Uzroci tuberkuloze

obitelj Mycobacteriaceae nalog Actinomycetales sadrži jedan rod Mycobacterium. В 1975 г. , ovaj rod sadrži oko 30 vrsta, a na 2000 г. broju već pristupio 100. Većina vrsta mikobakterija iz saprofitskih mikroorganizama, rasprostranjenih na okoliš.

Skupina obveznih parazita je beznačajna, međutim njegova je praktična značajka velika i određena je vrstama koje uzrokuju tuberkulozu kod ljudi i životinja. Postoji mišljenje da su predaka ljudskih patogenih mikobakterija bili antički mikobakteriji tla.

[1], [2], [3], [4],

Taksonomija mikobakterija

Svi mikobakterije podijeljeni su u patogene za ljude i uvjetno patogeni.

U kliničkoj mikrobiologiji koriste se nekoliko pristupa za klasifikaciju mikobakterija:

• brzine i optimalne temperature rasta, sposobnost stvaranja pigmenta;
• na klinički značajnim kompleksima.

Tipovi mikobakterija koji uzrokuju tuberkulozu se spajaju u kompleks M. Tuberculosis, uključujući M. Tuberculosis, M. Bovis. M. Bovis BCG, M. Africanum, M. Microti, M. Canettii. Nedavno mu je dodijeljen M. Pinnipedii, M. Sargae, filogenetski povezan s M. Microti i M. Bovis.

Ostatak mikobakterija koji uzrokuju razne mikobakterije klasificiraju se kao ne-tuberkulozni mikobakterije. Iz ove skupine razlikuju se sljedeći kompleksi: M. Avium, koji se sastoji od M. Avium, M. Intracellulare, M. Scrofulaceum; M.fortuitum uključujući podvrste M.fortuitum i M. Chelonae i M. Terrae, uključujući M. Terrae, M. Triviale i M. Nonchromogenicum. Najvažnije skupine su uzročnici M. Leprae lepre, kao i uzročnici ulcerativnih lezija Buruli M. Ulcerans.

Ova klasifikacija kombinira tipove mikobakterija s istim kliničkim značenjem, kada je njihova diferencijacija beznačajnija. Biološke, biokemijske i molekularne metode koriste se za identifikaciju vrsta unutar skupina i kompleksa.

Klasifikacija nontuberculous mikobakterija na temelju kulturnih razlika je razvio Runion u 1959. Prema njezinim riječima. Izolirano je 4 skupine mikobakterija.

Grupa I - fotokromogeni mikobakteri

Ova skupina uključuje mikobakterije koje nisu pigmentirane kada se uzgajaju na tami, ali nakon izlaganja svjetlu dobivaju svijetlo žuto ili žuto-narančaste pigmentacije. Potencijalno patogeni sojevi pripadaju ovoj skupini. - M. Asiaticum, M. Kansasii, M. Marinum, M. Simiae. Među mikobakterijama ove skupine postoje i brzorastuće (M. Marinum) i spor rastući (M. Asiaticum, M. Kansasii). Optimalna temperatura rasta je u rasponu od 25 ^do ° C, 32-33 M. Simiae ^o C, M. Marinum 37 do ^oko ° C M. Asiaticum.

Najveći klinički značaj u našoj zemlji je oblik M. Kansasii, koji se nalazi u vodenim tijelima. Soj M. Kansasii (M. Luciflavum) uzrokuje bolest kod ljudi. Jaja medij raste kao glatka ili hrapava kolonije 37 temperaturni optimum ^za S. Morfološki bakterija umjerene duljine. Do danas su opisane dvije varijante M. Kansasii: narančaste i bijele. Uvođenjem zamoraca M. Kansasii uzrokuju infiltracije i densifikacije regionalnih limfnih čvorova.

Skupina II - scotochromogenic mycobacteria (od grčke riječi scotos - tama)

U ovu skupinu uključuju mikobakterije, stvarajući pigment u mraku. Stopa rasta je 30-60 dana. Ova skupina uključuje M. Aquae (M. Gordonae) i M. Scrofulaceum.

