Dijagnoza herpesa

Dijagnoza herpes temelji se na ponašanje klasične virusnih prolijevanja u osjetljivim kulturama stanica, imunofluorescencije i serološkim metodama, obavljanje koloskposka studija uz pomoć suvremenih molekularno-biološke metode (PCR, dot-hibridizacija), koji vam omogućuje da dijagnosticirati sve herpesvirus skupinu, uključujući HHV-6 i HHV-7 vrste.

Metode laboratorijske dijagnoze herpesne infekcije

Glavne metode usmjerene na izlučivanje HSV ili otkrivanje virusnih čestica i / ili njihovih komponenti	Pomoćne metode usmjerene na otkrivanje protutijela na HSV u biološkim tekućinama ljudskog tijela
Izolacija HSV u osjetljivim kulturama stanica i životinja Izravna i imunoselektronska mikroskopija Izravne i neizravne opcije MVP-a IFA Molekularne biološke metode Reakcija lateks aglutinacije	Reakcija neutralizacije RSK Određivanje antitijela na ne-strukturne proteine HSV-1,2

Pokazano je da 76% pacijenata ima genitalni herpes (GH) uzrokovan HSV-2 i 24% - tip HSV-1. A GG kao monoinfekcija pojavila se samo u 22% bolesnika, u 78% slučajeva otkriveno je mikrobne veze. U 46% bolesnika otkriveno je parazitocenoza uzrokovana s dva patogena, uključujući klamidiju u 40% slučajeva. Rjeđe u smearima određenim gardnerly, Trichomonas, gonococci.

U 27% pacijenata, parasitocenoza je bila zastupljena s tri, a 5,2% po četiri patogena. Često je bilo kombinacije klamidije s Gardnerella i Candida gljivama. Ovi podaci opravdavaju potrebu za temeljitom bakteriološko ispitivanje pacijenata YY se utvrdili patogenih kombinacije sredstvo, kao i in-dubina istraživanja patogeneze mješovitih infekcija urogenitalnog trakta, koje će omogućiti za diferenciranom složene terapije HSV infekcije.

Materijali koji se trebaju proučavati u izolaciji HSV, ovisno o lokalizaciji herpesnih lezija

Lokalizacija lezija	Sadržaj vezikula	Struganje stanica				SMƵ	Udahnite od bronha	Bioptatu	Krv
		1	2	3	4
Koža	+								+
Oči			+						+
Spolni organ				+					+
čmar	+				+				+
Usta	+	+							+
CNS	+					+		+	+
Pluća		+					+		+
Jetra								+	+
Kongenitalni herpes	+	+	+				+		+

Metode laboratorijske dijagnostike infekcije citomegalovirusom

Metode	Vrijeme potrebno za dobivanje rezultata	Bilješke
Virološki
Elektronska mikroskopija	3 sata	Malodostupen
Izolacija virusa u kulturi stanica (CPD)	4-20 dana	Standardno, Sporo
Imunofluorescentno bojenje ranog AH s monoklonskim protutijelima	6 sati	Manje specifična
TSITOLOGICHESKIY	2-3 sata	Manje specifična
SEROLOGICHESKIY
RSK	2 dana	Standard
Ssubsistence	1 dan	Dugotrajan
RIF	6 sati	Jednostavan, specifičan
NRIF	6 sati	Kompleks
RIMF	6 sati	Kompleks
IFA (IgM, TO)	6 sati	Brzo, jednostavno
Imunoblot	6 sati	Skup
Molekularnobioloških
MG	5-7 dana	Skupa, dugotrajan
PCR	3 sata	Skup

