt proteina protoonkogen c-retencije zajedno GDNF. Sljedeći signal dolazi od gene mash-1, koji kontrolira izbor puta razvoja stanica. Osim toga, posebni reakcije razlikovanje stanica ovisi o neurotrofnoj faktor receptora i trepetljika. Dakle, s obzirom na potpuno različite genetske konstitucije xenogenim ljudskih živčanih matičnih stanica i moždane stanice primatelj štakora, to treba priznati, ne samo vidonespetsifichnost neurotrofni faktori, ali i najviši evolucijski očuvanje gena odgovornih za određene diferencijacije živčanih matičnih stanica.

Hoće li to moguće transplantaciju embrionalne neyromateriala u neurokirurškog praksi liječenje neurodegenerativnih patoloških procesa zbog smanjene sinteze mijelina oligodendrocita se vidi. U međuvremenu, najintenzivnije Neurotransplantation rješavati pitanja vezana uz dobivanje embrionalnih ili zrelih alogeneična moždine živčanih matičnih stanica u kulturi, te njihove usmjerene diferencijacije u neuroblasts ili specijaliziranih neurona.

Transplantacija neuronskih matičnih stanica

Kako stimulirati proliferaciju i diferencijaciju živčanih matičnih stanica u odraslom organizmu može transplantirati embrionalne neuralne tkiva. Nije isključeno da je uveo alogenični s matičnim stanicama u živčanom tkivu samom embriju može proći proliferaciju i diferencijaciju. Poznato je da se nakon ozljede leđne moždine regeneraciju živaca vodiča provedena kroz izduženja oštećenih aksona i aksona klijanja kolateralnu izdanke motoričkih neurona netaknut. Glavne prepreke regeneraciju leđne moždine, su formiranje oštećenja vezivnog tkiva u području ožiljka, dystrophic i degenerativne promjene u središnjim neuronima, NGF deficita, te prisutnost u zahvaćenom području mijelin prekinutih proizvoda. Pokazano je da je transplantacija u ozlijeđenoj kralježničnoj moždini raznih tipova stanica - fragmenata bedrenog živca odraslih životinja, embrionalni zatiljnog korteksa, hipokampusa, leđne moždine, Schwannovih stanica, astrocita, mikroglija, makrofage, fibroblaste - doprinosi regeneraciji aksona od klijanje i omogućuje novoformirane aksoni rasti kroz područje ozljede leđne moždine. To Eksperimentalno je dokazano da je transplantacija fetalnog živčanog tkiva za ozljedu kralježnične moždine djelovanjem neurotrofnim faktorima ubrzava rast pogođenim aksona, sprečava formiranje glijalnog ožiljka i razvoj distrofični i degenerativnih procesa u središnjim neuronima, dok stanice transplantirane embrija neuralno tkivo prolaze kralježnicu, integriraju s susjedna tkiva i promovirati aksona nicanje kroz zahvaćena područja sa stvaranjem sinapsi dEN drttičnog tipa na spinalnim neuronima.

Ovo područje regenerativne medicine i plastike dobila najveći razvoj u Ukrajini zbog radu znanstvenog tima na čelu s VI Tsymbalyuk. Prije svega, ova eksperimentalna studija učinkovitost transplantacije embrionalnog živčanog tkiva ozljede leđne moždine. U autolognih perifernih živaca najizraženijih promjena destruktivni autori promatraju distalni brtveni prostor gdje se 30. Dan nakon operacije su u kombinaciji s prirodom reparativni procesa. Kada alografta morphofunctional status implantiranih živca na dan 30. Karakteriziran teške degradacije fenomena masnih degeneracija i amiloidoza u pozadini fokalne upalne infiltracije limfoidnokletochnoy s prevladavajućim atrofije Schwannovih stanica. Transplantacija embrionalnog živčanog tkiva uglavnom pridonijela obnovi vođenja leđne moždine, naročito kod životinja, koji postupak je provedena u prva 24 sata nakon ozljede: protiv ublažavanju upalne destruktivnih postupaka označen hipertrofije i hiperplazije sinteze proteina i energoprodutsiruyuschih ultrastrukturnih elemenata leđne neurona hipertrofija i oligodendrociti hiperplazija, 50% smanjenje amplitude mišića akcijskog potencijala i 90% - brzina drži zamah. U procjeni učinkovitosti transplantacije fetalnog transplantacije živčanog tkiva, ovisno o zoni je otkriveno da su najbolji rezultati promatraju kad se daju direktno u transplantacije području ozljede leđne moždine. Punom prelaska kralježnične moždine fetusa transplantacije živčanog tkiva je pokazao neučinkovitim. Dinamičke studije pokazale su da je optimalno vrijeme za presađivanje embrija živčanog tkiva su prva 24 sata nakon ozljede leđne moždine, a operacija tijekom perioda izrečenih sekundarnih ishemijskih i upalne promjene koje se događaju u 2-9-og dana nakon ozljede, mora se priznati nepraktičan.

Poznato je da teška kraniocerebralne ozljede izaziva jak i trajan aktivaciju lipidne peroksidacije u početnim i međufaza posttraumatskog razdoblja u oštećenom tkivu mozga i cijelog organizma, a također daje metabolizam energije u ozlijeđenog mozga. Pod tim uvjetima cijepljenje fetalnog živčanog tkiva do traumatskih ozljeda doprinosi stabilizaciji lipidne peroksidacije procesa i povećava kapacitet antioksidansa sustava mozga i cijelog organizma, povećava antiradikalnu zaštitu u 35-60-og dana posttraumatskog razdoblja. U istom vremenskom razdoblju nakon transplantacije embrionalnog neuralnog tkiva na normalan metabolizam energije i oksidativne fosforilacije procesa u mozgu. Nadalje, pokazano je da se na prvi dan nakon eksperimentalnog traumatska ozljeda mozga ozlijeđenih polutke impedancije tkiva smanjuje za 30-37% od Kontralateralno - 20%, što ukazuje na razvoj opće moždanog edema. U životinja, koji su bili podvrgnuti transplantaciji fetalnog živčanog edem tkiva involucije događa mnogo brže - već sedmi dan je prosječna vrijednost impedancije tkiva traumatiziranih hemisfera dosegao 97,8% od razine upravljanja. A puna obnova vrijednosti impedancije na 30. Dana zabilježeno je samo kod životinja transplantiranih s embrionalnog neuralnog tkiva.

Smrt neurona u mozgu nakon teške traumatske ozljede mozga je glavni suradnik na razvoju posttraumatskih komplikacija. Posebno osjetljiv na ozljede neurona integrirati dopaminergičkih i noradrcncrgički, srednji i medulla. Smanjenje razine dopamina u striopallidarnoy složenom i moždane kore značajno povećava rizik od poremećaja pokreta i psihijatrijskih poremećaja, epileptična država, a smanjenje proizvodnje dopamina u hipotalamusu mogu biti uzrok brojnih autonomne i somatskih poremećaja koji se javljaju u dalekoj posttraumatskog razdoblja. Rezultati ispitivanja u eksperimentalne traumatske ozljede mozga pokazuju da transplantacija fetalnog živčanog tkiva doprinosi obnavljanju dopamina u ozlijeđenog hemisferi mozga, dopamina i noradrenalina - u hipotalamusu, kao i povećanje razine norepinefrina i dopamina u srednji i medule. Nadalje, kao posljedica transplantacije embrija živčanog tkiva u životinjskim modelima mozga ozlijeđenoj hemisferi normalizirane postotak fosfolipida i povećanje masnih kiselina (C16: 0, C17: 0, C17: 1 C18: 0, C18: 1 + C18: 2, C20 : 3 + C20: 4, C20: 5).

Ti podaci potvrđuju stimulaciju regenerativno-plastičnih procesa transplantiranim embrijskim neuralnim tkivom i ukazuju na reparativno-trofički učinak transplantata na mozgu primatelja kao cjeline.

Posebnu pozornost treba posvetiti kliničkom iskustvu osoblja Instituta za neurokirurgiju. AP Romodanov Akademija medicinskih znanosti Ukrajine na transplantaciju embrionalnog živčanog tkiva u cerebralnom paralizom - vrlo složene bolesti s teškim kršenjima motoričke funkcije. Klinički oblici cerebralne paralize ovisi o stupnju oštećenja integriranih struktura koje su odgovorne za regulaciju tonusa mišića i motornih formiranje stereotipa. Trenutno, postoji obilje dokaza koji ukazuju da povrede motoričke funkcije i tonusa mišića su važni patološke promjene u sustavu striopallido-thalamocortical kontrole motora. Striospallidna veza ovog sustava ima funkciju kontrole kroz nigrostrijalnu proizvodnju dopamina. Izravan put počinje provođenje kontrole thalamocortical neurona ljuska posredovane gammaaminomaslyanoy kiselina (GABA) i supstanciju P i projicira izravno na motorno području unutarnjeg segmenta globus pallidus i substantia nigra. Indirektni put čiji učinak se ostvaruje uključuje GABA i enkefalina, potječe iz ljuske neurona i utječe na jezgru preko bazalnih ganglija sekvencom veza sadrži vanjski segment globus pallidus i subthalamic jezgre. Provođenja abnormalnosti uzrokovati hipokinezije ravan put, dok je smanjenje vodljivosti strukture neizravni put vodi do hiperkinezom s relevantnim promjenama mišićnog tonusa. Integritet GABAergijskih putova na različitim razinama u sustavu kontrole motora i integracije dopaminergičkih vezama na razini ljuske su neophodni za regulaciju thalamocortical interakcija. Najčešći manifestacija motora patologije u raznim oblicima cerebralne paralize je kršenje mišićnog tonusa i usko je povezana promjenu u refleksna aktivnost mišića.