M. Scrofulaceum se odnosi na potencijalno patogene vrste. Na mediju za jaje bakterije ove vrste rastu u obliku glatkih ili grubih narančastih kolonija. Morfološki, mikobakterije su štapići, kratke ili duge. Raste na temperaturi od 25-37 ^o C. Djeca su pod utjecajem limfnih čvorova i pluća.

M. Aquae (M. Gordonae) se naziva saprofitskim skokohromogenim mikobakterijama. Na mediju za jaje raste kao narančaste kolonije pri temperaturi od 25-37 ° C. Morfološki je mikobakterij šipke i umjerene duljine (> 5 um). Pronađeno u rezervoarima.

Grupa III - nefotokromogeni mikobakteri

Ova skupina uključuje mikobakterije koje ne tvore pigment ili imaju blijedo žutu boju koja nije poboljšana svjetlom. Oni rastu 2-3 ili 5-6 tjedana. Za njih nose. M. Avium, M. Intracellulare, M. Xenopi, M. Terrae, M. Gastri, M. Hattey, M. Bruiense.

M. Avium (Mycobacterium ptičji tip) rastu na Lowenstein-Jensen mediju kao pigmentirane ili slabopigmentirovannyh kolonija pri 37 ^do C 45, a ^za S. Morfološki - šipka ima prosječnu duljinu. Oni mogu biti patogeni za ljude i brojne laboratorijske životinje, kao i domaće životinje (npr. Svinje). Pronađeno u vodi i tlu.

M. Xenopi se odvoji od žabe. Mlade kulture rastu u obliku nesigmentiranih kolonija. Kasnije se pojavljuje žuti pigment. Morfološki, duge šibice poput konca. Razvijajte na temperaturi od 40-45 ^o C. Uvjetno patogene za ljude.

M. Terrae je najprije izolirana od rotkvica. Raste na mediju Levenstein-Jensena i obliku pigmentnih kolonija. Optimalni rast je 37 ^o C. Morfološki su zastupljeni srednjim šipkama, saprofitima.

Skupina IV - brzo rastući mikobakterije

Mikobakterije koje pripadaju ovoj skupini karakteriziraju brz rast (do 7-10 dana). Raste u obliku pigmentnih ili pigmentnih kolonija, često u obliku R-oblika. Dobar rast ostavi 2-5 dana pri 25 ° C ^na C Ova skupina uključuje potencijalno patogenim mikobakterijama M.fortuitum i saprofitskih mikobakterije, kao što su M. M. Smegmatis phlei, i dr. M. Fortuitum daje vidljivi rast na mediju za jaje 2.-4. Dan u obliku "rozete". Morfološki, mikobakterije predstavljaju kratke šipke. Na mediju Lowenstein-Jensen mogu apsorbirati malakitske zelje i biti zelene boje. Rasprostranjena u prirodi.

Klasifikacija Runyona pokazala se vrlo prikladnom za identifikaciju najčešćih vrsta mikobakterija. Međutim, prepoznavanje novih vrsta i pojava sve većeg broja intermedijarnih oblika mikobakterija uzrokuju poteškoće u njihovoj registraciji u određenoj skupini Runyona.

M. Tuberculosis je mlada evolucijska formacija. Nedavno je postojala sklonost podijeliti M. Tuberculosis u klastere ili obitelji. Najvažniji su sojevi pripadnici obitelji iz Pekinga, koji su karakterizirani klonskim ponašanjem i sposobnošću izazivanja mikrotubusa tuberkuloze.

Morfologija mikobakterija

Mikobakterije - tanke štapiće u obliku stanica s karakterističnim svojstvom kiselosti i alkohola (na jednoj od faza rasta), aerobni. Gram bojanje je slabo gram-pozitivno. Mikobakterije su nepokretne, ne stvaraju spore. Conidia ili kapsule su odsutne. Polako ili vrlo sporo rastu na gustim medijima hranjivih tvari: kod optimalne temperature vidljive se kolonije javljaju nakon 2-60 dana. Kolonije su ružičaste, narančaste ili žute, posebno s rastom svjetlosti. Pigment se ne difuzira. Površina kolonija je obično mat (S-tip) ili gruba (R-tip). Često se mykobakterije rastu u obliku mukoznih ili naboranih kolonija. Na tekućim medijima, mikobakterija raste na površini. Lagani suhi film zgušnjava se tijekom vremena, postaje neravan naboran i dobiva žućkasto nijansu. Bujon ostaje transparentan i moguće je da se difuzni rast može postići u prisutnosti deterdženata. U mikroskolonijama M. Tuberculosis (tj. U ranoj fazi) formiraju se strukture slične snopovima - znak koji je povezan s faktorom kabela.

