PCR kao metoda dijagnosticiranja genetske bolesti
Posljednji pregledao: 23.04.2024
Svi iLive sadržaji medicinski se pregledavaju ili provjeravaju kako bi se osigurala što je moguće točnija činjenica.
Imamo stroge smjernice za pronalaženje izvora i samo povezujemo s uglednim medijskim stranicama, akademskim istraživačkim institucijama i, kad god je to moguće, medicinski pregledanim studijama. Imajte na umu da su brojevi u zagradama ([1], [2], itd.) Poveznice koje se mogu kliknuti na ove studije.
Ako smatrate da je bilo koji od naših sadržaja netočan, zastario ili na neki drugi način upitan, odaberite ga i pritisnite Ctrl + Enter.
PCR je novo postignuće molekularne genetike koja se koristi za DNA amplifikaciju i omogućuje specifični dio DNA (to jest bilo koji gen od interesa) koji se brzo replicira in vitro više od 200.000 puta. Da bi se izvršila reakcija, dovoljno je imati DNA materijal jedne stanice; količina DNK pojačanog PCR-om je toliko velika da se ova DNA može jednostavno bojen (uporabom radioaktivnih proba nakon što nije potrebna elektroforeza). Preduvjet za provođenje PCR je poznavanje nukleotidnog slijeda pojačane DNA regije za pravilan odabir umjetno sintetiziranih primera.
Trenutačno, PCR je proces koji se odvija u jednoj cijevi, a sastoji se od ponavljajućih ciklusa amplifikacije (umnožavanje kopija) od specifične DNA sekvence kako bi se dobio dovoljno velikog broja kopija koji se mogu identificirati pomoću elektroforeze. Jedna ključna komponenta reakcije - „primera” - sintetski oligonukleotidi koji se sastoji od 20-30 baza komplementarni „Položaj” (područja) združivanja (veza) za identifikaciju, na dio templatnoj DNA.
PCR se nastavlja automatski u termostat programatora - termocikler (termocikler). Ciklus u tri koraka, zbog čega se dobivaju točne kopije prepoznatljivog dijela DNA predložaka, ponavljaju se 30-50 puta u skladu s unaprijed programiranim programom termociklira. U prvom ciklusu, oligoprameri hibridiziraju s izvornim DNK predložaka, a zatim (u naknadnim ciklusima) i sa novosintetiziranim DNA molekulama dok se akumuliraju u reakcijskoj smjesi. U potonjem slučaju, sinteza DNK ne završava uslijed promjene režima temperature, već nakon dostizanja granice DNA polimeraze pojačane regije koja određuje veličinu novo sintetizirane DNA regije unutar jednog nukleotida.
Kao metoda za detektiranje dobivenih DNA molekula koristi se elektroforeza, pomoću kojeg se amplificirani materijal dijeli prema veličini amplikona (produkti amplifikacije).
Pomoću PCR-a moguće je izravno istražiti mjesta lokalizacije sumnjivih mutacija ili polimorfnih mjesta, kao i proučiti prisutnost bilo koje druge specifične osobine DNA.
[