Transplantacija embrijskog živčanog tkiva u cerebralnoj paralizi djece zahtijeva pažljivu analizu prirode oštećenja struktura mozga. Na temelju određivanja dopamina i GABA u subarahnoidni ccrcbrospinal autora fluida su detaljno razinu integracije funkcionalnih poremećaja strukture mozga, tako da je moguće ostvariti rezultate kirurške intervencije i da ispravi ponovio Neurotransplantation. Fetalnog živčanog tkiva (abortny materijal 9 tjedana embrija) su transplantirana u parenhimu kore precentral gyrus za moždane hemisfere, ovisno o težini atrofičnih promjena. U postoperativnom razdoblju nisu zabilježene komplikacije ili pogoršanje pacijenata. Pozitivna dinamika zabilježena je u 63% bolesnika s Spasticom oblicima, 82% djece s oslabljen-estetski oblik i samo u 24% bolesnika s bolesti zglobova. Utvrđen je negativan učinak na rezultate rada visoke razine neuroznanosti s prisutnošću autoantitijela na neurospecifične proteine. Neučinkovit transplantacija embrionalnog neuralnog tkiva pojavio se u bolesnika u dobi od 8-10 godina i stariji, kao i kod bolesnika s teškim hiperkinetski sindromom i episindroma. Klinička učinkovitost transplantacije embrionalnog neuralnog tkiva u bolesnika s Spasticom oblika cerebralne paralize očituje statomotornyh formiranje novih vještina i dobrovoljne pokrete uz korekciju patoloških obrazaca pokreta i smanjenjem stupnja spastičnost, abnormalnih položaja i stavova. Autori smatraju da je pozitivan učinak transplantacije embrionalnog neuralnog tkiva je rezultat normaliziranja utjecaja na funkcionalnu aktivnost supraspinalni struktura uključenih u regulaciju tonu položaja i dobrovoljne pokrete. U tom slučaju, pozitivni klinički učinci transplantacije embrionalnog neuralnog tkiva popraćena smanjenjem sadržaja neurotransmitera u subarahnoidnom likvora, što pokazuje da je oporavak sastavni interakcije utjecati moždane strukture.

Tu je još jedan teški oblici neuroloških bolesti - minimalno svjesnom stanju, problem liječenja od kojih je, nažalost, daleko od toga da bude riješen. Predstavlja minimalno svjesnom stanju polyetiology subakutna ili kronična stanja nastalog od jakih organskih lezija CNS-a (uglavnom korteksa), a karakteriziran razvojem i panapraksii panagnozii na relativno pohranjene sekcije funkcija segmentnih matičnih formacije i limbičke mozga mrežaste kompleks. Follow-up studija (1 do 3 godine) je pokazala da je minimalno svjesno stanje nije konačna dijagnoza upornog oštećenja živčanog sustava u djece, i pretvara se u organskom ili demencije, kronične ili vegetativnom stanju. U odjelu za restaurativnu neurokirurgiju Institutu za neurokirurgiju. AP Romodanov Sciences Ukrajina 21 bolesnika s posljedicama apallic sindrom transplantacije embrija neuronskim stanicama provedena. Pod općom anestezijom kruna rezač Burr rupa, nanosi se na površini od najizraženijih atrofičnih promjena utvrđenih u računalo ili magnetskom rezonancom, te u prisutnosti difuznog atrofije sive ili bijele tvari uvodi u mladica i središnjeg precentral gyrus mozga. Nakon otvaranja dura mater komade 8-9 tjedana stara embrionalnom tkivu Oznake senzorimotorni kore intrakortikalnog ugrađuju pomoću posebnog uređaja. Broj uzoraka tkiva implantiranog je od 4 do 10, koja se određuje po količini i veličini otvora Burr lokalne promjene medule. Za razliku od drugih vrsta patologije na apallic sindrom, autori su nastojali usaditi što više fetalnog tkiva u većini pristupačne područjima mozga. Dura šavom, proizveden plastične lubanje defekt. Tijekom operacije, svi pacijenti su pokazali značajne promjene u oba korteksu (atrofija, nedostatak vijuge, obezbojenje i pulziranja srži) i moždanih ovojnica (zadebljanje tvrde moždane ovojnice, značajno zadebljanje u obliku paukove mreže membrane s ima svoj vlastiti krvne žile, fuziju školjke s temeljnom tvarima mozga). Ove promjene su izraženiji u bolesnika s anamnezom postoje naznake prenesene upalne lezije mozga. U bolesnika koji su bili podvrgnuti CNS hipoksije, dominira difuznih atrofičnih promjena mozga tvari, posebno kortikalnih odjela, s povećanjem subarahnoidnom prostoru, bez značajnih promjena u membranama mozga. Polovica pacijenata porastao krvarenje mekih tkiva, kosti, mozak tvar. Nakon operacije u razdoblju od šest mjeseci do tri godine, država je poboljšan u 16 bolesnika, pet pacijenata je ostao nepromijenjen. Pozitivna dinamika zabilježena je iz oba motora i mentalnoj sferi. Mišićni tonus je smanjena na deset pacijenata, a pacijent je tjelesna aktivnost povećana (smanjena pareze, poboljšana koordinacija pokreta), manipulativnu sposobnost gornjih udova značajno povećan u pet djece. Četiri bolesnika smanjiti učestalost i težina epileptičkih napadaja i jedno dijete za cijelo razdoblje promatranja napadaja nakon operacije ne postoji. Agresivnost smanjio dvoje djece u dva bolesnika s teškim bulbarne umanjenja poboljšanu gutanja, dvoje djece su bili u stanju žvakati na vlastitu roku od 2 tjedna nakon operacije. To zabilježeno smanjenje u težini psihičkih poremećaja, devet djeca nakon operacije postalo mirnije, spavanje i pozornost poboljšan u sedam pacijenata. Tri pacijenta s posljedicama apallic sindromom počeo prepoznavati svoje roditelje, jedan - slijediti upute, dva - reći riječi, tri su smanjeni stupanj dizartrija. Autori navode da je značajno poboljšanje u bolesnika počinje nakon 2 mjeseca nakon operacije, ne dostigne najviše 5-6 mjeseci, onda je stopa poboljšanja usporava i na kraju godine, 50% pacijenata procesu stabilizacije. Pozitivan učinak neurotransplantation služio kao osnova za reoperation u šest bolesnika s posljedicama apallic sindromom, ali na drugu polutku mozga. Tehnike i drugi metodologija transplantacija bili identični onima iz prve operacije, ali klinički učinak drugog koraka bio je manji, iako to ne dogodi nakon prve i nakon druge operacije ozbiljnih komplikacija. Prema autorima, terapijski mehanizam djelovanja povezana s neurotransplantation neurotropni utjecaj transplantiranih embrionalnog neuralnog tkiva koja sadrži veliku količinu rasta, hormonska, i drugih biološki aktivnih tvari poboljšanje oporavka oštećenih neurona i plastike reorganizacije primatelj moždanog tkiva. Nije isključeno i aktiviranje učinak na aktivnost živčanih stanica koje su morfološki sačuvane, ali je izgubio zbog funkcionalnu aktivnost bolesti. To je brzo neurotrofni učinak može se objasniti poboljšanje bulbarne funkcije u neke djece na kraju prvog ili drugog tjedna nakon operacije. Pretpostavlja se da osim onih iz trećeg-četvrtog mjeseca između mita i domaćina mozga osnivaju morfo-funkcionalne komunikacije kroz koje neyrotransplantat zamjenjuje funkciju mrtve stanice mozga, što je podloga za poboljšanje oba motora i mentalnih funkcija pacijenata.

Učinak transplantacija živčanog tkiva za fetalna reorganizacije interneuronskih veza proučavali eksperimentalno. Autori bijele štakora pomoću fluorescentne oznake lipofilni Dil (1,1-dioktadecil-3,3,3 \ 3'-tetrametilindokarbotsianina perklorat) i konfokalnom uzoraka laser za skeniranje proučavali oporavak intermodule aksona veza u zoni mehaničkog oštećenja moždane kore na embrionalni transplantacije podlozi živčanog tkiva i bez nje. Utvrđeno je da je uvođenje fetalnog živčanog tkiva u oštećena područja osigurava rast aksonski, koji nakon prolaska kroz mladica su spojeni na susjedne moždanog tkiva, a bez transplantacije fetalnog neuronske zoni oštećenja tkiva je za uzgoj aksona nepremostivu prepreku. U ovom radu, transplantacija embrionalnih (15-17-og dana trudnoće) neokorteksa. Naši rezultati - daljnji dokaz u korist aktivnog utjecaja embrionalnog graft živčanog tkiva kod posttraumatskog reorganizacija interneuronskih odnos susjednih strukturnih i funkcionalnih modula cerebralnom korteksu. Transplantacija embrionalnog živčanog tkiva daje djelomični oporavak odnosa podijeljena dijelove oštećenja moždane kore kroz stvaranje povoljnih uvjeta za rast aksona u zoni grafta neyrotrofichoskih faktora. Postojanje takvog efekta je dokazano eksperimentalno i raspravlja u literaturi kao dokaz visoke mogućnosti plastičnih oštećenog mozga odraslih životinja. U tom smislu, transplantacija stanica se danas smatra optimalnim terapijskim strategije za vraćanje funkcije oštećenog ljudskog živčanog sustava.

Naši podaci o učinkovitosti fetalnog mozga živčanog tkiva kao egzogenog transplantacije medij za aksona izglede za rast posvjedočiti svrhovito stvaranje komunikacijske veze između susjednih netaknutih dijelova mozga. Čini se stvarni rad proučavati učinak transplantacije živčano tkivo na dinamiku funkcionalnih parametara CNS, čiji je zadatak bio ispitati utjecaj transplantacije fetalnog Oznake locus coeruleus (LC) na morphofunctional pokazatelja LC neurona i primatelja lokomotornog aktivnosti. Primatelji su bile ženke Wistar štakora, donatora - 18 dana starih embrija štakora iste linije. Transplantacija embrijskog LC provedena je u šupljini treće ventrikule mozga. Histološki je otkriveno presađivanje transplantata u 75% životinja primatelja. U slučajevima zanemarivanja, graft je ležao na stijenki ventrikula, punio je 1 / 5-2 / 5 lumena i bio održiv. Nakon 1 i 6 mjeseci nakon operacije, presadili živčano tkivo morfološka karakteristika je struktura koja će se dogoditi kada se normalno ontogenetski razvoj, to jest, LC struktura. Naši podaci pokazuju da je u životinja koje su bile transplantiranih fetusa karticu LC varira dinamičnu aktivnost i povećanu aktivnost matrica LC stanične jezgre kromatina. Posljedično, dolazi do intenziviranja aktivnosti neurona vlastite LC, ali implantat je također funkcionalno aktivan. Poznato je da se takozvano lokomotorno područje središnje moždine praktički podudara s lokalizacijom LC. Autori smatraju da je temelj promjena u motoričke aktivnosti štakora primatelja je aktivacija LC stanica, i vlasnička i implantata, uz dodjelu kao posljedica velikih količina norepinefrina, uključujući u segmentima leđne moždine. Tako, smatra se da je povećanje aktivnosti lokomotorne uvjetima transplantacija LC u netaknutom životinja mozak zbog prisutnosti funkcionalno aktivnog transplantata integriran s mozgu primatelja i doprinosi aktivacije lokomotorne aktivnosti štakora.

