Hematopoetske matične stanice

Hematopoetske matične stanice (HSC), poput mezenhimalnih progenitorskih stanica, karakteriziraju se multipotentnošću i daju stanične linije čiji konačni elementi tvore formirane elemente krvi, kao i niz specijaliziranih tkivnih stanica imunološkog sustava.

Hipoteza o postojanju zajedničkog prekursora svih krvnih stanica, kao i sam pojam „matična stanica“, pripada A. Maksimovu (1909.). Potencijal za stvaranje stanične mase u HSC-u je ogroman - matične stanice koštane srži dnevno proizvode 10 stanica koje čine formirane elemente periferne krvi. Sama činjenica postojanja hematopoetskih matičnih stanica utvrđena je 1961. godine u eksperimentima na obnovi hematopoeze kod miševa koji su primili smrtonosnu dozu radioaktivnog zračenja koje uništava matične stanice koštane srži. Nakon transplantacije singenetskih stanica koštane srži takvim smrtonosno ozračenim životinjama, u slezeni primatelja pronađena su diskretna žarišta hematopoeze, čiji su izvor bile pojedinačne klonogene prekursorske stanice.

Tada je dokazana sposobnost hematopoetskih matičnih stanica za samoodržavanje, osiguravajući funkciju hematopoeze u procesu ontogeneze. U procesu embrionalnog razvoja, HSC-i se odlikuju visokom migracijskom aktivnošću, potrebnom za njihovo kretanje u zone formiranja hematopoetskih organa. Ovo svojstvo HSC-a sačuvano je i u ontogenezi - zbog njihove stalne migracije dolazi do trajne obnove fonda imunokompetentnih stanica. Sposobnost HSC-a da migriraju, prodiru kroz histohematske barijere, implantiraju se u tkiva i klonogeni rast poslužila je kao osnova za transplantaciju stanica koštane srži kod niza bolesti povezanih s patologijom hematopoetskog sustava.

Kao i svi resursi matičnih stanica, hematopoetske matične stanice prisutne su u svojoj niši (koštanoj srži) u vrlo malim količinama, što uzrokuje određene poteškoće u njihovoj izolaciji. Imunofenotipski, ljudske HSC-ove karakteriziraju se kao CD34+NK stanice sposobne za migraciju u krvotok i naseljavanje organa imunološkog sustava ili repopulaciju strome koštane srži. Treba jasno razumjeti da HSC-ovi nisu najnezrelije stanice koštane srži, već potječu od prekursora, koji uključuju uspavane CD34-negativne stanice slične fibroblastima. Utvrđeno je da stanice s CD34 fenotipom mogu ući u opći krvotok, gdje mijenjaju svoj fenotip u CD34+, ali nakon povratne migracije u koštanu srž, pod utjecajem mikrookruženja, ponovno postaju CD34-negativni elementi matičnih stanica. U stanju mirovanja, CD34~ stanice ne reagiraju na parakrine regulatorne signale strome (faktori rasta, citokini). Međutim, u situacijama koje zahtijevaju povećani intenzitet hematopoeze, matične stanice s fenotipom CD34 reagiraju na signale diferencijacije stvaranjem i hematopoetskih i mezenhimskih progenitorskih stanica. Hematopoeza se odvija izravnim kontaktom HSC-a sa staničnim elementima strome koštane srži, koju predstavlja složena mreža makrofaga, retikularnih endotelnih stanica, osteoblasta, stromalnih fibroblasta i izvanstaničnog matriksa. Stromalna osnova koštane srži nije samo matrica ili „skelet“ za hematopoetsko tkivo; ona provodi finu regulaciju hematopoeze zbog parakrinih regulatornih signala faktora rasta, citokina i kemokina, a također osigurava adhezivne interakcije potrebne za stvaranje krvnih stanica.

Dakle, stalno obnavljajući sustav hematopoeze temelji se na polipotentnoj (s gledišta hematopoeze) hematopoetskoj matičnoj stanici sposobnoj za dugotrajno samoodržavanje. U procesu predanosti, HSC-i prolaze primarnu diferencijaciju i tvore klonove stanica koje se razlikuju po citomorfološkim i imunofenotipskim karakteristikama. Sekvencijalno formiranje primitivnih i predanih progenitorskih stanica završava formiranjem morfološki prepoznatljivih progenitorskih stanica različitih hematopoetskih linija. Rezultat sljedećih faza složenog višestupanjskog procesa hematopoeze je sazrijevanje stanica i oslobađanje zrelih formiranih elemenata u perifernu krv - eritrocita, leukocita, limfocita i trombocita.

