Testiranje osjetljivosti na antibiotike: priprema, dešifriranje, koliko se radi

Danas testiranje osjetljivosti na antibiotike postaje sve popularnije. Ljudska mikroflora je prilično raznolika, predstavljena velikim brojem mikroorganizama u raznim biotopima.

Farmaceutske tvrtke razvile su veliki broj antibakterijskih sredstava, antibiotika, koji pomažu u održavanju normalnog omjera i broja mikrobnih populacija. S početkom ere antibiotika, mnoge bolesti koje su se prije smatrale smrtonosnima su izliječene. Ali mikroorganizmi također nastoje preživjeti, postupno se prilagođavajući djelovanju antibakterijskih lijekova. Tijekom vremena, mnogi od njih su stekli otpornost na mnoge lijekove, fiksirali je u genotipu i počeli je prenositi s generacije na generaciju. Dakle, novi mikroorganizmi su u početku neosjetljivi na određene lijekove, a njihova upotreba može biti neučinkovita. Farmaceuti razvijaju sve više novih proizvoda, dodajući im nove aktivne komponente, mijenjajući osnovnu formulu. Ali postupno se razvija i otpornost na njih.

Razlog povećane otpornosti mikroflore na mnoge lijekove, pa čak i njihove analoge, često se krije u nepravilnoj i nekontroliranoj upotrebi antibiotika. Liječnici propisuju antibiotike i njihove kombinacije za različite bakterijske bolesti. Istovremeno, ne postoji prethodna procjena koliko će biti učinkoviti, ne odabire se optimalna doza, što je vrlo važno i za liječenje i za sprječavanje mehanizama razvoja daljnje rezistencije. Mnogi ljudi pogrešno propisuju antibakterijsku terapiju čak i za virusne bolesti, koja je neučinkovita, budući da antibiotik ne djeluje protiv virusa.

Terapija se često propisuje bez prethodnog testiranja osjetljivosti, ne provodi se odabir aktivnog sredstva i potrebne doze za svaku specifičnu bolest i biotop. Budući da se antibiotici propisuju "naslijepo", često postoje slučajevi kada ne pokazuju nikakvu aktivnost protiv mikroorganizama koji su uzrokovali bolest i čiji broj treba smanjiti. Umjesto toga, utječu na druge predstavnike mikroflore, što rezultira disbakteriozom, koja je također prilično opasna patologija i može dovesti do ozbiljnih posljedica. Posebno su opasni slučajevi kada antibiotik uništava normalnu mikrofloru, koja je namijenjena zaštiti tijela i održavanju njegovog normalnog funkcioniranja. Postoje i slučajevi kada se propiše previše ili premalo lijeka.

Pacijenti su također neodgovorni prema liječenju. Često se liječenje prekida nakon što simptomi bolesti prestanu smetati. Istovremeno, mnogi radije ne završe cijeli ciklus. To je jedan od čimbenika koji doprinose razvoju otpornosti bakterija. Puni ciklus je osmišljen kako bi se potpuno uništila patogena mikroflora. Ako se ciklus ne završi, nije potpuno uništen. Oni mikroorganizmi koji prežive prolaze mutacije, razvijaju mehanizme koji im pružaju zaštitu od ovog lijeka i prenose ga na sljedeće generacije. Opasnost je u tome što se otpornost razvija ne samo u odnosu na ovaj specifični lijek, već i na cijelu skupinu lijekova.

Stoga je danas jedno od najučinkovitijih sredstava racionalne terapije i sprječavanja rezistencije prethodno određivanje osjetljivosti na propisani lijek i odabir njegove optimalne doze.

[ 1 ], [ 2 ], [ 3 ], [ 4 ], [ 5 ], [ 6 ], [ 7 ], [ 8 ]

Indikacije za postupak testiranje osjetljivosti na antibiotike

Normalno, takva se analiza treba provesti u svim slučajevima gdje je potrebna antibakterijska terapija. Na temelju osnovnih zakona antibiotske terapije, bilo koji antibiotik može se propisati tek nakon što je provedena prethodna procjena osjetljivosti mikroflore na ovo sredstvo i određena optimalna koncentracija aktivne tvari u laboratorijskim uvjetima. U praksi se, zbog različitih razloga i okolnosti, takva studija ne provodi prije početka liječenja, a liječnik je prisiljen odabrati lijek "nasumično".