Nadalje, pokazano je da je transplantirana embrionalne neuroepitelne stanice oznaka neokorteksa i kičmena moždina opstane i diferenciraju u neuroblasts, mlade i zrele neurone u roku od 1-2 mjeseci nakon transplantacije u oštećenoj bedreni živac odraslih štakora. U proučavanju dinamike NADRN pozitivnih neurona oznaka embrionalnog leđne moždine i neokorteks štakorima heterotopične transplantati (15 embrija štakora dnevno) za uzdužnim presjecima kroz sciatic živca štakora primatelju pokazao usađivanje od 70 do 80% neyrotransplantatov koja ovisi o vremenu promatranja. Neuroblasts jedno- i bipolarni oblik sa zaobljenim svijetle jezgre i jedan ili dva jezgrama počinju formirati u transplantata u tjedan dana nakon operacije, koja je u pratnji formiranje klastera. Među neuroblasts autorima nije uspio detektirati stanice koje sadrže NADPH diafopazy (NADPH d). Nakon 7 dana NADPH pozitivni su samo stanični elementi krvnih žila - endotelne stanice kapilare u unutrašnjosti presatka i endotelne i stanicama vaskularnih glatkih mišića bedrenog živca primatelja. Budući da u stanicama vaskularnih glatkih mišića, indukcija NO-sintaze (NOS) odvija pod utjecajem IL-1, autori pripisuju pojavu glatkih mišićnih stanica NADPH pozitivna u krvnim žilama bedreni živac u prisutnosti IL-1 sintetiziranim u oštećenih živčanih debla. Poznato je da se u uvjetima neyronogenez transplantacije fetalnih oznaka mozga sinkroniziran s razvojem neurona in situ. Rezultati morfoloških istraživanja pokazuju da je diferencijacija živčanih elemenata presaditi sedam dana nakon što je transplantacija odgovara staničnom diferencijacijom sličan mozak od novorođenih štakora. Tako, na heterotopičncm transplantaciju u perifernog živca transplantirani embrija živčane stanice pokazuju sposobnost za sintezu NADPH-d. Transplantacije koštane srži kralježnice otkriva više neurona sadrže NADPH-d, cijepa nego neokorteksa, a sinteza dušičnog oksida u transplantiranih neurona počinje najkasnije razvoja in situ. U kralježnjaka središnjeg živčanog sustava NOS-pozitivne stanice se pojaviti još u prenatalnom razdoblju. Smatra se da NO doprinosi formaciji sinaptičkih veza u mozgu koji se razvija i prisutnost NOS-pozitivnih živčanih aferenata djeluju neuroblasts NO sinteze u malom mozgu, potiče migraciju i diferencijaciju neurona, čime se normalno Cytoarchitectonics mozak. Važna uloga NO u sinapsogeneze instaliran u tectum - NOS-pozitivnih neurona su samo oni koji su imali sinaptičkih veza s mrežnice stanica.

Poznato je da je dušikov oksid jedan od regulatora aktivnosti mozga, gdje se formira iz arginina pod utjecajem NO sintetaze, koja ima prozirnu aktivnost. U CNS-u, N0 se sintetizira u endotelnim stanicama krvnih žila, mikroglia, astrocita i u neuronima različitih dijelova mozga. Nakon traumatskog oštećenja mozga, kao i hipoksije i ishemije, povećava se broj neurona koji sadrže NO, koji je jedan od regulatora moždanog krvotoka. S obzirom na sposobnost NO da inducira sinapsogenezu, posebno je zanimljivo proučavanje stvaranja stanica koje sadrže NO u uvjetima neurotransplantacije na pozadini traumatskih ozljeda živčanog tkiva primatelja.

Jednako je važno proučiti utjecaj na Neurotransplantation uvjetovanog refleksa stereotipa ponašanja. U pokusima koji studiraju utjecaj daleko i intraccrcbral (između CII i CIII) transplantata zametka plavkaste mrlje (17-19-og dana gestacije) i sadržaj memorije kateholamina procesa u štakora uništenje frontotemporalne neokorteksa pokazala da elektrolitski šteta Frontotemporal kora daje stereotip uvjetno emocionalno izbjegavanje refleks odgovor (sjećanje), smanjuje fiziološku aktivnost, smanjuje količinu noradrenalina u kortikalne zoni od coagulated ali se povećava tako da je njegova razina u hipotalamusu, gdje je smanjenje koncentracije adrenalina, ali u krvi i nadbubrežne žlijezde njegove količine povećava.

Kao Intracerebralnom transplantacije embrionalna tkiva plavkaste mjesta u 81,4% životinja dobiven stereotip odgovor uvjetovano izbjegavanje emocionalne refleks, poremećena elektrolitički oštećenje frontalno-temporalna područja cerebralnog korteksa normalizirane adrenalina u srednji retikularno stvaranje, hipotalamus i neokorteksa, i hipokampusu čak i povećava njegova razina, u kombinaciji sa smanjenjem koncentracije u krvi adrenalina.

Udaljeni transplantacija embrionalnih tkiva plavkaste mrlje promiče ne samo obnovu i nagluhe stereotipnu uvjetnog emocionalni refleks izbjegavanja odgovora u štakora s lezijama elektrolitički frontotemporalne kore, ali i povećava sadržaj norepinefrin i epinefrin, uglavnom u hipotalamusu, krv, srce i nadbubrežnim žlijezdama. Pretpostavlja se da je to zbog cijepiti vaskularizacije, prodor neurotransmitera u krvi, njihov prolaz kroz krvno-moždanu barijeru i aktiviranje mehanizama adrenalina ponovnog unosa i noradrenalina po vrstama 1., 2., 3. Autori vjeruju da je stabilizacija duga razinu noradrenalina u usadenosti i funkciji graft može se smatrati kao fenomen postupnom oslobađanja neurona u minimalnim dozama plavkasti mjesta.

Pozitivni klinički učinci transplantacije embrionalnog neuralnog tkiva može biti s obzirom na sposobnosti i drugom utjecaj u procesima stvaranja novih krvnih žila u regulaciji izravno sudjelovanje faktora rasta i citokina. Aktivirani vaskulogeneza angiogeničnih činioca rasta - faktor rasta vaskularnog endotela (VEGF), FGF, PDGF, TGF a, koji su sintetizirani tijekom ishemije služi polaznu točku angiogeneze. Dokazano je da je došlo do ispražnjenja potencijala rasta vaskularnog nastaje u procesu starenja tijela koji igra značajnu ulogu u patogenezi bolesti kao što je koronarna bolest srca i aterosklerozu od donjih ekstremiteta. Razvija se ishemija tkiva i raznih drugih bolesti. Uvođenje angiogenih čimbenika u području ishemije (terapijski angiogeneza) stimulira rast krvnih žila u tkivu i ishemijskih poboljšava mikrocirkulaciju zbog razvoja kolateralna cirkulacija, što zauzvrat povećava funkcionalnu aktivnost pogođenog organa.

Najviše je obećavajuće za kliničku upotrebu VEGF i FGF. Rezultati prvih randomiziranih pokusa pokazali su se ohrabrujućim, posebice pod uvjetom da je točan izbor optimalnih doza i načina primjene angiogenih čimbenika. S tim u vezi, provedena je eksperimentalna procjena angiogeničkog djelovanja ekstrakta izoliranog iz humanog embrionalnog moždanog tkiva. U radu su korišteni materijali za abortus dobiveni dvadesetom tjednom trudnoće i obrađeni prema metodi I. Maciog i koautora (1979) u modifikaciji ANRF IC. Ovaj lijek je analog "Supplement za rast endotelijalnih stanica" ("Sigma") i prirodna je mješavina ljudskih angiogenih čimbenika, što uključuje VEGF i FGF. Pokusi su provedeni na štakorima s modelima ishemije tkiva stražnjeg dijela i miokarda. Temelju istraživanja aktivnosti alkalne fosfataze u eksperimentalnih životinja tretiranih s ekstrakta živčanog tkiva embrija, pokazalo je porast broja kapilara po jedinici površine miokarda - na oba uzdužna i poprečno na kriške srca. Angiogena aktivnost lijeka očituje direktnim uvođenjem u ishemijskom području i u slučaju sistemske (intramuskularno) davanje, što je dovelo do smanjenja prosječne području nakon infarkta ožiljak.

U svakom obliku, transplantacija embrionalnog neuralnog tkiva je izuzetno važno odabrati ispravan gestacijski period transplantirani embrionalne materijala. Komparativna analiza staničnih preparata iz embrionalnih trbušnoj mezencefalona 8-, 14- i 16 do 17 dana starih embrija štakora tri mjeseca poslije intrastriarnoy neurotransplantation spolno zrelih štakora s parkinsonizam u automatizirani Test apomorfinindutsirovannoy motora asimetrije otkrila pripreme znatno veće učinkovitosti stanica CNS 8 dana embrije a najmanji - od 16-17 dana embrionalnog neuralnog tkiva. Dobiveni podaci su u korelaciji s rezultatima analize histomorfološke, osobito s dimenzijama transplantati glija ozbiljnost reakcija i broja dopaminskih neurona u njima.