Metode za dijagnozu herpes zoster virusa

Dijagnostičke metode	Laboratorijske tehnike
INDIREKTNO
Namjena	Kultura tkanine, piletina, laboratorijske životinje, ko-kultivacija s permisivnim stanicama ili helper virusi
Identifikacija izolata	Reakcija neutralizacije, DSC, IF, IPPE, reakcija izolata taloga, aglutinacija, IF
STRAIGHT
Citologija	Suhe: imunofluorescencija u boji
Histologija	Pathomorphology of the cell
Struktura	Embrionska mikroskopija, imunoelektronska mikroskopija
Određivanje antigena	IF, PIÉF, RIM, IFA
Određivanje lokalne proizvodnje antitijela	IgM, IgG, IgA: IFA, RIA
Molekularni biološki pristupi	Molekularna hibridizacija, PCR

Laboratorijska dijagnoza infekcije uzrokovanih virusom herpes zoster

Dijagnostički problemi	Metode	Očekivani rezultati
Akutna primarna infekcija	1	Otkrivanje nakon 2 sata
	2	Razina protutijela polako raste
	3	Prisutni 3 dana nakon infekcije
Akutna reaktivirana infekcija	1	Otkrivanje ULV u 2 sata
	2	Razina protutijela polako raste
	4	Prisutni 4 dana nakon pojave osipa

1. određivanje u tekućini vezikula WIEF-a;
2. serologija: DSC, ELISA, s ciljem identifikacije
3. serologija: ELISA, usmjerena na otkrivanje IgM;
4. serologija: ELISA, usmjerena na otkrivanje IgA, IgM.

Metode indikacije imunološkog odgovora infekcije uzrokovane virusom herpes zoster

Pristup	Način
Otkrivanje povećanog titra protutijela u drugom serumu	RSK, RTGA, RPGA, reakcija neutralizacije IF, RIM, ELISA
Otkrivanje IgG, IgA klasa specifičnih antitijela u prvom uzorku seruma	IFA, IF, RIM, lateks-aglutinacija

Tumačenje rezultata seroloških ispitivanja bolesnika sera na infekcije herpesvirusa (ELISA)

Naziv infekcije / marker	Prosječni pragovi za infekcije
	Rezultati analize	Interpretacija
Cytomegaly Anti-CMV IgG (1-20 E / ml) Anti-CMV IgM (100-300%)	Pozitivno 1-6 Pozitivno 6-10 Pozitivno> 10 Negativno pozitivno 100-300 Negativno <90 Sumnjivo 90-100	Remisija Pogoršanje bolesti Akutna faza bolesti Bez infekcije (bolest) Akutna faza bolesti Ponovite analizu nakon 2-3 tjedna
Herpes simple 1,2 serotipovi Anti-HSV 1/2 ukupno. (100-900%)	Pozitivan 100-400 Pozitivan 400-800 Pozitivan> 800 Negativan <100	Remisija Pogoršanje bolesti Akutna faza bolesti Bez infekcije (bolesti)

Tablica prikazuje glavne metode laboratorijske dijagnostike infekcija herpes virusom, kao i preporučene biološke materijale koji se istražuju za izolaciju HSV, uzimajući u obzir lokalizaciju herpesnih lezija

Pouzdan je dodjeljivanje herpes simplex i CMV kroz infekciju osjetljivih stanica. Tako je u virološkom pregledu 26 pacijenata u razdoblju relapsa HSV izoliran na osjetljivoj Vero staničnoj kulturi u 23 slučaja (88,4%). U zaraženim kulturama zabilježen je uzorak citopatskog djelovanja karakterističan za HSV - stvaranje multinukleiranih divovskih stanica ili nakupljanje zaobljenih i povećanih stanica u obliku grozdova. U 52,1% slučajeva bilo je moguće otkriti žarište citopatskog učinka virusa za 16-24 sata nakon infekcije. Za 48-72 sata inkubacije zaraženih kultura, postotak materijala koji uzrokuje specifičnu razgradnju stanica povećao se na 87%. I samo u 13% slučajeva, pozitivni rezultati su otkriveni 96 sati nakon infekcije i više ili ponovljenom prolasku.