Danas se testiranje osjetljivosti provodi samo u slučajevima kada liječnik ima ozbiljne sumnje u to hoće li propisani lijek biti učinkovit, u slučajevima dugotrajnog nedostatka učinka lijeka, a također i pri ponovljenoj upotrebi istog lijeka u ograničenom vremenskom razdoblju. Osjetljivost se često određuje u liječenju spolno prenosivih bolesti. Mnogi stručnjaci se okreću analizi u slučaju nuspojava, alergijskih reakcija i kada je potrebno zamijeniti jedan lijek drugim.

Analiza se također često koristi za odabir lijekova za antibakterijsku terapiju u razdoblju oporavka nakon operacija, laparoskopskih intervencija i vađenja organa. U odjelima kirurgije i gnojne kirurgije takva je studija jednostavno neophodna, budući da se ovdje otpornost razvija prilično brzo. Osim toga, razvijaju se superrezistentni "bolnički" lijekovi. Mnoge privatne klinike pristupaju propisivanju lijekova s punom odgovornošću - tek nakon provjere osjetljivosti. U mnogim slučajevima proračun državnih ustanova jednostavno ne dopušta provođenje takvih studija za svakog pacijenta kojem je potrebna antibakterijska terapija.

[ 9 ], [ 10 ], [ 11 ]

Priprema

Priprema za studiju ne zahtijeva nikakve posebne mjere. Isto je kao i za bilo koje testove. Nekoliko dana prije studije trebali biste se suzdržati od pijenja alkohola. Ujutro, na dan prikupljanja materijala, u većini slučajeva ne možete jesti ni piti. Ali sve ovisi o vrsti analize. Materijal za studiju može biti različit, ovisno o bolesti.

Kod bolesti grla i dišnih putova uzima se bris grla i nosa. U venerologiji, ginekologiji, urologiji uzimaju se genitalni brisevi i krv za analizu. Kod bolesti bubrega često je potreban urin. Kod gastrointestinalnih bolesti i nekih zaraznih bolesti pregledava se stolica i povraćeni sadržaj. Ponekad se može pregledati majčino mlijeko, iscjedak iz nosa, očni sekret, slina i sputum. U slučaju teških patologija i sumnje na zarazni proces pregledava se čak i cerebrospinalna tekućina. Spektar je prilično širok.

Značajke prikupljanja materijala određene su njegovom biološkom pripadnošću. Dakle, urin i stolica se skupljaju ujutro u čistu posudu ili u posebnu posudu za biološki materijal. Majčino mlijeko se skuplja prije hranjenja. Srednji dio se uzima za pregled. Bris se skuplja posebnim brisom koji se prolazi duž sluznice, a zatim se spušta u epruvetu s pripremljenim medijem. Krv se skuplja u epruvetu, iz prsta ili vene. Prilikom prikupljanja briseva iz uretre ili vagine preporučuje se suzdržavanje od spolnog odnosa nekoliko dana.

Prilikom prikupljanja biološkog materijala za istraživanje, prije svega je potrebno osigurati ispravno prikupljanje i sterilnost. Ali u većini slučajeva to je briga medicinskog osoblja, pacijent se o tome ne bi trebao brinuti. Najčešće se takvim studijama obraćaju ginekolozi i urolozi, na drugom mjestu - otorinolaringolozi u liječenju bolesti nazofarinksa i ždrijela, gornjih dišnih putova.

[ 12 ], [ 13 ], [ 14 ]

Tehnika testiranje osjetljivosti na antibiotike

Prikupljeni biološki materijal se u sterilnim uvjetima dostavlja u laboratorij, gdje se provode daljnja istraživanja. Prije svega, provodi se njegova primarna sjetva na univerzalne hranjive podloge. Dio materijala se uzima i za mikroskopski pregled. Priprema se razmaz za mikroskopiju, provodi se studija, uz pomoć koje je moguće odrediti približnu sliku, pretpostaviti koji su mikroorganizmi prisutni u uzorku. To omogućuje odabir najoptimalnijih okruženja za daljnja istraživanja i identifikaciju mikroorganizama. Također, mikroskopijom se mogu vidjeti znakovi koji ukazuju na upalu, onkološki proces.

