Hemopoetske matične stanice krvi pupkovine

Krv pupkovine djeluje kao izvor hematopoetskih matičnih stanica na proliferacijski potencijal i sposobnosti repopulacije hematopoetskih stanica. Opetovano pokazala da je vrijeme rođenja pupčana vrpca krv sadrži dovoljno veliki broj slabo počinio rodonačelnika hematopoeze. Neki autori smatraju da je prednost hematopoetskih matičnih stanica transplantacije krvi pupkovine nema potrebe za pronalaženje donatora kompatibilan za HLA antigenima. Prema njima, nezrelosti novorođenčeta imunološki sustav uzroka smanjenim funkcionalnim djelovanjem imunokompetentnih stanica i, prema tome, manja od pri transplantaciji koštane srži, incidencija teške reakcije presatka protiv domaćina „” U ovom transplantacije stanica preživljavanje krvi pupčane vrpce nije manja od stanica koštane srži, čak i u slučaju korištenja manji broj GSK primjenjuje po 1 kg tjelesne težine pacijenta. Međutim, po našem mišljenju, optimalan broj pitanja presadili kabel krvne stanice potrebne za učinkovito usadenosti u tijelu primatelja, imunološkog kompatibilnost, kao i niza drugih aspekata transplantacije hematopoetskih matičnih stanica krvi pupkovine zahtijeva ozbiljnije analize.

[1], [2], [3], [4], [5], [6]

Dobivanje hematopoetskih matičnih stanica krvi pupkovine

Postupak za dobivanje hematopoetskih matičnih stanica iz krvi pupčane vrpce zahtijeva svoj unos odmah nakon rođenja i njegove odvajanja od posteljice, kada je posteljica u maternici i ex maternici, kao i za carskim rezom, ali i ex maternici. Pokazano je da se u slučaju skraćivanje vremena od rođenja do novorođenče pomoću placentnog razdvajanjem do 30 sekundi volumen krvi dobivenih kabel povećava u prosjeku od 25-40 ml. S kasnijim postupkom, istu količinu krvi je izgubljena. Utvrđeno je da rano razdvajanje djeteta od utrostručenja ne dovodi do negativnih posljedica novorođenčadi.

Ruski institut za hematologiju i transfuziju razvio učinkovit i niske cijene tehnologiju za oba krvi pupkovine u fiziološkim loza ((70,2 + 25,8) ml) i carskog reza ((73,4 + 25,1) ml). Postupak za odvajanje krvi pupčane vrpce s dovoljno visokim prinosom mononuklearnih stanica i nukleizirane - (83,1 + 9,6) i (83.4) 14.1 +%, respektivno. Poboljšani postupak za zamrzavanja krvi pupčane vrpce, koja osigurava visoku sigurnost mononuklearnih stanica i CFU-GM - (96,8 + 5,7) i (89.6 + 22.6)%, respektivno. Učinkovitost metode uzimanja uzoraka krvi za odvodnju moždine pomoću spremnika „Kompoplast-300” (Rusija). Ograda kabel krvi autori obaviti odmah nakon rođenja i njegova odvajanja od posteljice, u smislu stavljanja u posteljicu u maternici ili ex utero. Prije punkcijom umbilikalne vene pupkovine jednom tretiran sa 5% tinkture joda, a zatim dva puta - 70% etilnog alkohola. Krv je protjecala kroz spajanje cijevi spontano do spremnika. Trajanje ograde nije trajalo ni više od 10 minuta. 66 sakupljeni metoda volumen odvodnju uzorci krvi pupčane prosjek (72 + 28) ml, a broj leukocita u uzorku u prosjeku puni - (1.1 + 0.6) x x 107. Analiza krvi pupčane vrpce za sterilnost (bakterijske kontaminacije, HIV-1 virusa hepatitisa B i C, sifilis i infekcije citomegalovirusom), u samo jednom uzorku identificirano IgG-antitijela hepatitisa C u drugoj studiji jednom posteljice nakon rođenja fetalni površina je postavljena na posebnom okvir prema dolje, kabel se tretira s 5% natrij jod i 75% etil th alkohol. Umbilikalne venske iglom ispražnjenog iz transfuzije sustava (G16). Krv je izbačena spontano u spremnik. Volumen krvi uzeta na ovaj način prosječno (55 + 25) ml. Papir G. Kogler et al (1996) pupkovine uzeti zatvoreni način i dobije se velike količine krvi - prosječno (79 + 26) ml. Autori navode da je među 574 moždine uzoraka krvi sadrži oko 7% manje od 40 ml krvi, što ne dopuštaju da ih koriste za transplantaciju. K. Isoyama et al (1996), da kabel krvi aktivnim exfusion pomoću šprice, dobio prosječno 69,1 ml krvi (kabel volumena krvi to u rasponu od 15 do 135 ml). Konačno, A. Abdel-Mageed PI suradnici (1997) po punovinnoy vena kateterizacije dobiveni su prosječno 94 ml krvi pupčane vrpce (od 56 do 143 ml).

Da se smanji rizik od jatrogene infekcije i onečišćenja majčinska sekreta razvijene zatvorenog sustava odvodnje krvi temelji na široko koriste transfuzioinoy sustava Baxter Healthcare Corp., Deerfield, IL (USA), koji sadrži 62,5 ml CPDA (citrat-fosfata dekstroze adenin), kao antikoagulans. Tehnologija proizvodnje materijala je od najveće važnosti za dobivanje kvalitetnog uzorka u odnosu na količinu sadržaja i čistoće suspenzije stanica. Postojećih metoda pupkovine prikupljanja krvi, kotoryeuslovno svrstati u zatvorenim, poluotvorenim i otvorenim željama sustav sleduetotdavat prvo, kako u zatvorenom sustavu značajno smanjuje rizik od mikrobiološke kontaminacije materijala, kao i zagađenje suspenzije stanica matične stanice.

A. Nagler i co-autori (1998) proveli su komparativnu analizu djelotvornosti svih tri uzorka krvi uzorkovanja krvi. U prvoj varijanti, postupak je izveden u zatvorenom sustavu eksfuzijom krvi izravno u spremnik. U drugoj varijanti krvi iz pupkovine dobivene su metodom aktivne eksfuzije krvi štrcaljki1 s daljnjim ispiranjem venama posteljice i simultanom odvodnjom krvi u spremnik (otvorena metoda). U trećoj varijanti, krv je povučena u polu otvorenom sustavu aktivnim ekstrahiranjem štrcaljkama i ispiranjem kroz arteriju pupčane vrpce uz istovremenu eksfuziju u spremnik. U prvoj verziji, autori su dobili volumen (76,4 ± 32,1) ml krvi pupkovine s brojem leukocita (10,5 ± 3,6) x 10 ⁶ po 1 ml krvi. U drugoj varijanti, odgovarajući indeksi bili su (174.4 + 42.8) ml i (8.8 + 3.4) x 10 ⁶ / ml; treći - (173,7 + 41,3) i mL (9.3 + 3.8) x 10 ⁶ / ml. Najčešća infekcija uzoraka krvi pupkovine bila je zabilježena kod korištenja otvorenog sustava. Uspostavljena je izravna korelacija između mase posteljice i volumena izvađene krvi - s povećanjem mase placente, povećava se količina prikupljene krvi.