Razlike terapijski učinak fetalnih stanica živčanog tkiva može biti povezana sa stupnjem predanosti i nezrelosti samih stanica, a njihov odgovor na različite čimbenike rasta, koje se dodjeljuju u području oštećenja uzrokovana dopaminergičkirn neurona. Posebno učinak EGF i FGF2 u razvoj živčanih matičnih stanica in vivo telencefalon pojavljuje u različitim fazama embriogeneze. Neuroepitelne stanice 8.5 dana stari embriji miša kada kultivirani in vitro da se razmnožavaju u mediju bez seruma, u prisustvu FGF2, ali ne i EGF, koji reagiraju samo populacije matičnih stanica je izdvojena iz mozga embrija u kasnijim stadijima razvoja. U isto vrijeme, živčane matične stanice rastu kao odgovor na svaki od tih mitoze i rast aditivno povećanje u slučaju dodavanja FGF2 i EGF u kulturama sadnju niske gustoće stanica. Smatra se da EGF-reaktivni neuralne matične stanice germinalnih zone 14,5 dana starih mišjih embrija su linearni potomci FGF-reaktivni živčanih matičnih stanica, koja se prvi put pojavljuju nakon 8,5 dana gestacije. Potencijalni fenotipa živčane matične i ishodišne stanice ovisi o složenom utjecaju njihove okoline. Kada imunofenotipizacije od živčanih stanica i hipokampusa Periventrikularna područjima 8-12- i 17-20 tjedana starih ljudskih embrija po cytofluorometry protoka pokazala značajnu varijabilnost povezana i sa gestacijskim i pojedinačne ustavne značajke donatora biomaterial. Kada kultiviranje živčanih stanica prekursora u mediju bez seruma s selektivni EGF, FGF2 i NGF neurosfera nastaje pri brzini uglavnom neovisno o trudnoće. Stanice različitim područjima mozga 5-13 tjedana ljudskog embrija u kratkom uzgoj s FGF2 u jednoslojnim kulturama na laminin supstratu u prisustvu tragova faktora rasta podržavaju proliferaciju za 6 tjedana s visokim postotkom nestinpozitivnyh stanice na pozadini spontanog formiranja stanica s oznakama svih tri linije neuralna diferencijacija. Stanice izolirane iz ljudskog embrija mezencefalona tijekom trudnoće do 13 tjedana za proliferaciju pod utjecajem EGF i također neurosfera. Pomoću kombinacije EGF i FGF2 je postignut sinergistički učinak. Najintenzivniji porast broja živčanih matičnih stanica promatrana s pojavom neurosfera kada se uzgajaju tkiva moždana kora od 6-8 tjedana starih ljudskih embrija u prisustvu EGF2, IGF-1 i 5% konjskog seruma na podlogu s fibronektina.

Treba napomenuti da ostaju otvoreni pitanja o gestacijskoj dobi i odjelu embrijskog CNS-a, čiji je tkivo poželjno koristiti u svrhu neurotransplantacije. Odgovori se nalaze u razvoju mozga neurogeneza, koja se nastavlja tijekom prenatalnog razdoblja - unutar vremenskog okvira kada se epitel neuralne cijevi tvori strukturu višeslojne. Smatra se da je izvor matičnih stanica i novih neurona radijalnom glija stanica se sastoji od izduženog stanica s dugim procesima, radijalno usmjeren u odnosu na zid vezikula mozga, a u kontaktu s unutarnjom površinom klijetki i vanjskih zidova cerebralne pia površine. Ranije radijalne glija obdarena samo funkciju neurona trakta, kojim se migracija neuroblasts iz ventralne površine u dijelovima, i to daje okvirni ulogu u formiranju ispravne laminarnog organizaciji kore. Danas je utvrđeno da se razvoj radijalne glia transdifferentira u astrocite. Mnogo toga je smanjen u sisavaca nakon rođenja, ali one vrste životinja u kojima je radijalna glija ustraje do odrasle dobi neyronogenez aktivnih tokova iu postnatalnom razdoblju.

U kulturi stanica od radijalnih glija embrionalnih neokortikalnoj oblikovan glodavaca neurona i glija stanice, te na razvoj embrija trudnoće od 14 do 16 dana (vrijeme maksimalnog intenziteta neyronogeneza u moždanoj kori štakora i miševa) koje nastaju uglavnom neurona. Na 18. Dan embrionalne diferencijacija pomaknut prema formiranju astrociti sa značajnim smanjenjem broja novonastalih neurona. Označavanje u situ radijalne glija stanicama korištenjem GFP dozvoljeno otkriti mjehurića u šupljine mozga 15-16 dana starih embrija štakora asimetričnu raspodjelu označenih ćelija s pojavom stanice kćeri koje imaju imunološke i elektrofiziološke karakteristike neuroblasts. Važno je napomenuti da je, prema rezultatima dinamičkih zapažanja proizlaze neuroblasts koristi majka stanično radijalne glija stanica migrirati na površinu pia.

Endogeni marker radijalne glija je intermedijer filament protein nestin. Fluorescentnom stanice sortiranja protočnom obilježenog s retrovirusom koji je povezan s GFP i izraženi pod kontrolom nestin, pokazala je da se matične stanice gyrus području dentatnog hipokampusa i hilus osobi (materijal dobiven je na operacije epilepsije) izražavaju nestin. Dakle, oni pripadaju radijalna glija, koji kod ljudi, kao u drugih sisavaca, očuvana samo u nazubljenih brazdi.

Međutim, učinkovitost transplantacije stanica ovisi ne samo visoku održivost donora stanica i njihovu potencijalnu i razlikovanje značajku zamijeniti neispravne stanica, ali u prvom redu usmjereno kretanje. Iz migracijske sposobnosti ovisi potpunu funkcionalnu integraciju transplantiranih stanica - bez poremećaja u citoarhitektici mozga primatelja. Od radijalna glija stanica u postnatalnom razdoblju gotovo u potpunosti izloženi smanjenje, trebali bi saznati kako su odrasli primatelji donatora stanica može premjestiti iz područja transplantacije u središtu oštećenja mozga. Postoje dvije verzije migracije stanica u središnji živčani sustav, neovisno o radijalne glija: fenomen tangencijalne migracije i kretanje neuroblasts u razvoju moždane kore okomito na radijalnu glija mreže, kao i migracija „string” ili „lanac”. Posebno, migracija živčanih prekurzorskih stanica u subventrikularnoj zoni njušku pojavljuje u olfaktornog bulbusa kao niz tijesno susjednih stanica okruženih glija stanica. Smatra se da ove stanice koriste partner stanica kao migracija supstrata, kao što je glavni regulator interakcije stanica-stanica je PSA-NCAM (neuronska adhezijske molekule polisialirovannaya stanice). Slijedom toga, migracija neurona ne mora nužno zahtijevati sudjelovanje radijalnih glia ili već postojećih aksonskih veza. Vneradialnaya oblik kretanja stanica „string” u njušku migracijskog toka se održava tijekom cijelog života, što ukazuje na stvarnu mogućnost ciljane isporuke transplantiranih neuronskih nezrelih stanica u zrele živčani sustav.

Postoji hipoteza o postojanju linija matičnih stanica u posebnom pažnjom mozga, prema kojoj se u ranom stadiju razvoja mozga Matične stanice su stanice koje neuroepiteliju u procesu sazrijevanja u radijalnom transdifferentiate glia. U odrasloj dobi uloga matičnih stanica obavlja stanice koje imaju znakove astrocita. Unatoč brojnim kontroverznim pitanjima (polemika u vezi s matičnim stanicama hipokampusa, kao i dubokim dijelovima mozga koji nemaju slojevitu strukturu kore i razvijanje talamičkih humci, gdje je radijalna glija nema), jasan i jednostavan koncept nasljeđivanja fenotipu matičnih stanica tijekom ontogeneza izgledom vrlo atraktivna.

Učinak čimbenika mikrookruženja na određivanje i naknadnu diferencijaciju stanica neuralnih diferencijalnih stanica jasno je dokazano u transplantaciji matičnih stanica zečjeg kralježničke moždine u različitim dijelovima zrelog živčanog sustava. Kada su matične stanice bile transplantirane u denture gyrus ili u područje migracije neurona od mirisnih žarulja, promatrana je aktivna transplantacija stanica na brojne neurone. Transplantacija matičnih stanica u kičmenoj moždini i područje hipokampusa je rezultiralo u formiranju astrocita i oligodendrocita, dok je u transplantacije u dentate gyrus nastali ne samo glija stanica, ali i neurona.

U spolno zrelom štakoru, broj stanica koje se dijele u zubnom girusu može doseći nekoliko tisuća dnevno - manje od 1% od ukupnog broja žitarica. Neuroni čine 50-90% stanica, astrocita i drugih glialnih elemenata - oko 15%. Preostale stanice nemaju antigene znakove neurona i glia, ali sadrže antigene endotelnih stanica, što ukazuje na blisku vezu između neuronske i angiogeneze u dentatnom girusu. Podupiratelji mogućnosti diferencijacije endotelnih stanica u neuronske progenitorske stanice odnose se na sposobnost endotelozina in vitro da sintetiziraju BDNF.

Impresivni senzor za montažu neuronske mreže: u procesu diferencijacije prekurzorskih stanica migraciju stanica granula u dentatnog girusa i oblik klice raste prema zoni Saz hipokampalne sinapsi i tvore sa glutamatergnih piramidalnih neurona i inhibicijskim interkalarna. Novoizrađene zrna stanice integrirati u postojeće neuronskih sklopova za 2 tjedna, a prve sinapse već se pojavljuju 4-6 dana nakon pojave novih stanica. Čestim uprave zrele životinja BrdU ili 3H-timidinom (jedan smjer identificirati odrasle matične stanice) otkrila je veliki broj označenih neurona i astrociti u hipokampusu, što ukazuje na mogućnost stvaranja novih neurona ne samo u dentale gyrus, nego iu drugim dijelovima hipokampusa. Kamate u procese diobe, diferencijacije i smrti stanica u dentale gyrus hipokampusa u mozgu zrele zbog činjenice da su u nastajanju ovdje neuroni lokaliziran u jednoj od ključnih mjesta hipokampusa, odgovorne za procese učenja i pamćenja.