Kada se boji karbolnim fuchsinom, mycobacterium tuberculosis se otkriva kao tanke, blago zakrivljene šipke grimizno crvene boje, koje sadrže različit broj granula.

Duljina mikobakterija je oko 1-10 um. A širina je 0,2-0,7 μm. Ponekad je moguće pronaći zakrivljene ili zavezane inačice. Mikroorganizmi koji se nalaze pojedinačno, u parovima ili u skupinama, ističu dobro protiv plave pozadine ostalih komponenti pripravka. Često, bakterijske stanice mogu biti raspoređene u obliku rimskog broja "V".

U pripremi je također moguće detektirati promijenjene oblike koaksijalnog otpora uzročnika, zaobljenih sfernih ili micelija sličnih struktura. U tom se slučaju pozitivan odgovor mora potvrditi dodatnim metodama.

Struktura stanične stijenke mikobakterija

Stanična stijenka mikobakterija je najsloženija u usporedbi s ostalim prokariotima.

Dok gram-negativne bakterije imaju dvije membrane, stanična stijenka mikobakterija sastoji se od nekoliko slojeva, od kojih neki sadrže šećere i karakteriziraju ih relativno konstantni sastav. Vanjski slojevi imaju varijabilni kemijski sastav i uglavnom su predstavljeni lipidima, od kojih su većina mikolske kiseline i njihovi derivati. U pravilu, ti slojevi nisu vidljivi u elektronskoj mikroskopiji. Primarni okvir stanične stijenke je umreženi peptidoglikani - elektronski gusti sloj. Sloj arabinogalaktana ponavlja sloj peptidoglikana, stvarajući polisaharidni strom stanične stijenke. Ima veze s peptidoglikanskim slojem i strukture za fiksiranje mješalica i njihovih derivata.

Mikosilne kiseline su prisutne u obliku slobodnih sulfolipida i čimbenika kabela čija je prisutnost na staničnoj površini povezana s karakterističnim stvaranjem M kolonija. Tuberkuloze u obliku remenje. Jedinstvenost i ključna uloga mikolnih kiselina u strukturnoj organizaciji i fiziologiji mikobakterija čine ih izvrsnim ciljem za etiotropnu terapiju.

Sloj glikolipida naziva se "miocosides" i ponekad se uspoređuje s mikrokapsuleom. Mikozidy strukturno i funkcionalno slične vanjske membrane lipopolisaharida gram-negativnih bakterija, ali njihov nedostatak agresivnosti, ipak oni su toksični i (faktor kabel-kao i sulfolipids) uzrokuju stvaranje granuloma.

Stanične membrane i staničnih stijenki slojevi se prodrlo kanala ili pora između kojih imaju pore pasivni kratak vijek trajanja, pružajući kontroliranom difuzijom tvari i kanala za dugotrajnu, prevoziti hlapljivih tvari.

Druga komponenta stanične stijenke mikobakterija je lipoarabinomannan. To je usidreno na plazma membranu, prožima stanični zid i izlazi na njegovoj površini. S tim u vezi sličan je lipoteichoic acidima gram-pozitivnih bakterija ili lipopolisaharid-O-antigena gram-negativnih bakterija. Terminalni fragmenti lipoarabinomannana, prvenstveno njegovih manozonskih radikala, nespecifično potiskuju aktivaciju T-limfocita i leukocita perifernih krvi. To dovodi do kršenja imunološkog odgovora na mikobakterije.