Nakon sakupljanja krvi iz pupkovine slijedi korak odvajanja - izolacije mononukleara i pročišćavanja iz stanične suspenzije eritrocita. Pod eksperimentalnim uvjetima nukleoidnih stanica izoliranih njihova sedimentacije eritrocita metilceluloza lize s amonijevim kloridom. Međutim, za kliničke svrhe, metilceluloza se ne smije koristiti, jer gubitak hematopoetskih matičnih stanica doseže 50-90%. Ližu crvenih krvnih stanica u vezi sa velikim količinama radne otopine u klinici također teško provodi, iako je postotak odvajanja na ovaj način stanica s jezgrom uz fenotipa CD34 +, i ishodišne stanice CFU-GM funkcija i CFU-GEMM znatno veći. Zabilježeno je novo sredstvo za izolaciju mononuklearnih stanica u otopini gustoće kuplenskog gradijenta gradijenta (BDS72). Ova tvar ima sljedeće fiziološke parametre: pH-7.4, osmolalnost - 280 mosm / kg, gustoća - 1.0720 g / ml. Prema autorima, sa svojom pomoći moguće je izolirati do 100% CD34 pozitivnih stanica i ukloniti 98% crvenih krvnih stanica. Međutim, klinika još ne primjenjuje BDS72.

Metoda odjeljivanja ispitane stanica s jezgrom iz krvi pupčane vrpce tipično se koristi 10% otopina u HES ili 3% otopine želatine. Učinkovitost taloženja eritrocita i izolacijom stanica s jezgrom u oba slučaja je približno jednaka. Međutim, u slučaju da se koristi kao sredstvo za želatinu taloženjem moguće dobiti nešto veći broj CFU-GM, nego kada se koristi Hes. Pretpostavlja se da je razlika u učinkovitosti oporavak CFU-GM nejednake brzine zbog taloženja pojedinih frakcija ili nukleinske stanice sposobnost HES molekula apsorbira na hematopoetskim receptora na površini stanice i time blokira njihovu osjetljivost kolonija stimulativnih faktora, koji se koriste za uzgoj CFU-GM in vitro. Ipak, kako sedimenter dobro može biti pogodna za izolaciju stanica s jezgrom u stvaranju velikih kabel bankama krvi.

Metode odvajanja i zamrzavanja krvi iz pupkovine, u načelu, ne razlikuju od onih koje se primjenjuju u hematopoetskih matičnih stanica periferne krvi i koštane srži od odraslih davaoca. Ali pri pripremi velikog broja uzoraka krvi pupkovine za svoje banke, metode odvajanja moraju biti, prije svega, niske cijene. Dakle, u ovom trenutku, nažalost, potrebe za kliničku uporabu je dokazano rutinske metode izolacije i zamrzavanja kabel krvnih stanica i učinkovitiji, ali su metode ostaju puno finansovoemkie eksperimente.

Ukupni kriteriji ocjenjivanja osnovan sebi hematopoetskih broj stanica zahtjeve i za proučavanje uzoraka krvi iz pupkovine u svrhu otkrivanja zaraznih agensa. U cilju zaštite hematopoeze transplantacija krvi pupkovine stanica, uzorci pune krvi treba ispitati prije svega na infekcije koje se prenose hematogeni i genetske bolesti. Neki autori preporučuju dodatne posebne metode proučavanja krvi pupkovine u svrhu dijagnosticiranja genetske bolesti, kao što su talasemija i srpastih stanica anemije, nedostatka adenozin deaminaze, agammaglobulinemia Bruton, bolesti Harlera i punter.

Prema preporukama Ticheli L. I suradnici (1998), u svakom uzorku krvi pupkovine, potrebno je utvrditi broj stanica s jezgrom, SB34-pozitivnih stanica i CFU-GM, nose HLA-tipizaciju da se odredi krvna grupa ABO i Rh njegovo članstvo. Osim toga, zasadi se, bakteriološka serološka ispitivanja i HIV infekcija, CMV HBsAg, hepatitis C, HTLY-I i HTLV-II (T-stanica leukemije, čovjeka), sifilis, toksoplazmoza. Lančana reakcija polimeraze na citomegalovirus i HIV infekciju je obavezna.

Sam postupak za dobivanje krvi iz pupkovine treba biti proveden u strogom skladu s načelima medicinske bioetike. Prije početka prikupljanja krvi nužno je dobiti suglasnost trudnice za njegovu provedbu. Prethodno razgovor s trudnica bi dobili informirani pristanak za obavljanje svih manipulacija, jer exfusion krvi punjenje i završni dokumenti se obavljati samo zdravstvenim djelatnicima. U svakom slučaju nedopuštena obavlja bilo koji od ovih postupaka od strane osoblja s biološkim, kemijskim, farmaceutske i druge ne-medicinsko obrazovanje, u pogledu povrede utvrđenih normama bioetike i ljudskih prava. Pozitivne testove za HBsAg nosača, antitijela uzročnika hepatitisa C, u krvi, a kabel HIV sifilis ne uzima, a uzeti uzorci krvi su već se odbaci i uništeni. Treba napomenuti da je prijevoz latentnih infekcija u novorođenčadi je mnogo rjeđe nego u odraslih, pa je vjerojatnost hematogeni prijenosa i razvoja zaraznih komplikacija krvotvornih infuzijama kabel krvnih stanica je znatno niža nego u slučaju transplantacije koštane srži od odraslih davaoca.

Važna točka primjene krvi iz pupkovine u klinici je procjena mladica, koji se temelji na izračunu krvotvornih matičnih stanica u uzorku krvi iz pupkovine stanica i doza potrebnih za transplantaciju. Norme za optimalni broj krvnih stanica pupčane pupčnje potrebne za transplantaciju još nisu razvijene. Ne postoji općeprihvaćena točka gledišta čak ni na takvim rutinskim parametrima kao i broj CD34 pozitivnih stanica i CFU-GM. Neki autori ocjenjuju potencijal hematopoetskih stanica za analizu dugoročnih kultura s određivanje sadržaja jedinica koloniziranja zajedničkim da granulocita, eritrocita, monocita i megakariocita - CFU-GEMM.

Međutim, u kliničkim postavkama, standardna procjena transplantacije krvnih žila obično uključuje samo određivanje broja nukleiranih ili mononuklearnih stanica.

Skladištenje hematopoetskih matičnih stanica krvi pupkovine

Neki problemi postoje u tehnologiji skladištenja krvnih stanica hematopoeze. Kada zamrzavanje hematopoetskih matičnih stanica kako bi se postigla njihova najboljeg načina zamrzavanja mora smanjiti količinu krvi pupčane vrpce i crvenih krvnih stanica je prethodno uklonjena kako bi se izbjeglo hemolizu i rizik inkopatibilnosti reakcije eritrocitne antigene (ABO, Rh). U tu svrhu prikladni su različiti načini izoliranja nukleiranih stanica. U ranim 90-ih godina prošlog stoljeća najraširenija metoda razdvajanja stanica s jezgrom u gradijentu gustoće Ficoll temelju gustoće 1.077 g / ml, ili prskanje i gustoće 1,080 g / ml. Odvajanje kabel krvi gradijentu gustoće omogućuje odabir pretežno monocite, ali dovodi do značajnih gubitaka hematopoetskih progenitor stanica - do 30-50%.