[ 1 ], [ 2 ], [ 3 ]

Izvori hematopoetskih matičnih stanica

Hematopoetske matične stanice smatraju se najproučavanijim izvorom matičnih stanica, što je uvelike posljedica njihove kliničke upotrebe u transplantaciji koštane srži. Na prvi pogled, o tim se stanicama zna dosta. Do određene mjere to je istina, budući da su intermedijarni i zreli potomci HSC-a najpristupačniji stanični elementi, od kojih je svaki (eritrociti, leukociti, limfociti, monociti/makrofagi i trombociti) pažljivo proučavan na svim razinama - od svjetlosne do elektronske mikroskopije, od biokemijskih i imunofenotipskih karakteristika do identifikacije PCR metodama analize. Međutim, praćenje morfoloških, ultrastrukturnih, biokemijskih, imunofenotipskih, biofizičkih i genomskih parametara HSC-a nije dalo odgovore na mnoga problematična pitanja, čije je rješavanje nužno za razvoj stanične transplantologije. Mehanizmi stabilizacije hematopoetskih matičnih stanica u stanju mirovanja, njihova aktivacija, ulazak u fazu simetrične ili asimetrične diobe, a najvažnije, posvećenost stvaranju tako funkcionalno različitih formiranih elemenata krvi kao što su eritrociti, leukociti, limfociti i trombociti, još nisu utvrđeni.

Prisutnost stanica s CD34 fenotipom u koštanoj srži, koje su preci i mezenhimalnih i hematopoetskih matičnih stanica, postavila je pitanje postojanja najranijih prekursora stanične diferencijacije u stromalne i hematopoetske loze, bliskih CD34-negativnim stanicama. Metodom dugotrajnog uzgoja dobivena je takozvana stanica koja inicira dugotrajnu kulturu (LTC-IC). Životni vijek takvih prekursorskih stanica s aktivnošću stvaranja kolonija na stromalnoj bazi koštane srži s određenom kombinacijom faktora rasta prelazi 5 tjedana, dok je održivost jedinica koje stvaraju kolonije (CFU) u kulturi samo 3 tjedna. Trenutno se LTC-IC smatra funkcionalnim analogom HSC-a, budući da s visokim potencijalom repopulacije, oko 20% LTC-IC karakterizira CD34+CD38- fenotip i pokazuje visoku sposobnost samoobnavljanja. Takve se stanice nalaze u ljudskoj koštanoj srži s učestalošću od 1:50 000. Međutim, stanice koje iniciraju mijeloidno-limfoidne stanice, a dobivene su pod dugotrajnim (15 tjedana) uvjetima uzgoja, trebale bi se prepoznati kao najbliže HSC-ima. Takve stanice, označene kao LTC, spadaju među stanice koštane srži ljudskog mozga, nalaze se 10 puta rjeđe od LTC-IC i tvore stanične linije i mijeloidne i limfoidne hematopoetske loze.

Iako je označavanje hematopoetskih matičnih stanica monoklonskim antitijelima nakon čega slijedi imunofenotipska identifikacija glavna metoda za prepoznavanje i selektivno sortiranje hematopoetskih stanica s matičnim potencijalom, klinička primjena tako izoliranih HSC-a je ograničena. Blokiranje CD34 receptora ili drugih marker antigena antitijelima tijekom imunopozitivnog sortiranja neizbježno mijenja svojstva stanice izolirane uz njegovu pomoć. Imunonegativna izolacija HSC-a na magnetskim kolonama smatra se poželjnijom. Međutim, u ovom slučaju se za sortiranje obično koriste monoklonska antitijela fiksirana na metalnom nosaču. Osim toga, što je važno, obje metode izolacije HSC-a temelje se na fenotipskim, a ne funkcionalnim karakteristikama. Stoga mnogi istraživači preferiraju analizu klonogenih parametara HSC-a, što omogućuje određivanje stupnja zrelosti i smjera diferencijacije progenitorskih stanica veličinom i sastavom kolonija. Poznato je da se tijekom procesa obvezivanja broj stanica i njihove vrste u koloniji smanjuje. Hematopoetska matična stanica i njezina rana stanica kćer, nazvana „jedinica za stvaranje kolonija granulocita-eritrocita-monocita-megakariocita“ (CFU-GEMM), stvaraju velike višelinijske kolonije u kulturi koje sadrže granulocite, eritrocite, monocite i megakariocite. Jedinica za stvaranje kolonija granulocita-monocita (CFU-GM), smještena nizvodno duž linije obveze, stvara kolonije granulocita i makrofaga, a jedinica za stvaranje kolonija granulocita (CFU-G) stvara samo malu koloniju zrelih granulocita. Rani prethodnik eritrocita, jedinica eritrocita koja stvara eksploziju (CFU-E), izvor je velikih kolonija eritrocita, a zrelija jedinica eritrocita koja stvara kolonije (CFU-E) izvor je malih kolonija eritrocita. Općenito, kada stanice rastu na polukrutim medijima, mogu se identificirati stanice koje tvore šest vrsta mijeloidnih kolonija: CFU-GEMM, CFU-GM, CFU-G, CFU-M, BFU-E i CFU-E).

