Vitamin A u krvi

Referentne vrijednosti (norma) za koncentraciju vitamina A (retinola) u krvnom serumu: kod djece od 1-6 godina - 0,7-1,5 μmol/l, 7-12 godina - 0,91-1,71 μmol/l, 13-19 godina - 0,91-2,51 μmol/l; kod odraslih - 1,05-2,09 μmol/l.

Vitamin A je vitamin topljiv u mastima i postoji u dva oblika: sam vitamin A ili retinol (nalazi se samo u životinjskim proizvodima) i provitamin A, poznat kao karoten (dobiva se iz životinjskih i biljnih proizvoda), koji se može pretvoriti u retinol u stijenkama probavnog trakta. Otprilike 50-90% retinola iz prehrane apsorbira se u tankom crijevu i transportira u kompleksu vezanom za hilomikrone u jetru, gdje se pohranjuje kao retinol palmitat. Po potrebi se oslobađa u krvotok kao retinol u kompleksu s proteinom koji veže vitamin A. U krvnom serumu, kompleks proteina koji veže vitamin A i retinola veže se na transtiretin. Iz krvnog seruma retinol preuzimaju ciljne stanice, poput fotoreceptora mrežnice i epitela.

Kada tijelo prima vitamin A u količinama koje prelaze potrebe (180-430 mcg retinola dnevno, ovisno o dobi, spolu i fiziološkom stanju), njegov višak se taloži u jetri, tvoreći depo ovog vitamina. Kada se smanji unos retinola hranom, njegove rezerve iz jetre oslobađaju se u krvotok, održavajući koncentraciju retinola u krvnom serumu na normalnoj razini (iznad 0,7 μmol/l). Drugi biološki aktivni oblici vitamina A (retinolna i retinoična kiselina) prisutni su u krvi u vrlo niskim koncentracijama (ispod 0,35 μmol/l); esteri retinola čine približno 5% ukupnog vitamina A (0,1-0,17 μmol/l).

Vitamin A igra važnu ulogu u oksidacijsko-redukcijskim procesima. Retinol potiče stvaranje glikogena u jetri i mišićima, pomaže u povećanju sadržaja kolesterola u krvi i sudjeluje u sintezi steroidnih i spolnih hormona. Neophodan je za rast i formiranje koštanog sustava, resintezu rodopsina, a također potiče normalno funkcioniranje sluznica i pokrovnog epitela kože, sprječavajući njezinu metaplaziju, hiperkeratozu i pretjerano ljuštenje. Vitamin A pomaže u jačanju kose, zuba i desni. Posljednjih godina dokazana je raznolika uloga vitamina A u sprječavanju raka i regulaciji imuniteta (neophodan je za dovršetak fagocitoze, povećava sintezu Ig, potiče stvaranje T-ubojica, stimulira T-pomoćne stanice tipa II itd.). Vitamin A je aktivni antioksidans, koji uglavnom djeluje u prisutnosti vitamina E; štiti vitamin C od oksidacije. Nedostatak vitamina A smatra se faktorom rizika za maligne neoplazme. Eksperimentalne studije pokazale su da povećanje sadržaja vitamina A u prehrani povećava srednji životni vijek za 17,5%. Cink je esencijalni kofaktor u metabolizmu vitamina A (neophodan za sintezu proteina koji veže vitamin A).

Prosječna dnevna potreba za retinol za odrasle (20-50 godina) iznosi 1,2 mg (4000 IU, 1 IU je ekvivalentno 0,3 mcg retinola), za trudnice - 1,5 mg (5000 IU), za dojilje - 1,8 mg (6000 IU), za osobe starije od 60 godina - 2,5 mg (10 000 IU). Najmanje trećinu dnevne potrebe za retinolom treba unijeti u tijelo u gotovom obliku; ostatak se može pokriti konzumiranjem karotenoida, iz kojih se retinol stvara u tijelu. Treba uzeti u obzir da se otprilike 30% retinola u prehrambenim proizvodima uništava tijekom toplinske obrade. Aktivnost retinola je 2 puta veća od aktivnosti karotena, osim toga, samo 30-40% potonjeg se apsorbira u crijevima. Stoga se pri procjeni prehrane smatra da je 1 mg retinola približno ekvivalentno 6 mg karotenoida.