Tako, danas su otkrili da se iz stanica subependimnoy zoni postraničnu komoru zrelih glodavaca pojaviti Neural prethodnika stanica migracije uz njušku migracijskih struji, nastala uzdužno orijentiranih astroglija stanice na olfaktornog bulbusa, gdje su ugrađen u sloju zrna stanica i diferenciraju u neurone koji struktura. Migracija nasljedne neuronska stanica nađenih u njušku migracijskih struja odraslih majmuna, što upućuje na mogućnost stvaranja novih neurona u mirisni žarulja primata. Živčane matične stanice izolirane iz olfaktornog bulbusa odraslih i preveden u liniji klonirane stanice koje se diferenciraju u neurona, astrocita i oligodendrocita. Matične stanice mogu se naći u mozgu zrelih hipokampusa štakora, miševa, majmuna i čovjeka. Živčane matične stanice subgranular zoni dentatnom pojas su izvor prekursora stanica koje migriraju u medijalni i lateralni kraka hipokampusa, gdje su diferencijacije u zrele zrna stanica i glija elemenata. Aksoni formiraju de novo nazubljenih brazdi neurone pratiti natrag do polja Saz, što pokazuje da novoformirane neuroni uključeni u provedbu hipokampusa funkcija. U asocijativnih područja neokorteksa od odraslih majmuna mozga otkrili stanica prekursora neurona migriraju iz subventrikularni zoni. Novi sloj VI moždane kore piramidalnih neurona novi miševi otkriva kroz 2-28 tjedana nakon izazvanih oštećenja i smrti neurona izvornih ovog sloja uslijed migracije dormantnyh ranijim nezrelih stanica u subventrikularni zoni. Konačno, stvarnost postnatalne neyronogeneza u ljudskom mozgu pokazuju dvostruki porast broja neurona, nastavljena je u prvih 6 godina nakon rođenja.

Nije bitno za praktično presađivanje stanica pitanje regulacije procesa reprodukcije i diferencijacije živčanih stabala i progenitornih stanica. Najveća vrijednost među čimbenicima koji deprimiraju proliferaciju živčanih ishodišne stanice imaju glukokortikoida, koji drastično smanjuje broj podjela, dok je uklanjanje nadbubrežne žlijezde, naprotiv, znatno povećava broj mitoze (Gould, 1996). Važno je napomenuti da je morfologije od dentale gyrus u glodavaca najintenzivnije tijekom prva dva tjedna postnatalnog razvoja u nedostatku reakcije na stres na pozadini oštar pad proizvodnje i lučenja steroidnih hormona kore nadbubrežne žlijezde. Kortikosteroidi inhibiraju migraciju zrnaca stanica - novi neuroni se ne integriraju u granulirani sloj zubnog gyrusa, ali ostaju u zubu. Pretpostavlja se da se istodobno krši proces stvaranja sinaptičkih veza. Zaštita stanica od takvog „steroida agresija” provodi minimalnom ekspresije mineralnih glukokortikoidne receptore u razmnožavanje stanica zrna ne samo za vrijeme razvoja dentatnog girusa, ali u zrele životinja. Ipak, sve neurona u mozgu neurona hipokampusa je karakteriziran visokim sadržajem glukokortikoidnog receptora, što uzrokuje pritisak na hipokampus. Psihoemotionalni stres i stresne situacije inhibiraju neurogenezu, a kronični stres dramatično smanjuje sposobnost životinja da nauče nove vještine i učiti. Izraženije negativno djelovanje kroničnog stresa na neurogenezu je sasvim razumljivo s obzirom na pretežno stanje mirovanja matičnih stanica u mirovanju. Kada imobilizacija trudnih štakora (glodavaca - supramaksimalnog faktor stresa) postavljen kao prenatalnog stres uzrokuje smanjenje broja stanica u dentatnog girusa i uglavnom inhibira neyronogenez. Poznato je da su glukokortikoidi uključen u patogenezu depresivnih stanja, što je morfološki ekvivalent kočenja neyronogeneza, patološko restrukturiranje neurona i interneuronskih veza, kao i smrt živčanih stanica. S druge strane, antidepresivi kemoterapijska sredstva aktiviraju stvaranje neurona u de novo, što potvrđuje vezu između procesa stvaranja novih neurona u hipokampusu i razvoj depresije. Značajan utjecaj na neyronogenez imaju estrogenske, učinci koji su nasuprot djelovanje glukokortikoida i podržati širenje i opstanak neuronskih ishodišnih stanica. Treba napomenuti da estrogeni značajno povećavaju sposobnost životinja da uče. Neki autori s utjecajem estrogena povezuju cikličke promjene u broju stanica-žitarica i prelaze njihov broj u ženki.

Poznato je da kontrolira neyronogenez EGF, FGF i BDNF, međutim, mehanizmi vanjske signale do matičnih stanica mitogenima i faktora rasta su nedovoljno istražena. Nađeno je da podupire PDGF in vitro neuronske loze prekurzorskih stanica, te cilijarni neurotrofni faktor (CNTF), kao i trijodotironin stimulira nastajanje pretežno glija stanica astrocita i oligodendrocita -. Hipofiza Adenilil-ciklaza-aktivirajući protein (PACAP) i vazoaktivni intestinalni peptid (VIP) aktivacije proliferacije živčanih stanica, inhibiraju prekurzorskih diferencijaciju procesa stanica kćeri. Opioidi, osobito u slučaju produljenog izlaganja, značajno inhibiraju neuronsku pojavu. Međutim, matične stanice i neuronske ishodišne stanice-prekursore dentale gyrus nije otkrio opioidnih receptora (koji su prisutni u razlikovanju neurona u embrionalnom razdoblju), koja ne dopušta procijeniti izravne učinke opioida.

Potrebe praktične regenerativne i plastične medicine prisilile su istražitelje da posvete posebnu pažnju na proučavanje višestrukih i višestrukih matičnih stanica. Realizacija tih svojstava na razini regionalne matične stanice odraslog organizma u dugoročnom razdoblju mogla bi osigurati razvoj potrebnog transplantacijskog materijala. Prethodno je prikazano da epigenetski poticaj neuralnih matičnih stanica omogućuje dobivanje proliferativnih stanica već nastalih neuronskim fenotipovima, što ograničava njihov broj. U slučaju višestruko važne embrionalnog svojstva proliferacije matičnih stanica dok dovoljan broj stanica se javlja ranije neuronske diferencijaciju stanice su propagira i lako pretvoriti u neuralne fenotipa. Za živčanih matičnih stanica PGCs izolirana iz stanične mase od unutarnjeg blastociste uzgojenih uz prisustvo i obvezno LIF, koji čuva svoj totipotency i sposobnost beskonačno dijeliti. Nakon toga, retinoična kiselina je inducirana neuralnom diferencijacijom ESC. Transplantacija Tako dobiveni živčanih matičnih stanica u oštećenom kinolina i 6-hidroksidopamin strijatumu pratnji njihove diferencijacije u dopaminergičkom i serotonergičkom neurona. Nakon uvođenja u komore u mozgu embrija štakora živčanih prekurzorskih stanica iz PGCs migrirati u različitim dijelovima mozga primatelja, uključujući korteks, striatumu, septum, talamus, hipotalamus, i malog mozga. Stanice ostaju u šupljini ventrikula, epitelne oblik strukture nalik neuralne cijevi, kao i individualne otoci neneyralnoy tkiva. U parenhimu mozga primatelja embrija, transplantirane stanice proizvode tri glavne vrste stanica u živčanom sustavu. Neki od njih imaju izdužene apeksne dendrite, piramidalna stanična tijela i bazalne aksone koji projiciraju u corpus callosum. Astrociti donator podrijetlo protežu svoje procese na obližnje kapilare, a oligodendrociti su usko u kontaktu s mijelin rukavima, sudjeluje u stvaranju mijelina. Dakle, neuronske ishodišne stanice izvedene iz PGCs in vitro, sposoban za vođenje adekvatne migracije i diferencijacije signale regionalne mikroklima pruža mnoga područja u razvoju moždanih neurona i glija u.

Neki autori smatraju mogućnost de-i regionalne transdiferencijacija matičnih stanica odraslih. Neizravna potvrda dediferencijacije stanica u kulturi sa širenjem svojih potencija su podaci o usadenosti živčanih matičnih stanica u koštanoj srži miševa s kasnijim razvojem tih staničnih linija, čime je funkcionalno aktivnim stanica periferne krvi. Nadalje, transplantacija genetski označenih (lacZ) neurosphere stanica iz zrelog ili embrionalnog mozga u mozak ozračenog miševa s mielosupresije, dovela je do stvaranja matičnih stanica ne samo neuronske derivate, ali uzrokuje stvaranje krvnih stanica, što ukazuje da pluripotentno neuralnog matičnih stanica, ostvarenih izvan mozga. Tako, živčane matične stanice mogu diferencirati u krvne stanice pod utjecajem signala iz koštane srži mikrookoliša privremene transformacije u hematopoetske matične stanice. S druge strane, za transplantaciju koštane srži hematopoetskih matičnih stanica u mozgu postavite njihovu diferencijaciju pod utjecajem mikro okolini moždanog tkiva u glija i živčanih stanica. Prema tome, potencijalni diferencijal rovochny neuronskih i hematopoetskih matičnih stanica nisu ograničeni specifičnost tkiva. Drugim riječima, lokalne mikro okolinu i drugi faktori osim karakteristikama tkiva mozga i koštane srži mogu promijeniti orijentaciju diferencijacije ovih stanica. To je pokazalo da živčane matične stanice ubrizgava u venski sustav ozračenih miševa, stvorena u slezeni i koštanoj srži stanovnika mijeloične, limfne i nezrelih hematopoetskih stanica. In vitro učinak koštane srži morfogenetskih proteina (BMP) na preživljavanje i diferencijacije živčanih matičnih stanica je određena, kao u ranim fazama embriogeneze u razvoju neuralnog i glija smjerovima. Kultura živčanih matičnih stanica u 16 dana stari embriji štakora inducira BMPs astroglia i neurona, dok je u kulturama matičnih stanica deriviranih iz perinatalne mozga astrocitima formiranih samo. Nadalje, BMP potisnuti generaciju oligodcndrocitc in vitro koji se pojavljuju samo pri dodavanju tikva antagonist BMP.