Međutim, osim hematopoetskih derivata, svaki izvorni materijal za izolaciju HSC-a sadrži značajan broj pratećih stanica. U tom smislu, prethodno pročišćavanje transplantata potrebno je, prije svega, od aktivnih stanica imunološkog sustava donora. Obično se u tu svrhu koristi imunoselekcija, temeljena na ekspresiji specifičnih antigena limfocitima, što omogućuje njihovu izolaciju i uklanjanje pomoću monoklonskih antitijela. Osim toga, razvijena je imunorozetna metoda deplecije T-limfocita transplantata koštane srži, koja se temelji na stvaranju kompleksa CD4+ limfocita i specifičnih monoklonskih antitijela, učinkovito uklonjenih aferezom. Ova metoda osigurava proizvodnju pročišćenog staničnog materijala s 40-60% sadržaja hematopoetskih matičnih stanica.

Povećanje broja progenitorskih stanica zbog uklanjanja zrelih formiranih elemenata krvi iz produkta leukafereze postiže se protustrujnim centrifugiranjem nakon čega slijedi filtracija (u prisutnosti kelatora - trinatrijevog citrata) kroz kolone koje sadrže najlonska vlakna obložena ljudskim imunoglobulinom. Uzastopna primjena ove dvije metode osigurava potpuno pročišćavanje transplantata od trombocita, 89% od eritrocita i 91% od leukocita. Zbog značajnog smanjenja gubitka HSC-a, razina CD34+ stanica u ukupnoj staničnoj masi može se povećati na 50%.

Sposobnost izoliranih hematopoetskih matičnih stanica da formiraju kolonije zrelih krvnih stanica u kulturi koristi se za funkcionalnu karakterizaciju stanica. Analiza nastalih kolonija omogućuje identificiranje i kvantificiranje vrsta progenitornih stanica, stupnja njihove predanosti i utvrđivanje smjera njihove diferencijacije. Klonogena aktivnost određuje se u polukrutim medijima na metilcelulozi, agaru, plazmi ili fibrinskom gelu, koji smanjuju migracijsku aktivnost stanica, sprječavajući njihovo pričvršćivanje na površinu stakla ili plastike. U optimalnim uvjetima uzgoja, klonovi se razvijaju iz jedne stanice za 7-18 dana. Ako klon sadrži manje od 50 stanica, identificira se kao jedan skup; ako broj stanica prelazi 50, identificira se kao kolonija. Uzima se u obzir broj stanica sposobnih za formiranje kolonije (jedinice koje formiraju kolonije - CFU ili stanice koje formiraju kolonije - COC). Treba napomenuti da parametri CFU i COC ne odgovaraju broju HSC-a u staničnoj suspenziji, iako s njim koreliraju, što još jednom naglašava potrebu određivanja funkcionalne (kolonijetvorne) aktivnosti HSC-a in vitro.

Među stanicama koštane srži, hematopoetske matične stanice imaju najveći proliferativni potencijal, zbog čega tvore najveće kolonije u kulturi. Predlaže se da se broj takvih kolonija neizravno određuje kao broj matičnih stanica. Nakon stvaranja kolonija in vitro promjera većih od 0,5 mm i s brojem stanica većim od 1000, autori su testirali takve stanice na otpornost na subletalne doze 5-fluorouracila i proučavali njihovu sposobnost repopulacije koštane srži letalno ozračenih životinja. Prema navedenim parametrima, izolirane stanice bile su gotovo nerazlučive od HSC-a i dobile su kraticu HPP-CFC - stanice koje formiraju kolonije s visokim proliferativnim potencijalom.