Učinkovitost taloženja hidroksietil škroba u procesu izolacije krvnih stanica pupčane vrpce procijenjena je na različite načine. Neki autori ukazuju na lošu kvalitetu odvajanja pomoću ove metode, drugih istraživača, naprotiv, među svim mogućim načinima favoriziraju razdvajanje krvi iz pupkovine HSC se koriste 6% otopina hidroksietil škrob. Ovo naglašava visoku učinkovitost taloženja hemopoetskih stanica, koja, prema nekim podacima, doseže od 84% do 90%.

Pristaše druge točke gledišta mislim da su gotovo svi procesi frakcioniranja uključivati velike gubitke yadrosoderzhashih stanice i ponuditi da bi razdvajanje centrifugiranjem, odvajanjem krv iz pupkovine u 3 frakcije: eritrocita, leukocita i plazma prstenu. Odvajanje stanice na ovaj način, izumitelji su otkrili da je sadržaj mononuklearnih stanica ranih hematopoetskih ishodišnih stanica i stanica s CD34 + imunofenotipa konačnici je redom 90, 88 i 100% izvorne razine. Slične količine pročišćenog rasta u ovoj metodi iz umbilikalne krvnim stanicama uzetih od drugih istraživača: nakon sedimentacije jezgrom dodijeljeno je 92%, 98% - 96% mononuklearnih, - CD34-pozitivnih stanica i 106% od jedinica koloniziranja.

U kasnim 90-ih kao sredstvo za sedimenta naširoko koristi želatinu. U kliničkoj praksi, koristeći želatina hematopoetskih matičnih stanica izoliranih iz krvi pupčane vrpce od 1994. Kada otopinom od 3% stanica s jezgrom želatina učinkovitosti ponovno dostigne 88-94%. Rasprostranjena upotreba želatine u stvaranju kabel krv banka je potvrdila svoje prednosti nad drugim sredstvima sedimenta. Komparativna analiza svih gore navedenih metoda izolacije stanica s jezgrom u pogledu njihove uzastopnu upotrebu u svakom od uzoraka testa pupčane krvi je pokazala da su optimalni sedimenter-out mononuklearne stanice s fenotipom CD34 + / CD45 +, i po broju CFU-GM i CFU-GEMM je 3% želatinske otopine. Pokazalo se da je znatno manje učinkovite metode pomoću gradijenta gustoće Ficoll i korištenje metil celuloze i škroba u kojem hidroksietil hematopoetskih stanica gubitak dosegla 60%.

Proširenje volumena transplantacije matičnih stanica krvi pupkovine povezano je ne samo s razvojem metoda za njihovu proizvodnju već i skladištenja. Postoje mnogi problemi koji se izravno odnose na pripremu krvi pupkovine za dugotrajnu pohranu i izbor optimalne krioprezervacijske tehnologije za svoje uzorke. Među njima su pitanja učinkovitosti izvedbe postupaka razdvajanja, upotrebe raznih krioprezervirajućih medija i upotrebe metoda za pripremu odmrznutih stanica za transplantaciju. Prijevoz izvornih uzoraka krvi iz pupkovine često se izvodi iz regija daleko od hematoloških centara. S tim u svezi nastaje problem dopuštenih razdoblja za skladištenje krvi pupkovine od trenutka primitka do početka krioprezervacije, što je od posebnog značaja za razvoj krvnih žila krvi.

Proučavanje funkcionalnu aktivnost hematopoetskih kabel krvnih stanica nakon dugotrajnog skladištenja (do 12 godina) u tekućem dušiku je pokazala da oko 95% hematopoetskih stanica u to vrijeme ne gube kapacitet visok proliferativni. Papir Yurasova S. I sur (1997) je pokazao da je kabel krvi pohranjen na sobnoj temperaturi (22 ° C), ili na 4 ° C tijekom 24 sati i 48 nije značajno smanjiti vitalnost hematopoetskih stanica kako je početna razina je pogodno 92 i 88%. Međutim, ako je vrijeme skladištenja produženo do tri dana, broj živih nukleiranih stanica u krvi pupkovine značajno se smanjuje. U isto vrijeme, druge studije su otkrili da tijekom skladištenja za 2-3 dana na temperaturi od 22 ° C ili 4 primarno utjecati na održivost zrelih granulocita, ali ne hematopoetskih stanica.

Sposobnost hematopoetskih matičnih stanica pupkovine može biti nepovoljno pogođena komponentama sustava za njegovu sakupljanje. Analiza učinka različitih antikoagulansi, što mehanizam djelovanja je zbog vezanja kalcijevih iona (ACD, EDTA, XAPD-1) za hematopoetskih progenitor stanica u krvi pupčane uvjetima skladištenja od 24 do 72 sata otkriva svoj negativan utjecaj na vijabilnost stanica s jezgrom. S tim u vezi, autori preporučuju korištenje PBS (fosfatni pufer otopina) uz dodatak nativnog heparina bez konzervansa u koncentraciji od 20 U / ml, koji se, po njihovom mišljenju, omogućava da se poveća trajanje skladištenja nefrakcionirani kabel krvi do 72 sata, te sprema funkcionalnu aktivnost jedinica koloniziranja. Međutim, u studiji očuvanja CFU-GM i CFU-G pokazala da krvi pupkovine vrijeme skladištenja prije zamrzavanja ne bi trebalo biti dulje od devet sati. Očito, u ovom slučaju treba djelovati princip da ako postoji proturječne podatke treba koristiti najmanju preporuča život pohrane krvi iz pupkovine i početi se može programirati zamrzavanje izolirane stanice što je brže moguće.

Kada se smrzavaju hematopoetske matične stanice pupkovine krvi, 10% -tna otopina DMSO obično se koristi kao krioprotektant. Međutim, osim izražene krioprotektorskim akcijski dimetilsulfoksidu pri koncentraciji a ima izravan citotoksični učinak, čak i s minimalnom izloženosti hematopoetskih stanica krvi pupčane vrpce. Smanjiti citotoksični učinak DMSO koristi nula temperature izlaganja podizanje brzina sve rukovanje i višestruko pranje nakon otapanja uzoraka krvi kabel.

Institut za hematologiju i transfuziju Akademije medicinskih znanosti u Ukrajini razvija znanstveni smjer od 1995. Godine, čiji je cilj proučavanje krvi kabela kao alternativnog izvora hemopoetskih stanica stabljike. Posebno su razvijene nove tehnologije za kriopreservaciju hemopoetskih stanica niske temperature u nefrakcioniranoj i frakcioniranoj krvi iz pupkovine. Kao krioprotektant, koristi se polimerni polivinilpirolidon male molekularne težine. Metoda krioprezervacije nefrakcionirane krvi pupkovine temelji se na izvornoj tehnologiji pred-pripravljanja stanica za zamrzavanje i na tehniku specijalnog liječenja stanične suspenzije neposredno prije transplantacije.

