Vitamin A u krvi

Referentne vrijednosti (normalna) razina vitamina A (retinol) u krvnom serumu: djeca 1-6 godina - 0,7-1,5 mol / L, 7-12 - 0,91-1,71 mmol / l, 13 -19 godina - 0,91-2,51 μmol / 1; u odraslih osoba je 1,05-2,09 μmol / l.

Vitamin A se odnosi na topljive u mastima i postoji u dva oblika - stvarni vitamin A ili retinol (naći samo u životinjskim proizvoda) i pro-vitamina, poznat kao karoten (pripravljen od životinjskog ili biljnog podrijetla), koji se može prevesti u retinol u zidovima probavni trakt. Oko 50-90% od ulazne retinol hrane apsorbira se u tankom crijevu i transportira u hilomikrona povezanih s kompleksom u jetru, gdje je uskladišten u obliku retinol palmitat. Ako je potrebno, oslobađa se u krvotok u obliku retinola, koji je u kombinaciji s proteinima koji vežu vitamin A. U serumu, protein za vezanje vitamina A + kompleks retinola veže se na transtiretin. Od seruma retinol je zarobljen ciljnim stanicama, kao što su retinalni fotoreceptori i epitel.

Kada je tijelo vitamina A u količini većoj od zahtjeva (180-430 mcg retinol dnevno ovisno o dobi, spolu i stanju fiziološke), njegov suvišak u jetri talože tvore depo tog vitamina. Pod smanjenim pričuva ulaz retinol hrane se ističe iz jetre u krvotok, održavanje koncentracije serumskog retinol u normalnom rasponu (više od 0,7 mol / l). Drugi biološki aktivni oblici vitamina A (retina i retinoična kiselina) prisutni su u krvi u vrlo niskim koncentracijama (ispod 0,35 μmol / L); na esterima retinola čini oko 5% ukupnog vitamina A (0,1-0,1 μmol / l).

Vitamin A ima važnu ulogu u procesima redukcije oksidacije. Retinol potiče stvaranje glikogena u jetri i mišićima, potiče povećanje kolesterola u krvi, sudjeluje u sintezi steroidnih i spolnih hormona. To je potrebno za rast i formiranje kostiju kostura resynthesis rhodopsina, a također doprinosi normalnom funkcioniranju sluznice i epitel poklopca kože, sprječava metaplazije, hiperkeratozu i prekomjerne sloughing. Vitamin A pomaže ojačati kosu, zube i desni. Posljednjih godina, pokazuje raznoliki ulogu vitamina A u prevenciji raka i regulaciju imuniteta (esencijalne za završetak fagocitozu, povećavaju sintezu Ig, stimulira proizvodnju ubojitih T stanica, pospješuje tipa T-helper II et al.). Vitamin A - aktivni antioksidant, koji djeluje uglavnom u prisutnosti vitamina E; štiti vitamin C od oksidacije. Nedostatak vitamina A smatra se faktorom rizika za maligne neoplazme. U pokusnim ispitivanjima pokazalo se da povećanje sadržaja vitamina A u prehrani povećava životni vijek medijana za 17,5%. Cink je bitan kofaktor metabolizma vitamina A (potreban za sintezu vitamina-vezujućeg proteina).

Prosječna dnevna potreba za odrasle retinol (20-50 godina) 1,2 mg (4,000 IU, 1 IU je ekvivalentno 0,3 mikrograma retinol) za trudnice - 1,5 mg (5.000 IU) za dojenje - 1, 8 mg (6000 IU), za osobe starije od 60 godina - 2,5 mg (10,000 IU). Barem trećinu dnevnog zahtjeva retinola treba dostaviti tijelu u gotovom obliku; ostatak se može apsorbirati uporabom karotenoida, od kojih se retinol formira u tijelu. Treba imati na umu da otprilike 30% retinola u prehrambenim proizvodima uništava toplinska obrada. Aktivnost retinola je 2 puta veća od karotena, a potonji je samo 30-40% apsorbiran u crijevu. Stoga, pri procjeni unosa hrane, smatra se da 1 mg retinola aproksimativno odgovara 6 mg karotenoida.