Potraga za kvalitetnijom izolacijom hematopoetskih matičnih stanica se nastavlja. Međutim, hematopoetske matične stanice su morfološki slične limfocitima i predstavljaju relativno homogen skup stanica s gotovo okruglim jezgrama, fino dispergiranim kromatinom i malom količinom slabo bazofilne citoplazme. Njihov točan broj je također teško odrediti. Pretpostavlja se da se HSC u ljudskoj koštanoj srži javljaju s učestalošću od 1 na 106 stanica s jezgrom.

Identifikacija hematopoetskih matičnih stanica

Kako bi se poboljšala kvaliteta identifikacije hematopoetskih matičnih stanica, provodi se sekvencijalno ili simultano (na višekanalnom sorteru) proučavanje spektra membranski vezanih antigena, a u HSC-ima fenotip CD34+CD38 treba kombinirati s odsutnošću markera linearne diferencijacije, posebno antigena imunokompetentnih stanica, poput CD4, površinskih imunoglobulina i glikoforina.

Gotovo sve sheme fenotipizacije hematopoetskih matičnih stanica uključuju određivanje antigena CD34. Ovaj glikoprotein molekularne težine od oko 110 kDa, koji nosi nekoliko mjesta glikozilacije, eksprimira se na membrani plazma stanica nakon aktivacije odgovarajućeg gena lokaliziranog na kromosomu 1. Funkcija molekule CD34 povezana je s interakcijom ranih hematopoetskih progenitorskih stanica sa stromalnom bazom koštane srži posredovanom L-selektinom. Međutim, treba imati na umu da prisutnost antigena CD34 na površini stanice omogućuje samo preliminarnu procjenu sadržaja HSC u staničnoj suspenziji, budući da ga eksprimiraju i druge hematopoetske progenitorske stanice, kao i stromalne stanice koštane srži i endotelne stanice.

Tijekom diferencijacije hematopoetskih progenitorskih stanica, ekspresija CD34 je trajno smanjena. Eritrocitne, granulocitne i monocitne predane progenitorske stanice ili slabo eksprimiraju CD34 antigen ili ga uopće ne eksprimiraju na svojoj površini (CD34 fenotip). CD34 antigen se ne detektira na površinskoj membrani diferenciranih stanica koštane srži i zrelih krvnih stanica.

Treba napomenuti da se u dinamici diferencijacije hematopoetskih progenitorskih stanica ne smanjuje samo razina ekspresije CD34, već i progresivno raste ekspresija antigena CD38, integralnog membranskog glikoproteina molekularne težine 46 kDa, koji ima NAD-glikohidrolaznu i ADP-ribozil ciklaznu aktivnost, što sugerira njegovo sudjelovanje u transportu i sintezi ADP-riboze. Dakle, pojavljuje se mogućnost dvostruke kontrole stupnja angažmana hematopoetskih progenitorskih stanica. Populacija stanica s fenotipom CD34+CD38+, koja čini od 90 do 99% CD34-pozitivnih stanica koštane srži, sadrži progenitorske stanice s ograničenim proliferativnim i diferencijacijskim potencijalom, dok stanice s fenotipom CD34+CD38 mogu preuzeti ulogu HSC-a.

Doista, populacija stanica koštane srži opisana formulom CD34+CD38- sadrži relativno velik broj primitivnih matičnih stanica sposobnih za diferencijaciju u mijeloidnom i limfoidnom smjeru. U uvjetima dugotrajnog uzgoja stanica s fenotipom CD34+CD38- moguće je dobiti sve zrele formirane elemente krvi: neutrofile, eozinofile, bazofile, monocite, megakariocite, eritrocite i limfocite.