Postupci inherentnu vidonespetsifichnost transdiferencijacija: hematopoetske matične stanice ljudske koštane srži transplantirani u striatum odraslih štakora, migriraju u bijeloj tvari vanjskog kapsule, ipsi- i kontralateralnoj neokorteksa gdje se dobije astrotsitopodobnye staničnih elemenata (Azizi et al, 1998.). U alotransplanaciji od matičnih stanica koštane srži u postraničnu komoru novorođenčadi miševa migracije hematopoetskih matičnih stanica može se pratiti u prednjem mozgu i cerebralne strukture. Striatum i molekularna sloj hipokampalnog premješten stanice transformirane u astrocitima, a olfaktornog bulbusa, unutarnji sloj od cerebralne granula stanica i formaciju moždanog debla mrežaste da formiraju neuronske stanice s pozitivna reakcija na neurofilamentima. Nakon intravenske injekcije hematopoetskih stanica odraslih miševa GFP-obilježenog mikro- i astrociti su detektirane u neokorteksu, talamus, mozga i malog mozga.

Osim toga, mezenhimalne matične stanice iz koštane srži koje bi mogle dovesti do svih vrsta stanice vezivnog tkiva, u određenim uvjetima, može također proći neuronske transdiferencijacija (Sjetite se da je izvor embrionalnog mezenhimu su neuralni greben stanice). Pokazano je da stanice strome ljudske koštane srži i miš u kulturi in vitro, u prisustvu EGF ili BDNF, express obilježivača živčanih prekurzorskih stanica nestin i dodavanje različitih kombinacija faktora rasta dovodi do formiranja stanica s oznakama glijala (GFAP) i neurona (jezgre proteina NeuN). Obilježene singenični mezenhimalne matične stanice transplantirane su u lateralnom moždanu komoru od novorođenih miševa, migriraju i nalaze se u prednjem dijelu mozga i malog mozga, bez razbijanje citološ-arhitektura mozga primatelja. Koštane srži mezenhimalne matične stanice diferenciraju u zrele astrocite u striatumu i molekularni sloj hipokampusu i popunjavanje olfaktornog bulbusa, mali mozak i granula retikularno stvaranje slojeva, koji se pretvaraju u neuronima. Mezenhimalne matične stanice koštane srži humanog su sposobne diferencirati se u in vitro i nakon transplantacije macroglia integrirati u strukturi mozga štakora. Izravno transplantacija koštane srži mesenchvmal matičnih stanica u hipokampusu odraslih štakora također u pratnji svojih migracija u parenhimu mozga i neuroglial diferencijacije.

Pretpostavlja se da transplantacija matičnih stanica koštane srži može proširiti mogućnosti stanične terapije za bolesti CNS karakterizirane pretjeranom patološkom smrću neurona. Valja napomenuti, međutim, da nisu svi istraživači prepoznati činjenicu međusobnog transformacije živčanih i krvotvornih matičnih stanica, posebno u uvjetima in vivo, što je opet zbog nedostatka pouzdanih pokazatelja za procjenu njihove transdiferencijacija i daljnji razvoj.

Transplantacija matičnih stanica otvara nove vidike za staničnu gensku terapiju nasljednih neuroloških poremećaja. Genetska modifikacija živčanih matičnih stanica uključuje umetanje regulatornih genetskim strukturama čiji su proizvodi u interakciji s staničnog ciklusa proteina u automatskom načinu rada kontrole. Transdukcija tih gena u embrionske prekurzorskih stanica se koristi za propagiranje živčanih matičnih stanica. Većina genetski modificiranih staničnih klonova ponaša kao stabilnim staničnim linijama, bez znakova transformacije u in vitro ili in vivo, ali ima izraženu sposobnost kontakt inhibicije proliferacije. Kada se pomnoži transplantacija stanica transfeciranih prošlosti ugrađen u tkivo primatelja, bez razbijanje cytoarchitectonics i prolazi bez malignu transformaciju. Donatorski neuralne matične stanice se ne deformiraju zonu integracije i jednako natjecati za prostor s domaćinom ishodišne stanice. Međutim 2-3-og dana intenziteta dijeljenjem transfektata stanica dramatično smanjuje, što odgovara kontakt inhibicije njihove proliferacije in vitro. U primatelju embrija živčane matične transfektata nema anomalije središnjeg živčanog sustava, svi dijelovi mozga u kontaktu s mladica, normalno razvijati. Nakon transplantacije, klonovi živčanih matičnih stanica vrlo brzo migriraju iz područja uprave i često proširiti izvan odgovarajućih germinalnih zona rostralan trakta adekvatno integriraju s drugim područjima mozga. Ugradnja genetski modificirane klonove i transficirane stanične linije živčanih matičnih stanica u mozgu organizam domaćina nije samo tipično za embrionalnom razdoblju: ove stanice su usađene u više zona CNS fetusa, novorođenčeta, odrasla, pa čak i starenje organizma primatelja i izložba istodobno je kapacitet za adekvatnu integraciju i diferencijacija. Posebno nakon transplantacije u šupljinu moždanih klijetki transfektirane stanice migriraju bez oštećenja krvno-moždanu barijeru, a su sastavni dio stanične funkcionalnog tkiva mozga. Donatorski neuroni čine sinapse prikladno i izražavaju određene ionske kanale. Uz održavanje integriteta krvno-moždana barijera astroglia izvedenih živčanih matičnih stanica transfektanata, pruža procese na cerebralne krvne žile i oligodendrociti donor podrijetla express mijelinskog bazičnog proteina i mijelinacijskih neuronskih procesa.

Pored toga, neuralne matične stanice su transficirane za upotrebu kao stanični vektori. Takvi vektorski-genetska konstrukta osigurati stabilni in vivo ekspresija stranih gena koji sudjeluju u razvoju živčanog sustava ili se koriste za ispravak genetski defekt, jer su produkti tih gena u stanju kompenzirati različitim biokemijskim abnormalnostima u CNS. Visoka migracijska aktivnost transficiranih matičnih stanica i adekvatna implantacija u embrionalnim zonama raznih regija mozga u razvoju omogućuju nam nadu potpunu obnovu nasljednog deficita staničnih enzima. Kada modeliranje sindrom, ataksija-telangiektazija (line mutanta miševa pg i PCD) u Purkinjeovim stanicama malog mozga nestaju eksperimentalne životinje tijekom prvih tjedana postnatalnog razvoja. Pokazalo se da uvođenje neuronskih matičnih stanica u mozak takvih životinja prati njihovu diferencijaciju u Purkinje stanice i granularne neurone. Kod pcd mutanata djelomično se korigira koordinacija pokreta i smanjuje se intenzitet tremor. Slični rezultati dobiveni su u transplantaciji kloniranih ljudskih neuronskih matičnih stanica na primate u kojima je Purkinjeova stanična degeneracija inducirana onkanazom. Nakon transplantacije, donirane neuronske matične stanice su pronađene u granulama i molekularnim slojevima, kao i u Purkinje staničnom sloju cerebelarne parenhima. Stoga je genetska modifikacija neuronskih progenitorskih stanica sposobna osigurati stabilnu, predanu modifikaciju fenotipa koji je otporan na vanjske utjecaje. To je osobito važno u patološkim procesima povezanim s razvojem primatelja čimbenika koji ometaju preživljavanje i diferencijaciju donorskih stanica (na primjer, s imunološkom agresijom).

Mucopolysaccharidosis tip VII u ljudi karakterizira progresivan neurodegeneracije, i odgođena intelektualni razvoj, da je u eksperimentima na miševima modelira brisanja mutacije gena beta-glukuronidaze. Nakon transplantacije u mozgu klijetke novorođenačkog deficijentnih miševa primatelja transficirane živčane matične stanice koje luče beta-glukuronidaze, stanice donora se nalazi u prvom krajnjem području te raštrkani cerebralnom parenhimu stabilno korrigiruya lizosomalni integritet u mozgu mutantnih miševa. U modelu Tay-Sachs bolesti transduciranim s retrovirus živčanih matičnih stanica u maternici primjenu na miša fetusa i novorođenčadi miševa transplantacije osigurava djelotvornu ekspresiju beta-podjedinice beta-heksosaminidaze u primatelja s mutacijom koja vodi do abnormalnim nakupljanjem beta 2-gangliozid.

Drugo područje regenerativne medicine je potaknuti proliferativni i potencijal diferencijacije pacijenta vlastite neuralne matične stanice. Posebno, živčanih matičnih stanica koje luče NT-3 pri hemisection leđne moždine, moždanog asfiksije štakori eksprimira NGF i BDNF u pregradom i bazalnih ganglija, tirozin hidroksilaze - u striatumu i reelin - malog mozga i mijelin bazični protein - u mozgu ,

Međutim, problemi stimulacije neyronogeneza plaća nije dovoljno pažnje. Nekoliko radova ukazuju na to da je funkcionalna opterećenje na živčane centre odgovorne za razlikovanje mirisa, ogleda se u stvaranju novih neurona. Transgena miševi molekule neuronske adhezijske neyronogeneza smanjenje intenziteta i smanjenje broja migracije neurona u mirisni žarulja je povezana s oštećenjem sposobnost da pravi razliku mirise, iako je prag mirisa i kratkoročni mirisni memorije nije povrijeđeno. U regulaciji igra važnu ulogu neyronogeneza funkcionalno stanje stanice u dentale gyrus: slabljenje učinka izloženosti glutamata, žitarice nakon uništenja stanica entorinalnog korteksa pridonosi proliferacije i diferencijacije neurona i vlakana probijenog stimulacija put (primarni aferentnih ulaz u hipokampusu) uzrokuje inhibicije neyronogeneza. Antagonisti NMDA receptora aktiviranih procesa neoplazma neurona, dok su agonisti, s druge strane, smanjuje intenzitet neyronogeneza koji efekt sličan djelovanje glukokortikoida. U literaturi postoje sukobljenih rezultati istraživanja: informacije o eksperimentalno dokazane inhibitornih efekata ekscitatornog neurotransmitera glutamata na neyronogenez nije u skladu s podacima o poticanju uzgoja nezrelih stanica i pojave novih neurona povećanjem napadi u hipokampusu životinja s eksperimentalnim i kainske pilocarpic modela epilepsije. Istodobno, tradicionalni model epilepsije izazvane opetovanom pod-praga stimulacije određenih područja mozga (za potpalu) i odlikuje se manje teškog gubitka neurona neyronogeneza intenziteta povećava samo u kasnoj fazi potpalu gledano u štetu hipokampusu i smrti neurona. Pokazano je da je u epilepsije napadaj poticanje neyronogenez s abnormalnim lokalizaciju novih granula neurona, od kojih su mnogi pojavljuju ne samo u dentale gyrus, ali iu hilus. Ti neuroni su važne u razvoju klijanja mossy vlakana, kao što aksoni su odsutni iz normalnih kolaterala inverzni tvore sinapse s više susjednih zrna stanica.