Tijekom nekoliko dana, kolonije mikroorganizama rastu u Petrijevoj zdjelici. Zatim se uzima nekoliko kolonija i prenosi na selektivne hranjive podloge koje omogućuju određivanje približne skupine mikroorganizama. Inkubiraju se nekoliko dana u termostatu, a zatim započinje identifikacija (određivanje vrste mikroorganizma). Identifikacija se provodi pomoću posebnih biokemijskih i genetskih testova, identifikatora. Dodatno se mogu provesti i imunološke studije.

Nakon što je glavni patogen izoliran, procjenjuje se njegova osjetljivost na antibiotike. Za to postoji nekoliko metoda. Najčešće korištena metoda je serijsko razrjeđivanje ili metoda disk difuzije. Metode su detaljno opisane u mikrobiološkim priručnicima, smjernicama i laboratorijskim standardima.

Bit metode disk difuzije je u tome što se identificirani mikroorganizmi siju na hranjivi medij, a na vrh se postavljaju posebni diskovi natopljeni antibioticima. Sijanje se inkubira u termostatu nekoliko dana, a zatim se mjere rezultati. Procjenjuje se stupanj inhibicije rasta bakterija svakim antibiotikom. Ako je bakterija osjetljiva na antibiotik, oko diska se formira "zona lize" u kojoj se bakterije ne razmnožavaju. Njihov rast je spor ili potpuno odsutan. Promjer zone inhibicije rasta koristi se za određivanje stupnja osjetljivosti mikroorganizama na antibiotik i formuliranje daljnjih preporuka.

Metoda serijskog razrjeđivanja je najtočnija. Za to se mikroorganizmi siju na tekuće hranjive podloge, dodaje se antibiotik razrijeđen prema decimalnom sustavu razrjeđivanja. Nakon toga, epruvete se stavljaju u termostat na inkubaciju nekoliko dana. Osjetljivost na antibiotike određuje se stupnjem rasta bakterija u hranjivoj juhi s dodatkom antibiotika. Bilježi se minimalna koncentracija pri kojoj mikroorganizmi još rastu. To je minimalna doza lijeka (potreban je preračun iz mikrobioloških jedinica u aktivnu tvar).

To su standardne mikrobiološke metode koje čine osnovu svakog istraživanja. One podrazumijevaju ručno izvršavanje svih manipulacija. Danas su mnogi laboratoriji opremljeni posebnom opremom koja sve te postupke izvodi automatski. Specijalist koji radi s takvom opremom treba samo sposobnost rada s opremom, poštivanje sigurnosnih i sterilnih pravila.

Potrebno je uzeti u obzir da se indeksi osjetljivosti u laboratorijskim uvjetima i u živim organizmima oštro razlikuju. Stoga se osobi propisuje veća doza od one određene tijekom istraživanja. To je zbog činjenice da tijelo nema tako optimalne uvjete za rast bakterija. U laboratoriju se stvaraju "idealni uvjeti". Dio lijeka može se neutralizirati djelovanjem sline, želučanog soka. Dio se neutralizira u krvi antitijelima i antitoksinima koje proizvodi imunološki sustav.

Test osjetljivosti urina na antibiotike

Prvo se prikuplja biološki materijal. Za to je potrebno prikupiti srednji dio jutarnjeg urina i dostaviti ga u laboratorij. Važno je održavati sterilnost i ne uzimati antibiotike nekoliko dana prije analize, inače možete dobiti lažno negativan rezultat. Nakon toga se provodi standardna sjetva, čija je bit izolacija čiste kulture patogena i odabir antibiotika koji će na njega imati optimalni baktericidni učinak. Određuje se potrebna koncentracija antibiotika.

Analiza urina najčešće se propisuje kada postoji sumnja na infektivni i upalni proces u genitourinarnom sustavu, s imunodeficijencijama i metaboličkim poremećajima. Normalno, urin je sterilna tekućina. Trajanje takve studije je 1-10 dana i određeno je brzinom rasta mikroorganizma.

Testiranje kulture i osjetljivosti na antibiotike

Studija uključuje izolaciju mikroorganizma koji je patogen u čistu kulturu. Ponekad može postojati nekoliko takvih mikroorganizama (mješovita infekcija). Neki mikroorganizmi sposobni su formirati biofilmove, koji su svojevrsne "mikrobne zajednice". Stopa preživljavanja biofilmova mnogo je veća nego kod pojedinačnih mikroorganizama ili udruga. Osim toga, nisu svi antibiotici sposobni utjecati na biofilm i prodrijeti u njega.