Jedan od glavnih faktora koji utječu na razine funkcionalnu aktivnost kriokonserviruemyh hematopoetskih matičnih stanica, je brzina hlađenja suspenzije stanica, posebice u razdoblju kristalizacije faze. Softverski pristup rješavanju problema brzine i vremena zamrzavanja pruža velike mogućnosti stvaranja jednostavnih i visoko učinkovitih metoda krioprezervacije, bez pranja suspenzije stanica iz krioprotektanta prije transplantacije.

Faze neposrednog zamrzavanja i odmrzavanja najopasnije su za održivost stanica tijekom njihove pripreme. Pri zamrzavanju hemopoetskih stanica, značajan dio njih može se uništiti u trenutku prijelaza međustaničnog medija iz tekućine u krutu fazu - kristalizaciju. Kako bi se smanjio postotak stanične smrti koriste se krioprotektanti, mehanizmi djelovanja i krioprotektivna učinkovitost adekvatno obuhvaćeni u znanstvenoj literaturi.

Obećavajući smjer optimizaciju tehnike zamrzavanja koštane srži i krvi pupčane vrpce stanica kombinirati u istoj otopini za niskim koncentracijama krioprotektanata s nekoliko različitih mehanizama djelovanja, na primjer, djeluju na intracelularne razine DMSO i hidroksietil škrob ili albumin posjeduju izvanstaničnu zatvara i učinak.

Za zamrzavanje moždine krvnih stanica se tradicionalno koristi 20% otopina DMSO koja je stalno mehanički miješanje u ledenoj kupelji, polako se izlije u staničnu suspenziju postići jednak (1: 1), a omjer volumena stanične suspenzije i krioprotektant. Konačna koncentracija dimetil sulfoksida je 10%. Stanična suspenzija je ohlađena na program na brzinu krioustanovke HS / min na -40 ° C, nakon čega je brzina hlađenja je povećana na 10 ° C / min. Nakon postizanja -100 ° C, spremnik s suspenzijom stanica se stavi u tekući dušik (-196 ° C). Ovom metodom krioprezervacije, sigurnost funkcionalno aktivnih mononuklearnih stanica nakon odmrzavanja doseže 85% početne razine.

Modifikacije zamrzavanja tehnike usmjerene na smanjivanje koncentracije DMSO dodavanjem hidroksietil škrob (konačna koncentracija DMSO-a, hidroksietil škrob su, redom, 5 i 6%). Visoka učinkovitost ovog spajanja se promatra tijekom smrzavanja krioprotektantu kaše mijeloidne stanice, naznačen time, da ne manje citoprotekciju nego kad se koristi samo jedan od 10% otopine dimetilsulfoksida. Broj živih stanica s jezgrom dosegla 96,7% početne razine, a njihova funkcionalna aktivnost, procjenjuje iz broja CFU-GM, bio je 81,8%.

Kada se koristi dimetil sulfoksid otopine pri koncentracijama u rasponu od 5 do 10%, u kombinaciji sa 4% hidroksietil škrob (konačna koncentracija), nađeno da je očuvanje CD34-pozitivnih stanica u ovim rasponima dimetilsulfoksidu praktično nepromijenjene. U isto vrijeme u uvjetima smanjivanja koncentracije DMSO od 5 do 2.5% se promatra masovno smrt stanica pupčane krvi - broj staničnih jedinica izvediv je smanjena od grani 85.4 do 12,2%. Drugi autori su zaključili da je 5 i 10% otopina dimetil-sulfoksida (u izvedbi autorskih - u kombinaciji s autolognim serumom), uz maksimalnu učinkovitost dati citoprotekciju tijekom zamrzavanja kabel krvi HSC. Osim toga, visoka sigurnost uzastopno zamrznu i otope stanica je označena u slučaju kombinacije 5 ili 10% DMSO 4% otopina hidroksietil škrob, posebno kontroliranom brzinom hlađenja od TOS / min. U drugom radu koristi krioprotektorskim otopina koja se sastoji od tri sastojka već - DMSO, pročišćenog humanog albumina i RPMI mediju u omjeru 1: 4: 5, koji se doda u staničnu suspenziju do jednakim volumnim omjerima (konačna koncentracija DMSO bila je 5%). Nakon odmrzavanja u vodenoj kupelji pri temperaturi od + 4 ° C, sigurnost CFU-GM premašila je 94%.

Neki autori sugeriraju uporabu nefrakcionirane krvi kabela za krioprezervaciju, jer se tijekom uklanjanja crvenih krvnih zrnaca gube velike količine hematopoetskih stanica. U ovoj izvedbi, 10% -tna otopina dimetilsulfoksida koristi se za zaštitu mononuklearnih stanica od štetnog djelovanja kriokristalizacije. Zamrzavanje se provodi pri stalnoj brzini hlađenja od HS / min do -80 ° C, nakon čega se suspenzija krvnih stanica pupčane vrčeve uroni u tekući dušik. Ovom metodom zamrzavanja djeluje djelomična liza eritrocita, stoga uzorci krvi ne zahtijevaju frakcioniranje. Nakon odmrzavanja, stanična suspenzija se ispire iz slobodnog hemoglobina i dimetilsulfoksida u otopini humanog albumina ili u autolognom serumu pacijenta i koristi se za transplantaciju.

Očuvanje hematopoetskih ishodišnih stanica nakon odmrzavanja nefrakcioniranim kabel krvi je doista više nego frakcijska, ali u vezi s krioustoychivostyu crvenih krvnih stanica može uzrokovati ozbiljne probleme kao rezultat post-transfuzijski transfuziju crvenih krvnih stanica ABO-nespojivo. Osim toga, volumen pohranjene nefrakcionirane krvi znatno se povećava. Iz kliničkog stanovišta, još poželjnije zamrzavanje prethodno izoliran i pročišćen od drugih staničnih frakcija krvi hematopoetskih stanica kabel.

Posebno, metoda je zamrzavanje kabel krvnih stanica frakcionirana igrač uklanjanja eritrocita u pripremi za zamrzavanje, koji se koristi 6% otopinu od hidroksietil škroba u pripravku otopine plazmozameshchath „Stabizol”. Nakon odmrzavanja, tako dobivena stanična suspenzija je spremna za kliničku upotrebu bez dodatne manipulacije.

Tako, u ovom trenutku, postoje mnogi vrlo djelotvorni načini krioprezervacije krvi pupkovine. Osnovna razlika je u tome što su uzorci krvi nefrakcionirani smrznuta ili podvrgne odvajanju na staničnoj frakciji u fazi pripreme i stanica s jezgrom dobivenih bez dodatka eritrocita.