Upotreba regionalne živčanih matičnih stanica otvara nove perspektive za korištenje stanične transplantacije u liječenju metaboličkih i genetskih bolesti, neurodegenerativnih bolesti demijelinizacije i post-traumatske poremećaje CNS funkcijama. Prije izvršenja transplantacije stanica supstitucije, jedna od metoda odabire i proširuje potrebnu vrstu neuronskih progenitorskih stanica ex vivo s ciljem njihove kasnije unošenja izravno u oštećenu površinu mozga. Terapijski učinak u ovom slučaju je zbog zamjene oštećenih stanica ili lokalnog oslobađanja čimbenika rasta i citokina. Ova metoda regenerativno-plastične terapije zahtijeva transplantaciju dovoljno velikog broja stanica s unaprijed određenim funkcionalnim karakteristikama.

Odgovarajuće treba priznati i daljnja istraživanja na molekularnoj karakteristikama i regenerativne i plastike potencijala matičnih stanica u zrele mozga, kao i sposobnost da transdiferencijacija regionalnih matičnih stanica različitog porijekla tkiva. Danas prosijani antigeni hematopoetskih matičnih koštane srži stanica sa određivanje marker kombinacije stanica sposobnih transdifferentiate u živčanih matičnih stanica (CD prekurzorskih 133+, 5E12 + CD34-, CD45-, CD24). Stanice koje tvore in vitro neurosfere i stvaraju neurone dobivaju se tijekom transplantacije u mozak novorođenih imunodeficientnih miševa. Interes za ksenon-transplantologiju stanica rezultat je studija o mogućnosti transplantacije matičnih stanica u pojedincima evolutivno udaljenih svojti. Ostaje bez odgovarajuće tumačenje rezultata implantacije živčanih matičnih stanica u području tumora mozga: transplantirane stanice aktivno migriraju kroz cijeli volumen tumora, bez odlaska izvan njega, te uvođenje stanica u netaknutom dijelu mozga promatrati njihovo aktivno migraciju prema tumora. Pitanje biološkog značaja takvog migracija ostaje otvoreno.

Treba napomenuti da je uspješna transplantacija živčanih matičnih stanica, kao i drugih živčanih ishodišne stanice izvedene iz hESCs, moguć je samo pod uvjetima upotrebe vrlo živčanih ishodišne stanice kao nediferencirani embrionalnih transplantacija matičnih stanica odraslih imunokompetentni primatelj neizbježno pretvara u teratoma i teratokarcinom. Čak i minimalna količina slabo diferenciranih stanica suspenzije stanica raste dramatično donatora i tumorske graft neprihvatljivo povećava rizik nastajanja tumora ili neneyralnoy tkiva. Priprema homogene populacije neuronskih prekurzorskih stanica moguća kada se koriste kao alternativni izvor tkiva donorske stanice nastaju u određenim fazama uobičajeno teče embriogeneze. Drugi je pristup pažljivom uklanjanju neželjenih populacija stanica određenim linijskim odabirom. Opasnost također predstavlja primjenu u svrhu neurotransplantacije ESC nakon njihove nedovoljne izloženosti in vitro s faktorima rasta. U ovom slučaju, program neuralne diferencijacije ne može se isključiti formiranjem struktura koje su svojstvene neuralnoj cijevi.

Danas je jasno da živčane matične stanice pokazuju spontani refleks za CNS patoloških promjena i imaju izraženu regenerativne-plastika učinak. Mikrookolina na izvor stanične smrti živčanog tkiva simulira orijentacija diferencijaciju cijepljenih stanica, na taj način dobivanje manjak specifičnih živčanih elemenata u CNS području. U određene neurodegenerativne procese javljaju neurogeni signale reprizi neyronogeneza i zrelih živčanih matičnih stanica u mozgu su u mogućnosti odgovoriti na informacijama uputstvo. Grafički prikaz terapijskih mogućnosti neuronskih matičnih stanica pruža brojne podatke iz eksperimentalnih studija. Intracisternalnom uprave klonovi živčanih matičnih stanica u životinja s ligacijom na srednje cerebralne arterije (ishemijski udar model) pomaže u smanjenju površine i volumena destruktivnih promjena u području mozga, posebno u slučaju transplantacije živčanih matičnih stanica s FGF2. Promatrana pomoću imunocitokemijskih s migracijom stanica donatora na ishemijskom području uz naknadno ugrađivanje s intaktnim stanicama mozga primatelja. Transplantacija nezreli neuroepitelne stanične linije MHP36 miš u mozgu štakora u eksperimentalnoj udara poboljšati senzomotoričku funkciju i uvođenje tih stanica u komore mozga poboljšava kognitivne funkcije. Kao rezultat transplantacije, štakori izveden hematopoetske stanice koštane srži humanog neuronske uklanjaju disfunkciju moždane kore uzrokovane ishemijske ozljede. Tako heterologne neuralne ishodišne stanice migriraju od mjesta injekcije u zoni destruktivnih promjena u tkivu mozga. Intrakranijalno transplantacija koštane srži homolognom traumatskih povreda mozga korteksa kod štakora rezultira djelomičnom oporavku motoričke funkcije. Stanice donora ugrađuju se, proliferiraju, prolaze kroz neuralnu diferencijaciju u neurone i astrocite i migriraju prema fokusu lezije. Kada se daje striatum odraslih štakora s eksperimentalnim udara klonirane ljudske živčane matične stanice zamjene oštećenih stanica CNS i djelomično vraćanje narušenom mozga.

Ljudske neuronske matične stanice su pretežno izolirane od embrionalnog telencefalona, koji se značajno razvija kasnije nego kod više kaudalnih područja debla. Mogućnost izolacije živčanih matičnih stanica iz leđne moždine 43-137 dana humanog fetusa, kao u nazočnosti EGF i FGF2 ove stanice tvore neurosfera i rane prolaza izložbeni multipotentiality razlikovanje u neurone i astrociti. Međutim, dugoročno njegovanje neuronskih ishodišne stanice (preko 1 godine) ko im multipotency - takve stanice mogu razlikovati samo u astrociti, to jest, oni su unipotentne. Regionalne neuronske matične stanice mogu se dobiti kao rezultat parcijalne bulbektomije i nakon razmnožavanja u kulturi u prisustvu LIF-a transplantirane su istom pacijentu s neurodegenerativnim promjenama u drugim dijelovima središnjeg živčanog sustava. U klinici je primijenjena zamjenska terapija stanica primjenom neuralnih matičnih stanica za liječenje pacijenata s moždanim udarom praćenih oštećenjem bazalnih ganglija mozga. Kao rezultat transplantacije donorskih stanica, kliničko stanje većine bolesnika je poboljšano.

Neki autori smatraju da je sposobnost živčanih matičnih prizhivlyatsya stanice migriraju i integrirati u različitim područjima živčanog tkiva oštećen središnji živčani sustav otvara neograničene mogućnosti za staničnu terapiju nije samo lokalna, ali i velika (moždani udar ili asfiksija), multiochagovyh (multipla skleroza), pa čak i globalno ( većina naslijeđenih metaboličkih poremećaja ili neurodegenerativne demencije) patoloških procesa. I doista, kada presađivanja kloniranog živčanih matičnih mišje i ljudske stanice životinja primatelja (miševi i primati, respektivno) s degeneracije dopaminergičkih neurona u mezostrialnoy sustavu inducirane uvođenjem metil-fenil-tetrapiridina (model Parkinsonove bolesti), 8 mjeseci prije transplantacije, donatora neuronske matične stanice integrirani su u CNS primatelja. Mjesec dana kasnije, transplantirane stanice lokalizirane su bilateralno duž središnjeg živčanog sustava. Dio tako dobivenog neuronskog podrijetla izražava tirozingidrolazu donatora u odsutnosti imunološkog odgovora na transplantaciju. U štakora obrađena sa 6-hidroksidopamin (drugi eksperimentalni model Parkinsonove bolesti), prilagodbom mikrookolini transplantiranih stanica domaćina u mozgu je određena kultiviranjem uvjeta živčanih matičnih stanica prije transplantacije. Živčane matične stanice su brzo razmnožavanje in vitro pod utjecajem EGF, sastavljena za deficita dopaminergičkih neurona u striatum oštećena učinkovitije nego stanica iz 28 dana starih kultura. Autori vjeruju da je to zbog gubitka sposobnosti da vidim signale odgovarajuće diferencijacije tijekom stanične diobe in vitro-neuronska ishodišnih stanica.

U nekim studijama pokušali poboljšati utjecaj oštećenih striatuma reinnervation procesima presađivanja u ovom području embrionalnih striatuma stanica kao izvor neurotrofhe faktora na istodobnu transplantaciju dopaminergičkih neurona ventralnog mezencefalona. Kao što se ispostavilo, učinkovitost neurotransplantacije u velikoj mjeri ovisi o načinu ubacivanja embrijskog tkiva. Kao rezultat istraživanja pripreme presađivanja fetalnog živčanog tkiva u ventrikularni sustav u mozgu (kako bi se izbjegle ozljede strijatalnu parenhim) dobije informacija o njihovoj pozitivan učinak na parkinsonskih motora defekta.