Za određivanje patogena, kako bi se izolirao u čistu kulturu, provodi se sijanje. Tijekom istraživanja provodi se nekoliko sjetva u različitim hranjivim medijima. Zatim se izolira čista kultura, određuje se njezina biološka pripadnost i određuje se osjetljivost na antibakterijske lijekove. Odabire se optimalna koncentracija.

Za proučavanje se može koristiti bilo koji biološki materijal, ovisno o bolesti i lokalizaciji zaraznog procesa. Trajanje je određeno brzinom rasta mikroorganizama.

[ 15 ], [ 16 ], [ 17 ], [ 18 ], [ 19 ], [ 20 ]

Test osjetljivosti stolice

Stolica se pregledava kod raznih želučanih i crijevnih bolesti, u slučaju sumnje na infektivni proces, bakterijske intoksikacije, trovanja hranom. Svrha studije je izolacija patogena i odabir optimalnih antibakterijskih lijekova za njega, koji će imati visoku aktivnost. Važnost ove vrste studije je u tome što je moguće odabrati lijek koji će utjecati samo na patogen i neće utjecati na predstavnike normalne mikroflore.

Prva i vrlo važna faza je prikupljanje stolice. Treba je prikupiti u posebnu sterilnu posudu ujutro. Treba je čuvati najviše 1-2 sata. Žene s menstruacijom trebaju odgoditi analizu do kraja, jer će se točnost rezultata promijeniti. Materijal se dostavlja u laboratorij na testiranje. Analiza se provodi standardnim mikrobiološkim tehnikama sjetve i izolacije čiste kulture. Također se provodi antibiogram. Na temelju zaključka razvijaju se preporuke i određuje se daljnja shema istraživanja.

[ 21 ], [ 22 ], [ 23 ], [ 24 ]

Analiza disbakterioze s osjetljivošću

Materijal za proučavanje je izmet uzet neposredno nakon defekacije. Normalna mikroflora gastrointestinalnog trakta sastoji se od predstavnika normalne flore i nekoliko predstavnika patogene flore. Njihov sastav vrsta, količina i omjer strogo su definirani i drže se unutar dopuštene norme. Ako se taj omjer poremeti, razvija se disbakterioza. Može se manifestirati na različite načine. Zarazne bolesti mogu se razviti ako se količina patogene mikroflore naglo poveća. Ako se količina bilo kojeg mikroorganizma naglo smanji, slobodni prostor zauzimaju drugi predstavnici koji nisu tipični za gastrointestinalni trakt ili su patogeni. Često slobodni prostor zauzima gljivica, tada se razvijaju razne gljivične infekcije i kandidijaza.

Kako bi se utvrdio kvantitativni i kvalitativni sastav crijevne mikroflore, provodi se analiza stolice na disbakteriozu. Uobičajeno, svi predstavnici koji žive u crijevima podijeljeni su u tri skupine: patogene, oportunističke i nepatogene. Sukladno tome, analiza se sastoji od tri dijela. Svaka skupina mikroorganizama ima svoje potrebe za izvorom hrane, energijom. Svaka skupina zahtijeva zasebne hranjive podloge i selektivne dodatke.

Prvo se provodi mikroskopija i primarna zasijavanje. Nakon zasijavanja odabiru se najveće kolonije, slične morfološkim značajkama predstavnicima svake skupine. Prebacuju se u selektivne podloge. Nakon što mikroorganizmi narastu, identificiraju se i odmah testiraju na osjetljivost na antibiotike. Koriste se standardne mikrobiološke metode.

Proučavanje skupine patogenih mikroorganizama, uz standardne studije, uključuje određivanje tifusnih, paratifusnih i dizenterijskih bakterija. Također se utvrđuje je li osoba nositelj ovih mikroorganizama. Sveobuhvatna studija za disbakteriozu također uključuje proučavanje predstavnika skupine bifidobakterija i laktobacila. Studija traje oko tjedan dana i ovisi o brzini rasta mikroorganizama.