Transplantacija hemopoetskih matičnih stanica krvi pupkovine

Krajem 80-ih - ranih 90-ih godina prošlog stoljeća ustanovljeno je da pupčana vrpca krvi koja opskrbljuje fetus tijekom trudnoće karakterizira visok sadržaj hematopoetskih matičnih stanica. Relativna jednostavnost pribavljanja krvnih stanica pupčane vrpce i odsutnost očitih etičkih problema potaknuli su uporabu krvnih matičnih stanica srca u praktičnoj medicini. Prva uspješna transplantacija pupkovine djeteta s Fanconi anemijom poslužila je kao polazna točka za širenje volumena transplantacije matičnih stanica krvi iz pupkovine i stvaranje sustava za pružanje banke. U globalnom sustavu banaka krvi iz pupkovine najveći je New York centar za placentarnu krv, koji se nalazi na bilanci Nacionalnih instituta za zdravstvo. Broj pohranjenih uzoraka krvi kabela u ovoj banci približava se 20 LLC. Broj primatelja (uglavnom djece) također raste, a uspješna transplantacija je provedena. Prema američkom Ministarstvu zdravstva, razdoblje nakon transplantacije primatelja krvi HSC kabela već je prekoračilo 10 godina.

To i ne čudi, jer su brojne studije o krvotvornog potencijala krvi pupkovine pokazala su da količina i kvaliteta najranijih matičnih stanica ne samo da nimalo ne zaostaje za jedan ljudski koštane srži odraslih, ali i neke mjere premašiti. Viši proliferacije potencijal matične stanice pupkovine krvi uzrokovane razvojnih staničnih signalnih mogućnosti, prisutnost receptora na HSC u određenim faktorima rasta, kapacitet kabel krvnih stanica za proizvodnju autokrini faktori rasta, velike veličine i duljine telomera.

Tako, genomske i fenotipskih značajke hematopoetskih matičnih stanica u krvi kabel unaprijed kvalitete presađivanja visokog potencijala oporavak donora hematopoetskih u primatelja.

Prednosti hematopoetskih matičnih stanica krvi pupkovine

Među stvarnim prednostima korištenja hematopoetskih moždine matičnih stanica krvi za transplantaciju u odnosu na druge izvore hematopoetskih stanica, valja spomenuti gotovo nula rizik za zdravlje darivatelja (ako se ne smatra takvom posteljice), dok eliminira potrebu za općom anestezijom. Korištenje krvi pupkovine proširuje mogućnosti transplantacije stanica zbog djelomično kompatibilne transplantacije u HLA sustavu (nekompatibilnost jednog do tri antigena). Tehnika dugoročno skladištenje hematopoetskih kabel krvnih stanica u smrznutom stanju, što povećava vjerojatnost dobivanja rijetku HLA-tipa i smanjuje vrijeme traži HLA-podudarne alogeničnu transplantaciju. Istodobno se značajno smanjuje rizik od razvoja nekih latentnih infekcija koje se prenose putem prijenosa. Osim toga, postoji jeftin oblik biološkog životnog osiguranja u vezi s mogućnošću korištenja moždanih krvnih stanica za autolognu transplantaciju.

Međutim, zbog malog volumena krvi koji se mogu prikupiti iz posteljice (u prosjeku više od 100 ml) do izražaja problem dobivanja maksimalnu moguću količinu krvi iz pupkovine vene strogo u skladu s uvjetima minimalnog rizika od bakterijske kontaminacije pupčana izvedenim uzoraka krvi iz pupkovine.

Primitivne stanice iz hematopoetske krvi pupčane vrpce općenito identificirati prisutnošću na njihovu površinu glikofosfoproteina CD34, i na osnovi njihovih funkcionalnih svojstava Promatramo klonogenskog testa ili kolonija formaciju in vitro. Komparativna analiza je pokazala da se u kabel krvi i koštane srži maksimalnim sadržajem CD34-pozitivnih stanica s jednom jezgrom u frakciji su redom 1,6 i 5,0%, maksimalna razina jedinica koloniziranja u subpopulacija stanica CD34 + - 80 i 25%, ukupnu učinkovitost kloniranja CD34 + -stanica - 88 i 58%, najviše koloniziranja stanica s visoko potencijalni proliferacije (HE-CFC u -populyatsii CD34 +) - 50 i 6,5%. Treba dodati da je učinkovitost kloniranja CD34 + CD38-stanica i sposobnost da odgovori na stimuliranje citokina također veći u hematopoetskih matičnih stanica krvi iz pupkovine.

Kombinacija antigena fenotipske Thy-1, CD34 i CD45RA potvrđuje visoku proliferativnog kapaciteta stanica hematopoetskih pupkovine i ekspresiju tri antigena na površini stanica krvnih moždine pokazuje da pripadaju matičnih stanica. Osim toga, utvrđeno je da krvlju kabela sadrži stanice s CD34 + fenotipom koji nemaju linearni marker diferencijacije. Razina u krvi pupkovine stanica subpopulacije s fenotipskim profilom CD34 + / Lin je oko 1% od ukupnog broja CD34-pozitivnih stanica. Stanice predikatora krvi iz hematopoetskog kanala dovode do limfoidne stanične linije i polupotentne mijeloidne serije linearne diferencijacije stanica, što također ukazuje na njihovu pripadnost matičnim stanicama.

Kao što je već spomenuto, bitne razlike u koštanoj srži i krvi pupčane vrpce u količini dobivenog jednim uzorkovanja koristi za transplantaciju hematopoetskih stanica. Kada koštane srži gubitak transplantata stanične mase u postupku razdvajanja, zamrzavanja, odmrzavanja i ispitivanje su dozvoljene u rasponu od 40-50%, što je kabel krvnih stanica, kao što je gubitak vrlo značajno, jer kada se koristi nedovoljan broj HSC transplantacije može neodrživom. Prema G. Kogler et al (1998), za transplantaciju stanica u primatelja tjelesne težine od 10 kg potencijal za transplantaciju (ukupni broj od prikupljenih uzoraka krvi pupčane - 2098) može biti sve uzorke kabel krvi, tjelesna težina 35 kg - 67%, a tek 25% uzoraka moći će osigurati učinkovitu transplantaciju u bolesnika s tjelesnom težinom od 50-70 kg. Ova klinička situacija ukazuje na potrebu optimizacije i poboljšanja učinkovitosti postojećih metoda uzorkovanja, reprodukcije i skladištenja krvnih stanica pupčane vrpce. Stoga su pitanja o standardizaciji metoda uzorkovanja, ispitivanje, odvajanje i zamrzavanja krvi iz pupkovine je sada široko raspravlja u literaturi za stvaranje krvnih banaka, njegovu uporabu u klinici, kao i utvrđivanje uvjeta i uvjete skladištenja krvotvornih matičnih stanica krvi iz pupkovine.

[7], [8], [9],

Upotreba hematopoetskih matičnih stanica krvi pupkovine u medicini

Obično se do 10 ⁶ hematopoetskih matičnih stanica može izdvojiti iz krvi pupkovine , rijetko više. Dakle, do danas ostaje otvoreno pitanje o adekvatnosti iznosa krvi iz pupkovine hematopoetskih matičnih stanica za vraćanje hematopoezu odrasle primatelja. Mišljenja o ovom pitanju bila su podijeljena. Neki istraživači vjeruju da je taj iznos dovoljan za djecu transplantacije, ali premali presaditi odrastao čovjek, za koje je uprava je optimalno (7-10) × 10 ⁶ CD34-pozitivnih stanica po 1 kg tjelesne težine - prosječno 7 × 10 ⁸ po presadku. Iz tih izračuna proizlazi da jedan uzorak pupčane vrpce sadrži 700 puta manje hematopoetskih matičnih stanica nego što je potrebno za jednu transplantaciju u odraslog pacijenta. Međutim, kao što je kvantitativna procjena je izrađen po analogiji s brojem stanica koštane srži transfuzije i potpuno ignorira razvojne karakteristike hematopoeze.