Metode laboratorijske dijagnoze generalizirane herpetičke infekcije

Glavne metode usmjerene na otkrivanje (izoliranje) herpes virusa, njihovih čestica i njihovih komponenti	Pomoćne metode usmjerene na otkrivanje protutijela herpes virusa u biološkim tekućinama, otkrivanje enzimskih pomaka u krvnom serumu
Izolacija virusa Herpes na stanične kulture i životinjskih Izravna i imunološki elektronske mikroskopije postupkom Izravno i neizravno imunoperoksidaznog izvedbama izravne i neizravne mogućnosti fluorescentna antitijela tehnika mogućnosti ELISA ostvarenjima molekularne DNK (DNA) hibridizira lančanom reakcijom polimeraze reakcija lateks aglutinacije	Neutralizacije reakcijska fiksacije komplementa Reakcijska lateks aglutinacija Indirektna fluorescentnog protutijela realizacija postupak Indirektna metoda imunoperoksidaznog varijanta Ostvarenja ELISA Postupak imunološki upijanjem radijalnog fiksacija komplementa Metodom Određivanje razine alanin i aspartat

Za dijagnosticiranje infektivne mononukleoze (infekcije uzrokovane VEB) koriste se serološke metode. Reakcijska Paul-Bunnelya s eritrocitima ovce, titar 1:28, dijagnostičku i gore za jednu studija seruma, ili 4-struko povećanje antitijela kada ispitivanje uparene seruma. Koristite Goff-Bauerovu reakciju sa suspenzijom 4% formaliziranih crvenih krvnih stanica konja. Rezultat se uzima u obzir nakon 2 minute, s infektivnom mononukleozom reakcija je vrlo specifična.

Trenutno se razvija enzimski imunotest (ELISA) za dijagnosticiranje infektivne mononukleoze. U ovom slučaju, protutijela IgG i IgM u serumu bolesnika određena su inkubiranjem s limfoblastima inficiranim s EBV, nakon čega slijedi tretman s fluorescentnim protutijelima. U akutnom razdoblju bolesti, antitijela virusnog kapsidnog antigena određena su titrom od 1: 160 i više.

Kada se koristi određen broj uvezene komercijalnih sustava za ispitivanje u IFA može identificirati: antitijela na mrava Egan EBV ovojnice antitijela ranom antigen EBV, ukupnog antitijela na ranoj antigena EBV, određena u akutnoj fazi bolesti i u jezgri i u citoplazmi, i ograničenog antitijela EBV ranije, određen u akutnoj fazi bolesti i u jezgri i u citoplazmi stanica, omeđen protutijela na EBV rane antigen, određena usred bolesti tek u citoplazmi stanica i antitijela EBV nuklearni antigen. Korištenje tih testnih sustava omogućava diferencijalnu dijagnozu brojnih bolesti povezanih s EBV-om.

Nakon pozitivnog ELISA za identifikaciju antitijela EBV daju imunoblot potvrđuje odgovor koji detektiraju prisutnost antitijela za odvajanje marker EBV proteina (p-proteini): P23, 54, P72 (prisutnost proteina ukazuje na mogućnost reprodukcije EBV), str 138. Said gore navedene laboratorijske metode se koriste za kontrolu učinkovitosti liječenja.

Osjetljivost viroloških metoda je 85-100%, specifičnost je 100%, vrijeme proučavanja je 2-5 dana. Često se u praksi koristi metoda izravne imunofluorescencije (PIF) s poliklonskim ili monoklonskim protutijelima protiv HSV-1 i HSV-2. UIF metoda se lako može reproducirati u konvencionalnom kliničkom laboratoriju, nije skupo, osjetljivost je iznad 80%, specifičnost je 90-95%. Do imunoflorescentnom mikroskopom otkriva prisutnost citoplazmatske inkluzije, morfološkim značajkama, postotak inficiranih stanica u razmazima, ogrebotina uretre, cervikalni kanal, grlića maternice, rektuma.