Relativno je nedavno utvrđeno da CD34-pozitivne stanice eksprimiraju još dva markera, AC133 i CD90 (Thy-1), koji se također koriste za identifikaciju hematopoetskih matičnih stanica. Thy-1 antigen se koeksprimira s CD117 receptorom (c-kit) na CD34+ stanicama koštane srži, pupkovine i periferne krvi. To je površinski glikoprotein koji veže fosfatidilinozitol s molekularnom težinom od 25-35 kDa, a sudjeluje u procesima stanične adhezije. Neki autori smatraju da je Thy-1 antigen marker najnezrelih CD34-pozitivnih stanica. Samoreproducirajuće stanice s CD34+Thy-1+ fenotipom daju dugoročno uzgojene linije s formiranjem stanica kćeri. Pretpostavlja se da Thy-1 antigen blokira regulatorne signale koji uzrokuju zaustavljanje diobe stanica. Unatoč činjenici da su CD34+Thy1+ stanice sposobne za samoreprodukciju i stvaranje dugotrajnih kultiviranih linija, njihov fenotip ne može se isključivo pripisati HSC-ima, budući da je sadržaj Thy-1+ u ukupnoj masi CD34-pozitivnih staničnih elemenata oko 50%, što značajno premašuje broj hematopoetskih stanica.

Obećavajući za identifikaciju hematopoetskih matičnih stanica trebao bi biti AC133 - antigenski marker hematopoetskih progenitorskih stanica, čija je ekspresija prvi put otkrivena na embrionalnim stanicama jetre. AC133 je transmembranski glikoprotein koji se pojavljuje na površini stanične membrane u najranijim fazama sazrijevanja HSC-a - moguće je da čak i ranije od antigena CD34. U studijama A. Petrenka, V. Grishčenka (2003.) utvrđeno je da AC133 eksprimira do 30% CD34-pozitivnih embrionalnih stanica jetre.

Dakle, idealni fenotipski profil hematopoetskih matičnih stanica, prema trenutnim konceptima, sastoji se od staničnog obrisa, čije konture bi trebale uključivati konfiguracije antigena CD34, AC133 i Thy-1, ali nema mjesta za molekularne projekcije CD38, HLA-DR i markere linearne diferencijacije GPA, CD3, CD4, CD8, CD10, CD14, CD16, CD19, CD20.

Varijacija fenotipskog portreta HSC-a može biti kombinacija CD34+CD45RalowCD71low, budući da se svojstva stanica opisana ovom formulom ne razlikuju od funkcionalnih parametara stanica s fenotipom CD34+CD38. Osim toga, ljudske HSC-e mogu se identificirati fenotipskim značajkama CD34+Thy-l+CD38Iow/'c-kit /low - samo 30 takvih stanica potpuno obnavlja hematopoezu u letalno ozračenim miševima.

Četrdesetogodišnje razdoblje intenzivnog istraživanja HSC-a, koji su sposobni i za samoreprodukciju i za diferencijaciju u druge stanične elemente, započelo je analizom općih fenotipskih karakteristika stanica koštane srži, što je omogućilo opravdanje upotrebe transplantacije koštane srži za liječenje različitih patologija hematopoetskog sustava. Nove vrste matičnih stanica otkrivene kasnije još nisu široko korištene u kliničkoj praksi. Istodobno, matične stanice pupkovine i embrionalne jetre sposobne su značajno proširiti opseg transplantacije stanica ne samo u hematologiji, već i u drugim područjima medicine, budući da se razlikuju od HSC-a koštane srži i po kvantitativnim i po kvalitativnim značajkama.

Volumen mase hematopoetskih matičnih stanica potreban za transplantaciju obično se dobiva iz koštane srži, periferne i pupkovine krvi te embrionalne jetre. Osim toga, hematopoetske progenitorske stanice mogu se dobiti in vitro umnožavanjem ESC-a s njihovom naknadnom usmjerenom diferencijacijom u hematopoetske stanične elemente. A. Petrenko, V. Grishchenko (2003.) s pravom primjećuju značajne razlike u imunološkim svojstvima i sposobnosti obnavljanja hematopoeze HSC-a različitog podrijetla, što je posljedica nejednakog omjera ranih pluripotentnih i kasno posvećenih progenitorskih stanica sadržanih u njihovim izvorima. Osim toga, hematopoetske matične stanice dobivene iz različitih matičnih izvora karakteriziraju kvantitativno i kvalitativno potpuno različite asocijacije nehematopoetskih stanica.

Koštana srž već je postala tradicionalni izvor hematopoetskih matičnih stanica. Suspenzija stanica koštane srži dobiva se iz iliuma ili sternuma ispiranjem pod lokalnom anestezijom. Suspenzija dobivena na ovaj način je heterogena i sadrži mješavinu HSC-a, elemenata stromalnih stanica, predanih progenitorskih stanica mijeloidnih i limfoidnih linija, kao i zrelih formiranih elemenata krvi. Broj stanica s fenotipovima CD34+ i CD34+CD38 među mononuklearnim stanicama koštane srži iznosi 0,5-3,6 odnosno 0-0,5%. Periferna krv nakon G-CSF-inducirane mobilizacije HSC-a sadrži 0,4-1,6% CD34+ i 0-0,4% CD34+CD38.