Posebno ignorira činjenicu viši proliferativnog kapaciteta hematopoetskih matičnih stanica iz krvi pupčane vrpce u usporedbi hematopoetskih progenitor stanica iz koštane srži. Rezultati in vitro koloniziranja potencijala navode na zaključak da je jedna doza može dati krvi pupčane vrpce hematopoetskih rekonstituciju odraslih primatelja. S druge strane, ne treba zaboraviti da je broj HSC smanjuje čak u procesu razvoja zametka: sadržaj CD34-pozitivnih stanica u krvi pupkovine se linearno smanjuje 5 puta u razdoblju od 20 tjedana (krvi za proučavanje dobiven u slučaju prijevremenog prestanka trudnoće) do 40 tjedana trudnoće (period fiziološke rada), uz stalno povećanje paralellno ravni cytodifferentiation ekspresije markera.

Zbog nedostatka standardiziranog pristupa izračunu u uzorcima iz pupčane krvi od ishodišne stanice polemike u optimalnoj dozi od hematopoetskih matičnih stanica iz umbilikalne krvi se nastavlja. Neki istraživači vjeruju da je kao kriterij odabira uzoraka pupčane krvi može se koristiti broj stanica s jezgrom i mononuklearnih stanica, preračunati na primatelja tjelesne težine, odnosno njihovu dozu. Neki autori vjeruju da je minimalni kvantitativni prag CD34 + stanica, čak i za provođenje autologne transplantacije HSC, 2 x 10 ⁶ / kg. Povećanje doze hematopoetskih stanica 5 × 10 ⁶ stanica / kg (ukupno 2.5) već daje pogodan za ranom razdoblju nakon transplantacije, smanjuje pojavu infektivnih komplikacija i skraćuje vrijeme preventivne antibiotika.

Prema E. Gluckman et al (1998) u hematologiji za uspješno presađivanje stanica krvi pupčane vrpce je uvođenje najmanje 3,7 x 10 ⁷ jezgrom stanica po 1 kg tjelesne težine primaoca. Smanjenjem doza hematopoetskih matičnih stanica do 1 × 10 ⁷ ili manje jezgrom stanica po 1 kg tjelesne težine pacijenta i rizik od kvara graft povratni raka krvi povećava dramatično. Treba priznati da još nije poznat minimalni broj proročnih stanica potrebnih za brzo oporavak hemopoeze nakon GSG allotransplantacije. Teoretski to se može postići korištenjem jedne stanice, ali klinički koštane srži transplantacije brzu i stabilnu presađivanja zajamčena transfuzije najmanje (1-3) × 10 ⁸ stanica s jezgrom po 1 kg tjelesne težine pacijenta.

Nedavna Detaljna studija za određivanje optimalnog broja GSK u onkologiju i hematologiju uključuje praćenje bolesnika tri skupine odabrane ovisno o sadržaju CD34-pozitivnih stanica u transplantirane materijala. Pacijenti prve skupine primili su (3-5) x 10 ⁶ stanica / kg. GSK doza u bolesnika iz druge skupine iznosila (5-10) 10 x ⁶ stanica / kg i treće skupine bolesnika transplantiranih više od 10 x 10 ⁶ CD34 + stanica / kg. Najbolji rezultati zabilježeni su u skupini primatelja koji primaju transplantaciju s brojem CD34-pozitivnih stanica jednako (3-5) x 10 ⁶ / kg. S porastom doze transplantiranih stanica iznad 5 × 10 ⁶ / kg, nisu utvrđene statistički značajne pogodnosti. Tako vrlo velike sadržaj HSC u transplantaciji (> 10 x 10 x ⁶ / kg) je bio povezan sa značajnim količinu zaostalog reinfuzije tumorskih stanica, što dovodi do ponovne pojave bolesti. Nije bilo izravne veze između broja transplantiranih alogenih progenitorskih stanica i razvoja reakcije "graft versus host".

Akumulirani svjetski doživljaj transplantacije krvi HSC kabela potvrđuje njihovu visoku potencijalnu repopulaciju. Brzina presađivanja transplantacije krvi iz pupkovine korelira s brojem uvedenih nukleiranih stanica. Najbolji rezultati opaženi su transplantacijom od 3 × 10 ⁷ / kg, dok je za koštanu srž ta doza 2 × 10 ⁸ / kg. Prema podacima koordinacijskih centara, krajem 2000. Godine na svijetu je napravljeno 1200 transplantacija krvnih stanica pupkovine, uglavnom od roditelja donatora (83%). Očito je da se moždina krvi treba smatrati kao alternativa koštanoj srži za transplantaciju pacijenata s hemoblastozom.

Međutim, neonatalna priroda Cordova izvor krvotvornog tkiva poticanje zbog prisutnosti funkcionalne značajke svog GCW. Međutim, samo kliničko iskustvo može dati odgovor na pitanje o primjerenosti uzorka krvi pupkovine za odrasle krvotvornog rekonstitucije primatelja s aplazije hematopoeze. Transplantacija korda krvnih stanica se koristi u liječenju mnogih bolesti tumora, a ne tumorske prirode: leukemija i mijelodisplastičnog sindroma, non-Hodgkinov limfom, i neuroblastoma, aplastična anemija, prirođene Fanconijevu anemiju i Diamond Crna ventilator, nedostatak adhezije leukocita, Barr sindrom, Gunther bolesti Harlera sindrom, talasemiju ,

Zatvorena pažnja i zasebna istraživanja zaslužuju imunološke aspekte transplantacije krvotvornih stanica krvi pupčnjaka. Pokazano je da se u slučaju transplantacije matičnih stanica iz krvi pupčane donora s nepotpunim HLA-odgovara rezultatima transplantata su sasvim zadovoljavajući, da je, prema autorima, što ukazuje na manju krvi imunoreaktivnost kabela od koštane srži.

Detaljna studija staničnog sastava krvi pupčane vrpce pokazao značajke i fenotipski spektra izvršnih stanica imunološkog sustava i njihova funkcionalna aktivnost, čime se razmotriti kabel krvi kao izvora HSC sa relativno nizak rizik reakcije „graft versus host”. Dodatne značajke Funkcionalna nezrelosti imunokompetentni kabel krvne stanice treba napomenuti neravnotežu proizvodnje citokina i smanjenje osjetljivosti na citokine nova regulacija imunološkog odgovora. Koji nastaje kao rezultat inhibiciju aktivnosti citotoksičnih limfocita smatra faktor za formiranje imunološke tolerancije prema transplantiranog hematopoetskih tkiva. U populaciji krvi iz pupkovine limfocita, za razliku od periferne krvi i koštane srži od odraslih davaoca, dominira neaktivne, nezrelih stanica i supresorskih stanica. To upućuje na smanjenu dostupnost T-limfocita krvi iz pupkovine na imuni odgovor. Važna značajka populacije monocita krvi pupkovine je nizak sadržaj funkcionalno kompletnih i aktivnih antigenskih stanica.