[ 25 ], [ 26 ], [ 27 ], [ 28 ], [ 29 ]

Testiranje osjetljivosti bakteriofaga

U slučaju crijevne infekcije, bakteriofagi se često koriste za liječenje umjesto antibiotika. Bakteriofagi su bakterijski virusi koji su osjetljivi samo na njih. Oni pronalaze bakteriju s kojom su komplementarni, prodiru u nju i postupno uništavaju bakterijsku stanicu. Kao rezultat toga, infektivni proces se zaustavlja. Ali nisu sve bakterije osjetljive na bakteriofage. Kako bi se provjerilo hoće li određeni bakteriofag pokazati aktivnost prema predstavnicima mikroflore, mora se provesti analiza.

Materijal za istraživanje je feces. Analiza se mora dostaviti u laboratorij unutar sat vremena, inače je neće biti moguće provesti. Analizu je potrebno provesti u nekoliko ponavljanja. Početna metoda je slična onoj za određivanje osjetljivosti na antibiotike. Prvo se provodi preliminarna mikroskopija uzorka, zatim primarna sjetva na univerzalne hranjive podloge. Nakon toga se čista kultura izolira na selektivnim hranjivim podlogama.

Glavni rad se obavlja s čistom kulturom. Tretiraju se različitim vrstama bakteriofaga. Ako se kolonija otopi (lizira), to ukazuje na visoku aktivnost bakteriofaga. Ako je liza djelomična, bakteriofag funkcionira umjereno. U nedostatku lize, možemo govoriti o otpornosti na bakteriofag.

Prednost fagoterapije je u tome što bakteriofagi ne utječu na ljudski organizam i ne uzrokuju nuspojave. Vežu se za određene vrste bakterija i liziraju ih. Nedostatak je što su vrlo specifični i imaju selektivan učinak te se ne mogu uvijek vezati za bakterije.

[ 30 ], [ 31 ], [ 32 ], [ 33 ], [ 34 ], [ 35 ], [ 36 ], [ 37 ], [ 38 ]

Analiza sputuma za određivanje osjetljivosti na antibiotike

Analiza je proučavanje iscjetka iz donjih dišnih putova. Cilj je utvrditi vrstu mikroorganizama koji djeluju kao uzročnik bolesti. Također se provodi antibiogram. U ovom slučaju određuje se osjetljivost patogena na antibiotike i odabire optimalna koncentracija. Koristi se kod bolesti dišnih putova.

Pregled sputuma i ostalog sadržaja pluća i bronha neophodan je za odabir režima liječenja i za razlikovanje različitih dijagnoza. Koristi se za potvrdu ili opovrgavanje prisutnosti tuberkuloze.

Prvo je potrebno uzeti biološki materijal. Može se dobiti kašljanjem, iskašljavanjem ili uzimanjem iz dušnika tijekom bronhoskopije. Postoje posebni aerosoli koji potiču iskašljavanje. Prije uzimanja iskašljavanja, usta treba isprati vodom, što će smanjiti stupanj bakterijske kontaminacije usne šupljine. Prvo se preporučuje 3 duboka udaha i produktivni kašalj. Iskašljaj se može uzeti i aspiracijom iz dušnika. U tom slučaju se u dušnik uvodi poseban kateter. Tijekom bronhoskopije, bronhoskop se uvodi u bronhijalnu šupljinu. U tom slučaju, sluznica se podmazuje anestetikom.

Materijal se zatim šalje u laboratorij na ispitivanje. Provodi se standardni sijanje i mikroskopija. Nakon toga se izolira čista kultura i s njom se provode daljnje manipulacije. Izrađuje se antibiogram koji omogućuje identifikaciju spektra osjetljivosti bakterija i odabir optimalne doze.

Ako se sumnja na tuberkulozu, jutarnji sputum se pregledava tri dana. Prilikom testiranja na tuberkulozu, rezultat će biti gotov za 3-4 tjedna. Budući da Mycobacterium tuberculosis, koji je uzročnik bolesti, raste vrlo sporo.

Normalno, trebalo bi otkriti predstavnike normalne mikroflore dišnog trakta. Također je potrebno uzeti u obzir da se kod smanjenog imuniteta pokazatelji normalne mikroflore mogu razlikovati.