Određivanje retinola (vitamina A) i karotenoida u krvnom serumu prema Besseyu, modificiranom od strane L. A. Anisimove

Princip metode

Određivanje vitamina A i karotenoida temelji se na njihovoj hidrolizi u alkalnoj alkoholnoj otopini, nakon čega slijedi ekstrakcija smjesom organskih otapala.

Reagensi

• 11 M otopina kalijevog hidroksida (KOH).
• 96% etilnog alkohola.
• 1 M otopina kalijevog hidroksida (KOH) u 96%-tnom etilnom alkoholu: 1 volumen 11 M otopine KOH pomiješa se s 10 volumena 96%-tnog etilnog alkohola. Reagens se priprema na dan istraživanja. Ako se tijekom miješanja pojavi obojenje, alkohol treba pročistiti destilacijom prije upotrebe.
• Ksilen, kemijski čisti
• Oktan, kemijski čist
• Smjesa ksilena i oktana: priprema se miješanjem jednakih volumena ksilena i oktana.

Studije se provode pomoću spektrofotometra.

Postupak određivanja vitamina A

Krv uzeta iz prsta (oko 1 ml) stavlja se u centrifugalnu epruvetu i drži u staklenoj čašici s toplom vodom (temperatura 40-45° C) 20-30 minuta. Za odvajanje seruma, krvni ugrušak se pažljivo povlači uz rub stijenki epruvete tankim staklenim štapićem i centrifugira pri 3000 okretaja u minuti tijekom 10 minuta.

Uzme se 0,12 ml seruma i prenese u aglutinacijsku epruvetu, gdje se zatim doda 0,12 ml 1 M otopine kalijevog hidroksida u alkoholu. Sadržaj se dobro protrese.

Epruvete s uzorcima stavljaju se u vodenu kupelj na 20 minuta na temperaturi od 60°C kako bi se provela hidroliza.

Uzorci se ohlade i doda im se 0,12 ml smjese ksilen-oktana te se snažno tresu 10-15 s. Ponovno se ohlade i centrifugiraju.

Gornji sloj koji sadrži vitamin A i karotenoide pažljivo se uklanja Pasteurovom pipetom s gumenom kuglicom i prenosi u mikrokivete.

Uzorci se spektrofotometriraju na valnoj duljini od 328 nm za određivanje vitamina A, a na valnoj duljini od 460 nm za određivanje karotenoida.

Nakon spektrofotometrije, uzorci se izlažu ultraljubičastom zračenju kako bi se uništio vitamin A. U tu svrhu, kvarcna (baktericidna) lampa se postavlja na udaljenosti od 15-20 cm od mikrokiveta tako da je dio kivete ispunjen tekućinom izložen zračenju; vrijeme osvjetljavanja je 45-60 min.

Uzorci se ponovno spektrofotometriraju na valnoj duljini od 328 nm. Sadržaj vitamina A određen je razlikom u vrijednostima ekstinkcije (optička gustoća) uzimajući u obzir koeficijent (faktor) 637 koji je Bessey izračunao za vitamin A.

Izračun se provodi prema formuli:

X = 637 × (E328(1) - E328(2)),

Gdje je X sadržaj vitamina A, μg/dl; 637 je koeficijent izračunat prema Besseyu za određivanje vitamina A; E328(1) je optička gustoća otopine prije ozračivanja; E328(2) je optička gustoća otopine nakon ozračivanja.

Koeficijent za pretvaranje koncentracije vitamina A iz µg/dL u µmol/L iznosi 0,035.

Sadržaj karotenoida izračunava se pomoću formule:

X = 480-E480,

Gdje je X sadržaj karotenoida, μg/dl; 480 je koeficijent izračunat prema Besseyu za određivanje karotenoida; E480 je optička gustoća ispitivane otopine.

Bilješka

Prema Besseyu, pri provođenju istraživanja može se koristiti veći ili manji volumen seruma, ali njegov omjer prema volumenu alkoholne otopine mora biti konstantan pri svakoj promjeni volumena (količine) smjese ksilen-oktan.

Normalan sadržaj vitamina A u krvnom serumu je: kod novorođenčadi i dojenčadi - 160-270 μg/l; kod odraslih - 1,05-2,45 μmol/l (300-700 μg/l). Sadržaj karotenoida u krvnom serumu odraslih je 800-2300 μg/l.