Postotak stanica s imunofenotipovima CD34+CD38 i CD34+ veći je u krvi pupkovine - 0-0,6 i 1-2,6%, a njihov maksimalni broj detektiran je među hematopoetskim stanicama embrionalne jetre - 0,2-12,5 i 2,3-35,8%.

Međutim, kvaliteta transplantiranog materijala ne ovisi samo o broju CD34+ stanica koje sadrži, već i o njihovoj funkcionalnoj aktivnosti, koja se može procijeniti razinom stvaranja kolonija in vivo (repopulacija koštane srži u letalno ozračenih životinja) i in vitro - rastom kolonija na polutekućim medijima. Pokazalo se da aktivnost stvaranja kolonija i proliferacije hematopoetskih progenitorskih stanica s CD34+CD38 HLA-DR fenotipom izoliranih iz embrionalne jetre, fetalne koštane srži i krvi pupkovine značajno premašuje proliferativni i kolonijetvorni potencijal hematopoetskih stanica koštane srži i periferne krvi odrasle osobe. Kvantitativna i kvalitativna analiza HSC-a različitog podrijetla otkrila je značajne razlike u njihovom relativnom sadržaju u staničnoj suspenziji i funkcionalnim sposobnostima. Maksimalan broj CD34+ stanica (24,6%) pronađen je u transplantiranom materijalu dobivenom iz fetalne koštane srži. Koštana srž odrasle osobe sadrži 2,1% CD34-pozitivnih staničnih elemenata. Među mononuklearnim stanicama periferne krvi odrasle osobe, samo 0,5% ima CD34+ fenotip, dok u krvi iz pupkovine njihov broj doseže 2%. Istovremeno, sposobnost stvaranja kolonija CD34+ stanica fetalne koštane srži je 2,7 puta veća od klonskog kapaciteta rasta hematopoetskih stanica koštane srži odrasle osobe, a stanice krvi iz pupkovine tvore znatno više kolonija od hematopoetskih elemenata izoliranih iz periferne krvi odraslih: 65,5 odnosno 40,8 kolonija/105 stanica.

Razlike u proliferativnoj aktivnosti i sposobnosti stvaranja kolonija hematopoetskih matičnih stanica povezane su ne samo s različitim stupnjevima njihove zrelosti, već i s njihovim prirodnim mikrookruženjem. Poznato je da su intenzitet proliferacije i brzina diferencijacije matičnih stanica određeni integralnim regulatornim učinkom višekomponentnog sustava faktora rasta i citokina koje proizvode i same matične stanice i stanični elementi njihovog matrično-stromalnog mikrookruženja. Korištenje pročišćenih staničnih populacija i medija bez seruma za uzgoj stanica omogućilo je karakterizaciju faktora rasta koji imaju stimulirajući i inhibitorni učinak na matične stanice različitih razina, progenitorske stanice i stanice usmjerene u jednom ili drugom linearnom smjeru. Rezultati studija uvjerljivo pokazuju da se HSC dobivene iz izvora s različitim razinama ontogenetskog razvoja razlikuju i fenotipski i funkcionalno. HSC u ranijim fazama ontogeneze karakteriziraju visoki potencijal samoreprodukcije i visoka proliferativna aktivnost. Takve stanice odlikuju se duljim telomerima i podliježu usmjerenosti na formiranje svih hematopoetskih staničnih linija. Odgovor imunološkog sustava na HSC-ove embrionalnog podrijetla je odgođen, budući da takve stanice slabo eksprimiraju HLA molekule. Postoji jasna gradacija relativnog sadržaja HSC-ova, njihovog kapaciteta samoobnavljanja i broja vrsta linija predanosti koje tvore: CD34+ stanice embrionalne jetre > CD34+ stanice pupkovine > CD34+ stanice koštane srži. Važno je da su takve razlike svojstvene ne samo intra-, neo- i ranom postnatalnom razdoblju ljudskog razvoja, već i cijeloj ontogenezi - proliferativna i kolonijetvorna aktivnost HSC-ova dobivenih iz koštane srži ili periferne krvi odrasle osobe obrnuto je proporcionalna dobi darivatelja.