S jedne strane, nizak stupanj zrelosti izvršnih stanica imunološkog sustava u moždine čitanja krvi proteže se na njegovu primjenu u klinici, jer ove značajke omogućuju smanjenje intenziteta imunološkog sukoba između davatelja i primatelja stanica. No, s druge strane, znamo za postojanje korelacije između stupnja reakcije „bolesti presatka protiv domaćina” i presaditi antitumorsko djelovanje, tj učinkom razvoja „graft-versus-leukemije”. U vezi s tim, provedena je studija antitumoralne citotoksičnosti krvnih stanica pupčane vrpce. Rezultati pokazuju da, unatoč jako oslabljeni imunološki odgovor kabel krvnih stanica u antigenske stimulacije, aktivnih na prvom mjestu su prirodne stanice ubojice i killeropodobnymi stanice koje su aktivno uključeni u mehanizmima provedbe citotoksičnosti protiv tumora. Osim toga, u kabel krvi limfocita subpopulacija pronađen s fenotipom CD16 + CD56 + i CD16 „TCRa / p +. Pretpostavlja se da su te stanice u aktivnom obliku provedbe reakcije” graft-versus-leukemije”.

U Institutu za onkologiju, Akademija medicinskih znanosti Ukrajine Krioprezervirani hematopoetskih stanica iz krvi pupkovine davati bolesnicima s karcinomom s trajnim hipoplazije hematopoeze zbog kemoterapije i radioterapije. U tih bolesnika, transplantacija krvotvornih matičnih stanica krvi iz pupkovine uspješno obnovljena ugnjetavanje krvi, kao što pokazuje uporni visini od zrelih nastalih elemenata u perifernoj krvi, kao i povećanje pokazatelja karakterizira stanje stanične i humoralne imunosti. Stabilnost repopulyatsionnogo učinkom nakon transplantacije hematopoetskih stanica omogućuje kabel krvi za kontinuirano zračenje i kemoterapija, bez prekida liječenja. Postoje dokazi pacijenata oboljelih od raka matičnih stanica pupkovine veću učinkovitost allograft: godišnji rizik od recidiva tumora u njihovu primjenu je 25% u odnosu na 40% u pacijenata s genom presađenog alogene koštane srži.

Mehanizam djelovanja sačuvanih matičnih stanica krvi iz pupkovine treba uzeti u obzir kao rezultat humoralni stimulacije hematopoeze primatelja uzrokovanih jedinstvenu sposobnost novorođenih stanica autokrinc proizvodnju hematopoetskih faktora rasta, kao posljedica privremenog usadenosti donatorskih stanica (kao potvrdu - značajan porast u sadržaju periferne krvi fetalnog hemoglobina primatelja 7-15 og dana nakon transfuzije u odnosu na početne vrijednosti). Nedostatak u krvi primatelja kabel post-transfuzijske reakcije - rezultat relativne tolerancije imunosnih stanica, kao kriterij pouzdanosti korisnost kriokonzervirane biološkog materijala.

Ishodišne stanice T limfocita ubojica pupkovine sposoban za aktivaciju pod utjecajem stimulacije egzogenog citokina koja se koristi za razvoj novih ex vivo i in vivo metodama za izazivanje antitumorskih citotoksični limfoidnih stanica za naknadno presađivanja imunoterapiju. Osim toga, „nezrelost” genoma imunoloških stanica iz umbilikalne krvi omogućuje njihovo korištenje za povećanje antitumorsko djelovanje molekularnog modeliranja.

Danas, krv iz pupkovine je široko primijenjena prvenstveno u pedijatrijskoj hematologiji. U djece s akutnom leukemijom alotransplanaciji hematopoetskih matičnih stanica krvi pupčane vrpce u odnosu na alografta koštane srži značajno smanjuje učestalost reakcija „graft versus host”. Međutim, postoji dulji period neutropenije i trombocitopenije, a, nažalost, i višu razinu 100-dana mortaliteta nakon transplantacije. Duže razdoblje oporavka granulocita periferne krvi i pločica može biti zbog nedovoljne diferencijacije pojedinih subpopulacija CD34 pozitivnih stanica krvi pupčane vrpce, kao što pokazuje nisku razinu apsorpcije radioaktivnog rodamin i niske ekspresije CD38 antigena na njihovoj površini.

U isto vrijeme, transplantacija krvotvornih matičnih stanica umbilikalne krvi odraslih bolesnika koji se obavljaju zbog nedostatka obje kompatibilnog nevezano donatora koštane srži, kao i mogućnosti za mobilizaciju autologne HSC pokazali visoku godišnju opstanak relaps-free u bolesnika u dobi do 30 godina (73%) , Proširenje dobnog raspona primatelja (18-46 godina) rezultiralo je smanjenjem stope preživljavanja na 53%.

Kvantitativna analiza stanica s fenotip CD34 + koštane srži i krvi pupčane pokazuju višu (3.5 puta) njihov sadržaj u koštanoj srži, a krvi pupkovine su pokazali značajno prevlast stanica s fenotipski profilom CD34 + HLA-DR .Izvestno, chtokletkikrovisimmunologicheskimi markera CD34 + HLA-DR proliferaciju aktivniji od stanice s CD34 + imunofenotip HLA-DR +, kao što je potvrđeno u eksperimentalnim studijama rasta dugoročne kulture hematopoetskih stanica in vitro. Primitivne stanice progenitore s fenotip CD34 + CD38 koji se nalazi u krvi pupkovine i koštane srži, ali krvi pupčane vrpce stanica sa markerom postavljen CD34 + CD38 imaju veću aktivnost od klonogenskog hematopoetskih stanica iste fenotip, izolirani iz donora koštane srži odraslih. Osim toga, krvi pupčane vrpce stanice s CD34 + CD38 imunofenotipa se razmnožavaju kao odgovor na stimulaciju sa citokinima (IL-3, IL-6, G-CSF) i reproducirati 7 puta više kolonija u dugoročnim kulturama od stanica koštane srži.

Banke matičnih stanica srčanih krvnih stanica

Za pravilan razvoj novog područja praktične medicine - transplantacije matičnih stanica krvi iz pupkovine, kao i da se izvrši transplantacija hematopoetskih matičnih stanica koštane srži, morate imati veliku mrežu krvnih banaka, koje su već osnovane u SAD-u i Europi. Međudržavne mreže bankovnih krvnih banaka ujedinjuju Udruženje banaka Netcord. Izvedivost uspostave međunarodne udruge krvi iz pupkovine banke određuje i činjenica da je za obavljanje nepovezane transplantacije potreban veliki broj uzoraka krvi pupkovine upisali, dopuštajući da odaberete HLA-identičnog donora. Samo uspostavljanje sustava banaka sa skladištenjem uzoraka krvi različitih tipova HLA u njima može doista riješiti problem pronalaženja potrebnog donatora. Organizacija takvog sustava bankovnih krvnih banaka zahtijeva preliminarni razvoj etičkih i zakonskih normi, koji se trenutno raspravlja na međunarodnoj razini.

Za stvaranje krvi kabela krvi u Ukrajini, potrebno je izraditi niz odredbi i dokumenata.