Određivanje retinola (vitamina A) i karotenoida u serumu prema Besseyu u modifikaciji LA Anisimove

Načelo metode

Određivanje vitamina A i karotenoida temelji se na njihovoj hidrolizi u otopini alkalnog alkohola, nakon čega slijedi ekstrakcija s mješavinom organskih otapala.

Reagensi

• 11 M otopina kalij hidroksida (KOH).
• 96% etilnog alkohola.
• 1 M otopina kalij hidroksida (KOH) u 96% etilnom alkoholu: 1 volumen 11 M otopine KOH pomiješa se s 10 volumena 96% etilnog alkohola. Reagensi se pripravljaju na dan studije. Ako se tijekom miješanja pojavi bojenje, alkohol se prije upotrebe mora očistiti destilacijom.
• Ksilol, hp.
• Oktan, h.ch.
• Mješavina ksilen-oktana: dobivena miješanjem jednakih volumena ksilena i oktana.

Istraživanja se provode na spektrofotometru.

Tijek određivanja vitamina A

Krv koja se uzima iz prsta (oko 1 ml) unosi se u etiketu za centrifugu i stavi u staklenu posudu s toplom vodom (temperatura 40-45 ° C) 20-30 minuta. Da bi se odijelio serum, krvni ugrušak je pažljivo namotan oko ruba cijevi s tankom staklenom šipkom i centrifugiran na 3000 okretaja u minuti tijekom 10 minuta.

Izaberite 0,12 ml seruma i prenesite je u aglutinucijsku cijev, zatim dodajte 0,12 ml 1 M otopine alkohola kalijevog hidroksida. Sadržaj se pažljivo protresa.

Ispitne cijevi sa sondama stavljaju se u vodenu kupelj tijekom 20 minuta pri temperaturi od 60 ° C za hidrolizu.

Uzorci se ohlade i doda se 0,12 ml smjese ksilen-oktana, snažno protresa 10-15 sekundi. Ponovno ohladi i centrifugira.

Pažljivo uklonite gornji sloj koji sadrži vitamin A i karotenoide pomoću Pasteurove pipete s gumenom lončanicom i prenesite je u mikrocuvete.

Uzorci su spektrofotometrijski na valnoj duljini od 328 nm - za određivanje vitamina A i na valnoj duljini od 460 nm - za određivanje karotenoida.

Nakon spektrofotometrijski ispitivani uzorak podvrgnuta ultraljubičastom zračenju za uništavanje vitamina A. U tu svrhu, na udaljenosti od 15-20 cm od kvarca microcuvettes postavljen svjetiljke (baktericidnog) tako da je zračenje otvorenog dijela kivetu, ispunjena tekućinom; Vrijeme ozračivanja je 45-60 minuta.

Uzorci se ponavljaju spektrofotometrijski na valnoj duljini od 328 nm. Vitamin A sadržaj je određena razlika u vrijednosti ekstinkcije (optičke gustine) s koeficijentom (faktor) 637 izračunata za vitaminom A. Bessey

Izračun se provodi prema formuli:

X = 637 × (À328 (1) - À328 (2)),

Gdje je X sadržaj vitamina A, μg / dL; 637 je koeficijent koji je Bessey izračunao za određivanje vitamina A; E328 (1) - optička gustoća otopine prije ozračivanja; E328 (2) je optička gustoća otopine poslije ozračivanja.

Koeficijent za prijenos koncentracije vitamina A iz μg / dL u μmol / l je 0,035.

Sadržaj karotenoida izračunava se formulom:

X = 480-440,

Gdje je X sadržaj karotenoida, μg / dL; 480 je koeficijent koji je Bessey izračunao za određivanje karotenoida; E480 je optička gustoća ispitne otopine.

Primjedba

Prema Bessey u istraživanju mogu uzeti veći ili manji volumen serumu, ali je omjer prema volumenu otopine alkohola moraju biti konstantan pri svakoj promjeni volumena (količina) oktanske-ksilen smjese.

Norma u sadržaju vitamina A u krvnom serumu je: kod novorođenčadi i dojenčadi - 160-270 μg / l; u odraslih, 1,05-2,45 μmol / l (300-700 μg / l). Sadržaj karotenoida u serumu za odrasle je 800-2300 μg / l.