Analiza sperme za osjetljivost na antibiotike

To je bakteriološka studija ejakulata sperme s naknadnim odabirom osjetljivih antibiotika i njihovih koncentracija. Najčešće se provodi u liječenju neplodnosti i drugih bolesti muškog reproduktivnog sustava. U slučaju da je bolest popraćena infektivnim procesom. Glavni uzrok muške neplodnosti u većini slučajeva je infekcija. Obično se prvo provodi spermogram. Na temelju rezultata utvrđuje se sposobnost oplodnje spermija. Ako se u ovoj analizi pronađe veliki broj leukocita, možemo govoriti o upalnom procesu. U tom slučaju obično se odmah propisuje mikrobiološka analiza, budući da je upala gotovo uvijek popraćena infekcijom. Na temelju dobivenih rezultata odabire se odgovarajuća terapija. Studiju obično propisuje androlog.

Prostatitis i spolne bolesti također su razlozi za provođenje analize. Također se propisuje ako se kod partnera otkrije spolna bolest.

Osnova ispravne analize je, prije svega, pravilno prikupljanje biološkog materijala. Materijal se prikuplja u posebnim posudama sa širokim grlom. Temperatura skladištenja treba odgovarati temperaturi ljudskog tijela. U tom slučaju, materijal se može čuvati najviše sat vremena. U smrznutom obliku može se čuvati najviše jedan dan. Nije prikladno uzimati kulturu tijekom uzimanja antibiotika, to mijenja kliničku sliku. Obično se kultura uzima prije početka antibiotske terapije. Ili prestanite uzimati lijekove 2-3 dana prije analize.

Zatim se sije na hranjivi medij. Inkubira se u termostatu 1-2 dana. Nakon toga se izolira čista kultura, zatim se provodi identifikacija, određuje se osjetljivost, kao i vrsta i brzina rasta svake kolonije. Osjetljivost na antibiotike određuje se ako se otkriju patogeni mikroorganizmi. U prosjeku, analiza traje 5-7 dana.

[ 39 ], [ 40 ], [ 41 ], [ 42 ], [ 43 ]

Test osjetljivosti na gluten

Postoje mnogi testovi koji se mogu koristiti za određivanje imunološke osjetljivosti na različite tvari ili patogene. Prije je glavna metoda bila provođenje testova temeljenih na reakciji aglutinacije antitijela i antigena. Danas se ovi testovi koriste sve rjeđe, budući da je njihova osjetljivost znatno niža od mnogih modernih metoda, poput testova na gluten. Najčešće se u praksi pribjegava testu sline na gluten i analizi stolice.

Test osjetljivosti na gluten koristi se za dijagnosticiranje raznih crijevnih poremećaja. Temelji se na reakciji imunološkog sustava. Ako se gluten doda u stolicu, reakcija se javlja ili izostaje. To se smatra lažno pozitivnim ili lažno negativnim rezultatom. Pozitivan rezultat ukazuje na predispoziciju za kolitis, veliku vjerojatnost njegovog razvoja. Također potvrđuje celijakiju.

Također je moguće provesti test na gluten koristeći slinu kao biološki materijal. Moguće je izmjeriti količinu antitijela na gliadin. Pozitivan rezultat ukazuje na osjetljivost na gluten. To može ukazivati na veliku vjerojatnost dijabetesa. Ako su oba testa pozitivna, može se potvrditi dijabetes ili celijakija.

[ 44 ], [ 45 ]

Test osjetljivosti klamidije na antibiotike

Analiza se provodi u liječenju zaraznih i upalnih bolesti urogenitalnog trakta, ako se sumnja na klamidiju. Materijal za istraživanje je struganje s vaginalne sluznice - kod žena, bris iz uretre - kod muškaraca. Prikupljanje se provodi u prostoriji za postupke pomoću jednokratne opreme. Važno je održavati sterilnost. Prije prikupljanja materijala, treba se suzdržati od intimnosti 1-2 dana prije početka istraživanja. Ako žena ima menstruaciju, materijal se prikuplja 3 dana nakon njezina potpunog završetka.

Materijal se dostavlja u laboratorij. Potpuna analiza uključuje prethodnu mikroskopiju razmaza. To omogućuje vizualno određivanje mikroflore morfološkim značajkama i pravilan odabir hranjivih medija. Sadržaj sluzi, gnoja i epitelnih čestica može izravno ili neizravno ukazivati na razvoj upalnog procesa ili maligne degeneracije stanica.