Prije svega, ovo su pitanja standardizacije metoda uzorkovanja, frakcioniranja i smrzavanja krvi pupkovine. Potrebno je regulirati pravila krvi pupčane prikupljanja krvi iz pupkovine u bolnicama, u skladu sa zahtjevima iz medicinske etike, odrediti minimalnu količinu krvi pupkovine, koja pruža uspješnu transplantaciju. Treba usporediti i standardizacija različitih kriterija procjene kvalitete i broja hematopoetskih ishodišnih stanica, kao i metode HLA-tipizaciju i metode dijagnosticiranja genetskih i infektivnih bolesti koje se mogu prenijeti pomoću infuzije krvi pupčane vrpce stanica postavljen općenite kriterije odabira zdravih donora. Također je vrijedno raspravljati o stvaranju zasebnih skladišnih postrojenja za serum, stanice i DNA dobivene iz krvi iz pupkovine.

Apsolutno je potrebno organizirati računalnu mrežu podataka o krvi iz pupkovine za provedbu odnosa s registrima donora koštane srži. Za daljnji razvoj transplantacije stanica trebaju razviti specifične protokole uspoređujući rezultate transplantacije krvi pupkovine i koštane srži od HLA-identične rodbine i nepovezanih donatora. U koje se bave etičkim i pravnim problemima kliničkoj uporabi kabel krvnih stanica može pomoći standardizirati dokumentaciju, uključujući pristanak roditelja, kao i obavijest o majke ili rodbina djeteta utvrđene genetske i / ili zarazne bolesti.

Odlučujući uvjet za razvoj transplantacije stanica u Ukrajini će biti usvajanje Nacionalnog programa za donaciju matičnih stanica i razvoj međunarodne suradnje s drugim zemljama putem Svjetske udruge donator koštane srži (WMDA), programu National SAD donator koštane srži (NMDP) i drugih registara.

Generaliziranja još uvijek kratka povijest hematopoetskih matičnih stanica transplantacije krvi pupkovine, napominje se da je prva pretpostavka o mogućnosti kliničke primjene krvi pupkovine, napravio je početkom 70-ih, bili su u 80 godina potvrdila rezultate eksperimentalnih studija na životinjama, a 1988. Godine provedeno je prvi svjetski transplantaciju hematopoetskih stanica ljudskog krvi iz pupkovine pupčane, a onda je počeo razvijati globalnu mrežu kabel bankama krvi. Nakon 10 godina, broj bolesnika s transplantiranih hematopoetskih stanica, krvi pupčane vrpce bliže do 800. Među njima su bili pacijenti s različitim bolestima tumora (leukemija, limfoma, krutih tumora) i ne-tumora (kongenitalne imunodeficijencije, anemija, bolesti povezane s metaboličkim poremećajima) prirode.

U krvi kabela, sadržaj ranijih i predanih progenitor stanica je veći nego u perifernoj krvi odrasle osobe. Od broja jedinica koloniziranja granulocitnih makrofaga i proliferativni potencijal krvi pupčane je mnogo veća od periferne krvi odraslih, i nakon davanja faktora rasta. U dugotrajnim kulturama stanica in vitro, postojala je veća proliferativna aktivnost i održivost krvnih stanica pupčane kostiju od stanica koštane srži. Kritični momenti transplantacije matičnih stanica krvi pupčane vrpce su potencijalni broj hematopoetskih i nukleinske stanice, prisutnost infekcije citomegalovirusom, HLA-kompatibilan donora i primatelja, tjelesnoj težini i dobi pacijenta.

Međutim, transplantacija matičnih stanica krvi iz pupkovine treba smatrati kao alternativa za transplantaciju koštane srži u liječenju teških bolesti u krvi, osobito kod djece. Klinički problemi transplantacije krvi pupkovine stanica postupno rješavati - tu su već prilično učinkovite tehnike uzorkovanja, razdvajanje i zamrzavanje kabel krvnih stanica, osigurava uvjete za formiranje kabel bankama krvi, metode ispitivanja su poboljšani stanica s jezgrom. Optimalno vrijeme za odvajanje hematopoetskih Predsklop pupkovine matičnih stanica u velikim uspostavi banaka treba smatrati 3% otopine želatine i 6% -tnom hidroksietil škrob.

Perehrestenko P. I suradnici (2001.) s pravom ističu da je transplantacija moždine matičnih stanica krvi treba zauzeti svoje zasluženo mjesto u složenim terapijske mjere za prevladavanje depresiju hematopoeze raznog porijekla, kao GSK krv iz pupkovine se razlikuju u nekoliko značajnih prednosti, među kojima važno je relativna jednostavnost ubiranja, nema rizika za donatora, nisku kontaminaciju neonatalnih stanica virusa i relativno niske troškove transplantacije. Neki autori navode da je transplantacija umbilikalne krvnih stanica rjeđe od stanica koštane srži, popraćeno komplikacija povezanih s reakcijom „graft versus host”, koja je posljedica, na njihovom mišljenju, slaba ekspresija u kabel krvnih stanica HLA-DR antigeni i njihove nezrelost. Ipak, glavna populacija stanica s jezgrom od krvi pupčane vrpce su T limfociti (SDZ-pozitivne stanice), čiji sadržaj je 50%, što je 20% manja nego u perifernoj krvi odraslih, ali su fenotipske razlike subpopulacija T-stanica iz tih izvori su beznačajni.

Među čimbenicima koji izravno utječu na opstanak matičnih stanica transplantacije krvi pupkovine, treba napomenuti starost bolesnika (najbolji rezultati se vide u primatelja u dobi do 5 godina), rano otkrivanje bolesti i oblik leukemije (učinkovitost je znatno veći u akutne leukemije). Od velike važnosti su doza stanica s jezgrom od krvi pupkovine, a njihov HLA-kompatibilan s primateljem. To nije analiza nesreća kliničke učinkovitosti transplantacije krvi iz pupkovine GSK u onkologiju i hematologiju pokazuje najbolje rezultate liječenja pomoću povezanih transplantacija: jednogodišnje preživljavanje slobodnim od bolesti u ovom slučaju doseže 63%, dok je nevezano transplantacije - samo 29%.

Tako, prisutnost velikog broja matičnih stanica u krvi pupčane vrpce i visoku sposobnost repopulyatsionnaya novorođenih hematopoetskih matičnih stanica čini ih pogodnima za alogeničnu transplantaciju u bolesnika s zloćudnih bolesti hematološkog sustava. Međutim, imajte na umu da je rekapitulacija hematopoeze nakon transplantacije hematopoetskih matičnih stanica krvi iz pupkovine „rasteže na vrijeme”: vraćanje sadržaja u neutrofila u perifernoj krvi obično se javlja krajem 6. Tjednu, a trombocitopenija pojava nestane, obično nakon 6 mjeseci. Osim toga, nezrele stanice krvi koje tvore krvi pupčane vrpce ne isključuje imunološkog sukoba: snažan tijek akutne i kronične reakcije presatka protiv domaćina „” promatrati pojedinačno, u 23 i 25% od primatelja. Relapsi akutne leukemije do kraja prve godine nakon transplantacije krvnih stanica pupčane vrpce zabilježeni su u 26% slučajeva.

[10], [11]