Međutim, u drugim studijama, eksperimentalna istraživanja su pokazala da transplantaciju u mozgu klijetke pripreme embrionalnog trbušna mezencefalona živčano tkivo sadrži dopaminergički neuroni kao presađivanje GABAergičko neuronske elemente u embrionalnom štakora striatum gemiparkinsonizmom ne doprinosi obnovi i slabovidnih funkcija dopaminskog sustava. Naprotiv, fosforilacija potvrdio dokaz o niskoj opstanak dopaminergičkih neurona ventralnog mezencefalona, transplantiranih u striatumu štakora. Terapijski učinak intraventrikularne transplantacija embrionalnog ventralnog mezencefalona živčanog tkiva tek kad je istovremeno u implantaciji denervirano striatum formulaciju strijatalnih embrionalne stanice. Autori sugeriraju da je mehanizam ovog učinka je povezan s pozitivnim trofični učinak GABA stanica embrija u striatumu specifične aktivnosti dopaminergičkih intraventrikularno transplantata ventralnog mezencefalona. Izraženo glija reakcija transplantata je bilo popraćeno laganim pokazatelja regresijske apomorfmskim test. Potonji je, pak, u korelaciji sa sadržajem seruma Općeg okvirnog sporazuma, što upućuje izravno na povredu propusnosti krvno-moždane barijere. Na temelju tih podataka, autori su zaključili da okvirni sporazum u serumu može se koristiti kao adekvatna mjera funkcionalnog stanja transplantacije, te povećana propusnost krvno-moždanu barijeru za neurospecific GFAP tipa antigena je patogenu karika u razvoju grafta zbog autoimune oštećenja živčanog tkiva primatelja ,

S točke gledišta drugih istraživača, presađenih stanica i integraciju živčanih matičnih stanica nakon transplantacije stabilna i život, kao što su stanice donora naći u primatelja najmanje dvije godine nakon transplantacije, a bez značajnog smanjenja njihova broja. Pokušaji da se objasni to i činjenica da je u nediferencirani stanje neuralne matične stanice ne eksprimiraju MHC klase I i II na razini dovoljnoj za poticanje imunološkog odbacivanja reakciju, može se smatrati vrijedi samo u odnosu na slabo diferenciranih živčanih matičnih stanica. Međutim, nisu sve neuronske matične stanice u mozgu primatelja ustrajale u nezrelom stanju. Većina ih se podvrgava diferencijaciji, tijekom kojih se MHC molekule izražavaju u cijelosti.

Posebno nedostatak učinkovitosti upotrebi u liječenju eksperimentalne parkinsonizam lijekova intrastriarnoy transplantacije embrija ventralnog mezencefalona, sadrži dopaminergički neuroni, povezuje se s lošom preživljavanja transplantiranih dofaminer- kih neurona (samo 5-20%), koje je uzrokovano reaktivnim glioza prateći lokalnu parenhim trauma mozga na transplantacija. Poznato je da lokalna oštećenja mozga i parenhim Povezano glioze dovesti do poremećaja integriteta krvno-moždane barijere s izlazom na periferne krvi antigen živčanog tkiva, naročito neurona i Okara antigen. Prisutnost u krvi tih antigena može izazvati određene citotoksičnih antitijela na njih i razvijaju autoimune agresiju.

Cymbalyuk V. I suradnici (2001) navode da je još uvijek na snazi i dalje tradicionalno gledište, prema kojem CNS je imunološki privilegiranim područje, izolirani iz imunološkog sustava krvno-moždanu barijeru. U svom pregledu literature, autori upućuju na brojne studije koje upućuju na to da ovo gledište ne odgovara potpunosti bitnih imunoloških procesa u mozgu sisavaca. Nađeno je da se označeni tvar unese u parenhimu mozga može doći do duboke limfnih čvorova, i nakon intracerebralnom injekcijom antigena u tijelu tvore specifična antitijela. Stanice cervikalnih limfnih čvorova odgovaraju proliferaciji na takve antigene, počevši od 5. Dana nakon injekcije. Nastajanje specifičnih protutijela također je otkriveno u transplantaciji kože u parenhim mozga. Autori pregleda daju nekoliko mogućih načina transporta antigena iz mozga u limfni sustav. Jedan od njih je i prijelaz antigena iz perivaskularnih prostora na subarahnoidni prostor. Pretpostavlja se da su perivaskularnim prostorima, lokalizirani uz glavne žile u mozgu, su ekvivalent limfnog sustava u mozgu. Drugi način leži na bijelim vlaknima - kroz krovnu rešetku u limfne žile sluznice nosa. Osim toga, postoji široka mreža limfnih žila u dura mater. Barijera krvnih stanica limfocita također je vrlo relativna. Dokazano je da aktivirani limfociti mogu proizvesti enzime koji utječu na propusnost struktura "imunosnog filtera" mozga. Na razini post-kapilarnih venula aktivirani T-pomoćnici prodiru i kroz intaktnu krvno-moždanu barijeru. Teza o odsutnosti stanica koje predstavljaju antigen u mozgu ne podnose kritike. Trenutno je uvjerljivo dokazana mogućnost zastupanja antigena u središnjem živčanom sustavu od najmanje tri vrste stanica. Prvo, to su dendritičke stanice koštane srži, koje su lokalizirane u mozgu duž velikih krvnih žila i bijelih tvari. Drugo, antigeni mogu prezentirati endotelne stanice krvnih žila u mozgu, te zajedno s MHC antigenom, koji podržava klonalni rast T-stanica specifičnih antigena. Treće, mikro- i astroglija stanice djeluju kao sredstva koja pokazuju antigen. Sudjelovanjem u imunološkom odgovoru u središnjem živčanom sustavu, astrociti stjecanje svojstva immunnoeffektornoy stanica i izraziti brojem antigena, citokina i imunomodulatori. Kada bi bio inkubiran sa y-interferon (INF-y) in vitro astroglija eksprimiraju razreda I MHC antigena i II, te stimulira astrociti su sposobni zastupljenost antigena i čuvanje klonalne proliferacije limfocita.

Trauma moždano tkivo, postoperativnih upala, edem i fibrinskih depozita prate transplantaciju fetalnog živčanog tkiva, stvaranje uvjeta za povećanje propusnosti krvno-moždane barijere s poremećenom tolerancijom, self-senzibilizacije i aktivaciju SDZ + CD4 + limfocita. Auto- i predstavljanje alloantigens provodi astrocita i mikroglija stanice odgovaraju na y-INF ekspresiju MHC molekula, ICAM-1, LFA-I, LFA-3, kostimulatorne molekule B7-1 (CD80) i B7-2 (CD86), kao sekrecija IL-la, IL-ip i y-INF.

Prema tome, činjenica da je više opstanak embrionalnog neuralnog tkiva u intracerebralno transplantacije, a ne na rubnom uprave teško da se može pripisati nedostatku početka imuniteta transplantacije. Posebno zbog monociti, aktivirani limfociti (citotoksični CD3 + CD8 + i T-pomoćničkih stanica), te su citokini koje proizvode, kao i antitijela na antigene perifernog živčanog tkiva transplantata fetalnog igraju važnu ulogu u odbacivanju. Neki značaj u stvaranju uvjeta za trajnije otpora neyrotransplantatov T stanica imunološke procese ima nisku razinu ekspresije MHC molekula u embrionalnog živčano tkivo. Zato je u eksperimentalnoj imuni upala nakon transplantacije embrionalnog živčanog tkiva u mozgu razvija sporije nego nakon cijepljenja kože. Ipak, nakon 6 mjeseci, opažena je potpuna uništavanje pojedinih graftova živčanog tkiva. U području transplantacije lokaliziran pretežno T limfocita ograničeni antigene na MHC klasu II (Nicholas et al., 1988). Utvrđeno je da je za eksperimentalno neurotransplantation ksenologicheskoy iscrpljenje T-pomoćničkih (L3T4 +), ali ne i T-limfociti (Lyt-2), produžava preživljavanje štakora živčanog tkiva u mozgu miševa primaoca. Odbijanje neurotransplantata popraćeno je infiltriranjem makrofaga i T-limfocita domaćina. Stoga, makrofagi i aktivirane mikroglija stanice u situ čin domaćina kao imunostimulirajuće stanica s antigenom, te povećanja donatorskih antigena pomoću MHC klasa I ekspresije povećava citotoksična aktivnost ubojica T-limfocite primatelja.

To nema smisla analizirati brojne pokušaje da objasni spekulativne neyrotransplantata odbijanja reakciju organizam primatelj imunološkog sustava na endotelne stanice ili glija donatorskih elemenata kao čistim linijama i nervnih ishodišne stanice prolaze imunološki napad. Napomenuti da poruka mehanizmi duljeg preživljavanja presatka unutar središnjeg nervnog sistema ima važnu ulogu stanica ekspresije srži vezanje Fas-ligand receptora apoptoza (Fas molekula) na T limfocitima infiltriranih mozak i potiču apoptozu koja je tipična zaštitni mehanizam barijere autoimunogena tkiva.

Kao podesno navedeno Cymbalyuk V. Et al (2001) Transplantation embrionalnog živčanog tkiva je karakteriziran razvoj upale koje uključuje senzibilizirani na mozgu antigena i aktiviranih stanica, antitijela, kao i zbog lokalne proizvodnjom citokina. Važnu ulogu u ovom radu igra prethodna osjetljivost organizma na antigene mozga koji se javljaju tijekom razvoja bolesti CNS i mogu biti usmjereni na transplantacijske antigene. Zato je stvarni dugotrajno preživljavanje histokompatibilni neyrotransplantatov postići samo supresije imunološkog sustava putem primjene ciklosporina A ili monoklonskih antitijela za CD4 + limfocita primatelja.

Dakle, mnogi problemi neurotransplantacije ostaju neriješeni, uključujući one vezane za imunološku kompatibilnost tkiva, koje se mogu riješiti tek nakon temeljitih i kliničkih studija.