UIF metoda daje ideju o morfološkim svojstvima stanica i promjenama u lokalizaciji HSV antigena. Pored izravnih znakova oštećenja stanica herpes virusima (detekcija specifične luminescencije), postoje indirektni znakovi herpetičke infekcije prema UIF podatcima:

• agregacija nuklearne tvari, piling ponašanja karyoolma;
• prisutnost tzv. Jezgre "rupa", kada samo jedna kariolema ostaje iz jezgre stanice;
• prisutnost intranuklearnih inkluzija - Caudryjev tele.

Prilikom podešavanja UIF liječnika prima ne samo kvalitetu, već i kvantitativnu procjenu zaraženih stanica koje se koriste za procjenu učinkovitosti antivirusnu terapiju s aciklovir (AC). Dakle, 80 bolesnika s jednostavnim genitalnim herpesom (GG) ispitano je UIF metodom u dinamici. Pokazano je da, ako se prije liječenja s aciklovir u razmazima 88% bolesnika ima visok postotak zaraženih stanica (50-75% i više), nakon jednog tijeku aciklovir u razmazima 44% pacijenata sa zdravim stanicama otkrivena u 31% slučajeva su označene pojedine zaražene stanice i 25% pacijenata imalo je do 10% zaraženih stanica.

Sadržaj zaraženih stanica u razmazima (PIF reakcija) bolesnika s genitalnim herpesom, tretiran aciklovirom

Razdoblja bolesti	Postotak u razmazima
	Zaražene stanice					Normalne stanice
	Više od 75%	50-75%	40-50%	10%	Pojedinačne stanice u n / sp
Relapsa (prije liječenja)	25%	63%	12%
	(20)	(50)	(10)
Remisija (nakon tretmana)				25%	31%	44%
				(20)	(25)	(35)

Koristeći mnogo godina UIF-a i metodu dot-hibridizacije, skoro 100% slučajeva podudara se s rezultatima studije. Treba napomenuti da je u cilju povećanja pouzdanosti dijagnoze GH, naročito u slučajevima kada postoji subkliničku i malomanifestnyh oblika herpes, preporuča se koristiti 2-3 metode laboratorijske dijagnostike, posebno kada ispituje trudnice, žene s ginekološkoj povijesti nepovoljnom položaju, osobe s neodređenom ginekološki dijagnoze.

Dakle, za PCR dijagnostiku virusnih i bakterijskih infekcija urogenitalnog trakta, potrebno je procijeniti pozitivne rezultate dobivene s poviješću, prisutnost (ili odsutnost) specifičnih kliničkih simptoma. Ako se klamidija detektira s PCR, tada se u tom slučaju može govoriti o infekciji i sukladno tome riješiti probleme terapije. U slučaju otkrivanja mikoplazme (ureaplasmas) su oportunističkih patogena, što potvrđuje da je dijagnoza je potrebno provesti daljnje studije kulture, t, E. Crop materijal osjetljiv pacijent staničnim kulturama. Tek kada se dobiju pozitivni rezultati u analizi kulture, možemo govoriti o laboratorijskoj potvrdi dijagnoze mikoplazmoze. Ista metoda omogućit će, ako je potrebno, određivanje osjetljivosti izoliranih mikoplazama na često korištene medicinske oblike (antibiotici, fluorokinoloni itd.).

Možda jednostupanjska infekcija s nekoliko virusa obitelji Nepresviridae. Često smo otkrili infekciju jednog bolesnika s virusima HSV-1, HSV-2 i CMV. Mnogo češće zaraženi s nekoliko herpes virusa bili su pacijenti s kliničkim i laboratorijskim manifestacijama sekundarnih IDS (pacijenata s oncohematološkim, onkološkim, inficiranim HIV-om). Dakle, pokazalo se da klinički i imunološki poremećaji koji napreduju s HIV infekcijom prate povećanje broja herpesvirusa detektiranih molekularnom hibridizacijom. U ovom prognostički najznačajniju mogu se smatrati kompleksnim jednostupanjskim otkrivanjem DNK tipa HSV-1, CMV i HHV-6.

[1], [2], [3]