Medicinski stručnjak članka
Nove publikacije
PCR kao metoda dijagnosticiranja genetskih bolesti
Posljednji pregledao: 04.07.2025
Svi iLive sadržaji medicinski se pregledavaju ili provjeravaju kako bi se osigurala što je moguće točnija činjenica.
Imamo stroge smjernice za pronalaženje izvora i samo povezujemo s uglednim medijskim stranicama, akademskim istraživačkim institucijama i, kad god je to moguće, medicinski pregledanim studijama. Imajte na umu da su brojevi u zagradama ([1], [2], itd.) Poveznice koje se mogu kliknuti na ove studije.
Ako smatrate da je bilo koji od naših sadržaja netočan, zastario ili na neki drugi način upitan, odaberite ga i pritisnite Ctrl + Enter.
PCR je novo dostignuće molekularne genetike, koristi se za amplifikaciju DNA i omogućuje brzo in vitro umnožavanje specifične regije DNA (tj. bilo kojeg gena od interesa) više od 200 000 puta. Za provođenje reakcije dovoljno je imati DNA materijal iz jedne stanice; količina DNA amplificirane PCR-om je toliko velika da se ta DNA može jednostavno obojiti (nije potrebna upotreba radioaktivnih sondi nakon elektroforeze). Preduvjet za provođenje PCR-a je poznavanje nukleotidnog slijeda amplificirane regije DNA za ispravan odabir umjetno sintetiziranih primera.
Trenutno je PCR proces u jednoj epruveti koji se sastoji od ponovljenih ciklusa amplifikacije (reprodukcije, kopiranja) specifičnog slijeda molekule DNA kako bi se dobio dovoljno velik broj kopija koje se mogu identificirati elektroforezom. Jedna od ključnih komponenti reakcije su "primeri" - sintetski oligonukleotidi koji se sastoje od 20-30 baza komplementarnih "mjestima" (područjima) vezanja (pričvršćivanja) na identificiranom području matrične DNA.
PCR se odvija automatski u programabilnom termostatu - termalnom cikleru (amplifikatoru). Trostupanjski ciklus, koji rezultira točnim kopijama identificiranog dijela matrične DNA, ponavlja se 30-50 puta u skladu s navedenim programom termalnog ciklera. U prvom ciklusu, oligoprimeri hibridiziraju s izvornom matričnom DNA, a zatim (u sljedećim ciklusima) s novo sintetiziranim molekulama DNA kako se one akumuliraju u reakcijskoj smjesi. U potonjem slučaju, sinteza DNA završava ne kao rezultat promjene temperature, već nakon što se dostigne granica DNA polimeraze amplificiranog dijela, koja određuje veličinu novo sintetiziranog dijela DNA s točnošću od jednog nukleotida.
Elektroforeza se koristi kao metoda za detekciju dobivenih molekula DNA, uz pomoć koje se amplificirani materijal odvaja prema veličini amplikona (produkata amplifikacije).
PCR se može koristiti za izravno ispitivanje lokacija sumnjivih mutacija ili polimorfnih mjesta, kao i za proučavanje prisutnosti bilo kojih drugih specifičnih značajki DNA.
[ 1 ], [ 2 ], [ 3 ], [ 4 ], [ 5 ], [ 6 ], [ 7 ], [ 8 ], [ 9 ]