Zatim se provodi primarna sjetva. Kultura se inkubira nekoliko dana u termostatu, a identifikacija se provodi na temelju kulturnih karakteristika. Nakon toga, kultura se prenosi na selektivne hranjive podloge namijenjene uzgoju klamidije. Dobivene kolonije identificiraju se biokemijskim testovima. Nakon toga se standardnim metodama određuje osjetljivost na antibiotike. Odabire se najosjetljiviji antibiotik i njegova koncentracija. Za uzgoj klamidije potrebni su posebni mediji razvijeni posebno za ovu vrstu mikroorganizma, koji sadrže sve potrebne tvari i faktore rasta.

Također je moguće provesti studiju biološkom metodom. Za to se štakori zaraze patogenom. U nekim laboratorijima umjesto štakora koristi se posebno uzgojena kultura tkiva. To je zbog činjenice da su klamidije unutarstanični paraziti te su za njihov uzgoj potrebni posebni uvjeti. Zatim se mikroorganizmi određuju PCR metodom. Za određivanje osjetljivosti, transplantiraju se na selektivni hranjivi medij za klamidiju, a nakon nekoliko dana bilježe se rezultati. Otpornost ili osjetljivost procjenjuje se supresijom zaraznog procesa u stanicama.

[ 46 ], [ 47 ], [ 48 ], [ 49 ], [ 50 ], [ 51 ], [ 52 ], [ 53 ]

Koliko dugo traje test osjetljivosti na antibiotike?

U prosjeku se analiza radi unutar 5-7 dana. Neke analize traju dulje. Na primjer, prilikom dijagnosticiranja tuberkuloze, na rezultate se mora čekati od 3 tjedna do mjesec dana. Sve ovisi o brzini rasta mikroorganizama. Često se laboratorijsko osoblje mora nositi sa slučajevima kada pacijenti traže da se analiza napravi brže. Čak nude i "dodatnu uplatu" za hitnost. Međutim, ovdje morate shvatiti da u ovom slučaju ništa ne ovisi o postupcima laboratorijskog asistenta. Ovisi samo o tome koliko brzo mikroorganizam raste. Svaka vrsta ima svoju, strogo definiranu brzinu rasta.

Uobičajena izvedba

Ne postoje apsolutne univerzalne normativne vrijednosti za sve analize. Prvo, te se vrijednosti mogu razlikovati za svaki biotop. Drugo, one su individualne za svaki mikroorganizam. To jest, normativne vrijednosti za isti mikroorganizam, recimo, za grlo i crijeva, su različite. Dakle, ako stafilokok prevladava u grlu kao predstavnik normalne mikroflore, tada u crijevima prevladavaju E. coli, bifido- i laktobakterije. Vrijednosti za isti mikroorganizam u različitim biotopima također se mogu značajno razlikovati. Na primjer, Candida može normalno biti prisutna u određenoj količini u urogenitalnoj mikroflori. Normalno nisu prisutne u usnoj šupljini. Prisutnost Candide u usnoj šupljini može ukazivati na njihovo umjetno unošenje iz njihovog prirodnog staništa.

Urin, krv, cerebrospinalna tekućina su biološke sredine koje bi normalno trebale biti sterilne, tj. ne bi trebale sadržavati nikakvu mikrofloru. Prisutnost mikroflore u tim tekućinama ukazuje na snažan upalni, infektivni proces, a također ukazuje na rizik od razvoja bakterijemije i sepse.

Općenito, postoji približna klasifikacija. Jedinica mjere u mikrobiologiji je CFU/ml, odnosno broj jedinica koje stvaraju kolonije u 1 mililitru biološke tekućine. Stupanj kontaminacije određen je brojem CFU i varira u širokom rasponu od 101 ^do 109. ^Sukladno tome, ¹⁰¹ je minimalni broj mikroorganizama, ¹⁰⁹ je teški stupanj infekcije. Istodobno, raspon do 103 ^smatra se normalnim, svi pokazatelji iznad ovog broja ukazuju na patološku reprodukciju bakterija.

Što se tiče osjetljivosti na antibiotike, svi mikroorganizmi se dijele na rezistentne, umjereno osjetljive i osjetljive. Taj se rezultat često izražava kao kvalitativna karakteristika koja označava MID - minimalnu inhibitornu dozu antibiotika koja još uvijek inhibira rast mikroorganizma. Za svaku osobu, kao i za svaki mikroorganizam, ovi su pokazatelji strogo individualni.

[ 54 ], [ 55 ], [ 56 ], [ 57 ]

Uređaj za analizu

Prilikom provođenja bakterioloških studija, posebno kod određivanja osjetljivosti na antibiotike, jedan uređaj neće biti dovoljan. Potrebna je potpuna, sveobuhvatna oprema bakteriološkog laboratorija. Potrebno je pažljivo planirati i odabrati opremu koja će odgovarati svakoj fazi istraživanja. U fazi prikupljanja biološkog materijala potrebni su sterilni instrumenti, kutije, spremnike, komore za skladištenje i transportna oprema za dostavu materijala u laboratorij.

U laboratoriju će vam, prije svega, trebati visokokvalitetni mikroskop za mikroskopiju razmaza. Danas postoji veliki broj mikroskopa koji imaju različita svojstva - od tradicionalnih svjetlosnih do fazno-kontrastnih i atomskih silnih mikroskopa. Moderna oprema omogućuje skeniranje slike u trodimenzionalnom prostoru i njezino ispitivanje pri velikom povećanju s visokom točnošću.

U fazi sjetve i inkubacije mikroorganizama mogu biti potrebni autoklavi, suhotoplinski ormari, eksikatori, parne kupelji i centrifuga. Potreban je termostat u kojem se odvija glavna inkubacija biološkog materijala.

U fazi identifikacije mikroorganizama i provođenja antibiograma, mikromanipulatori, maseni spektrometri, spektrofotometri, kolorimetri mogu biti potrebni za različite izračune i procjenu biokemijskih svojstava kultura.

Osim toga, moderni laboratoriji mogu biti opremljeni visokotehnološkom opremom koja izvodi sve gore navedene glavne faze istraživanja, sve do izračuna rezultata u automatskom načinu rada. Takvi uređaji uključuju, na primjer, složeni uređaj bakteriološkog laboratorija temeljen na masenom spektrometru s vremenom leta. Ova linija uređaja omogućuje podjelu cijelog područja laboratorija u tri zone. Prva zona je prljava, gdje se primaju i registriraju testovi. Druga zona je radna zona, gdje se zapravo provode glavna mikrobiološka istraživanja. A treća zona je sterilizacija i autoklav, gdje se provodi priprema i zbrinjavanje radnog materijala.

Modeli omogućuju inkubaciju u širokom rasponu temperatura i uvjeta. Sadrži ugrađeni analizator krvi i drugih bioloških uzoraka, koji daje rezultate s visokom točnošću i pouzdanošću. Komplet uključuje elektroničke vage, bidestilatore, centrifuge, autoklave i ormare za sterilizaciju, automatsko kuhalo medija, vodenu kupelj s ugrađenom miješalicom, pH metre, termometre i mikroskope.

Također se koristi mikrobiološki analizator u koji se stavljaju uzorci koji se testiraju, hranjive podloge i setovi testova za određivanje osjetljivosti. Uređaj provodi potrebna istraživanja i izdaje gotov zaključak.

Podizanje i spuštanje vrijednosti

Samo liječnik može dešifrirati analizu. No, često pacijenti, nakon što dobiju rezultate, paničare, primjećujući veliki broj nerazumljivih simbola i brojeva. Kako se ne biste izgubili, preporučljivo je imati barem opću predodžbu o tome kako dešifrirati analizu osjetljivosti na antibiotike. Obično prva stavka u rezultatima označava naziv mikroorganizma koji je uzročnik bolesti. Naziv je naveden na latinskom. Također može označavati predstavnika normalne mikroflore koja prevladava u tijelu, tako da nema potrebe za panikom. Druga stavka označava stupanj zasijanosti, odnosno broj mikroorganizama. Obično se taj broj kreće od 101 ^do 109. ^Treća stavka označava oblik patogenosti, a četvrta - nazive antibakterijskih lijekova na koje je taj mikroorganizam osjetljiv. U blizini je naznačena minimalna inhibitorna koncentracija pri kojoj je rast mikroorganizma potisnut.

[ 58 ], [ 59 ], [ 60 ], [ 61 ], [ 62 ], [ 63 ]