Varijabilnost i oblici mikobakterija

Postojanost bakterija ima poseban patogenetski značaj. Laboratorijski eksperimenti provedeni in vitro i in vivo pokazali su da bakterijske pripravke izoniazida i pirazinamida ubijaju mikobakterije samo u uzgojnoj fazi. Ako su mikobakterije u fazi niske metaboličke aktivnosti (tj. Rast bakterija je gotovo u potpunosti suspendiran i bakterije se mogu nazvati "dormant"), baktericidni preparati ne djeluju na njih. Ovo se stanje naziva uspavanjem, a mikroorganizmi se nazivaju persisteri. Persisteri nisu osjetljivi na kemoterapiju, tj. Ponašaju se kao otporni mikroorganizmi. Zapravo, oni mogu ostati osjetljivi na lijekove.

Snažan poticaj za prijelaz mikobakterijskih stanica u stanje mirovanja je kemoterapijska sredstva, kao i čimbenici imunološkog sustava domaćina. Perzisteri mogu preživjeti u lezijama mjesecima ili čak godinama. Tijekom upornosti, mikobakterije se mogu transformirati u L-oblike. U ovom obliku, mikobakterije pokazuju izrazito nisku metaboličku aktivnost, prvenstveno za povećanje debljine stanične stijenke i izvanstaničnog matriksa, što sprječava jednostavnu difuziju tvari. Pored toga, u mikobakterijama postoji akumulacija genetskog materijala, što omogućuje povećanje vjerojatnosti rekonstrukcije normalno funkcionalne stanice pod povoljnim uvjetima. Otkrivanje L-oblika prema standardnim mikrobiološkim metodama je teško.

Ako uspavani mikobakteri ponovo steknu metaboličku aktivnost i počnu se razmnožavati tijekom kemoterapije, oni brzo umiru. Ako je kemoterapija završena, takvi "oživljeni" mikobakteri i dalje se razmnožavaju i uzrokuju recidiv bolesti. Ovo objašnjava valjanost dugih tečajeva kemoterapije i primjena kasnijih profilaktičkih postupaka. Kao pravilo sezonskog, kolegija kemoprofilaksa.

Fiziologija mikobakterija

U području prokariota, mikobakterije su nedvojbeno vodeći u sintezi najsloženijih organskih spojeva. Vjerojatno imaju najfleksibilniji metabolizam, pružajući potrebnu varijabilnost za preživljavanje kako u vanjskom okruženju tako iu makroorganizmu. Do danas je opisano više od 100 enzimskih reakcija, koje prikazuju razgranani i složeni karakter metabolizma mikobakterija. Za sintezu konačnih spojeva ili kako bi se dobilo potrebne fiziološke funkcije na mikobakterije se može provesti paralelne putove, ovisno o raspoloživosti supstrata, kemijskom okolišu, sigurnost dišnih ciklusa potrebnih komponenti (metalnim ionima, parcijalnog tlaka kisika, ugljični dioksid i drugi.).

Biokemijska svojstva mikobakterija

[5], [6], [7], [8], [9], [10]

Metabolizam lipida

Lipidi stanične stijenke, koji čine 60% suhe težine stanice, određuju nestandardnu prirodu tinktorskih, fizioloških i ekoloških svojstava mikobakterija.

Specifični lipidi mikobakterija opisani do sada strukturno su podijeljeni u 7 glavnih skupina:

1. derivati masnih kiselina ugljikohidrata (uglavnom trehaloza - žičani faktor):
2. mannosidi fosfatidilmiozina:
3. derivati masnih kiselina peptida;
4. glikozidi N-acilpeptida - miocosidi C;
5. esteri masnih kiselina fluorotyrola;
6. mycosides A, B.G;
7. Mješavine glicerina.

Lipidi skupina 4-6 nalaze se samo u mikobakterijama.

Među jedinstvenim, treba istaknuti tuberkulostarna i tuberkulopalmitinska kiselina, koja su preteča mokraćnih kiselina.

Mikolovye kiselina - grupa velikih molekulskih masnih kiselina s duljinom lanca do 84 ugljikovih atoma, struktura glavnog lanca određena je sustavnim položajem mikroorganizma i uvjetima njegovog rasta. Njihova niska reaktivnost daje visoku kemijsku stabilnost stanične stijenke mikobakterije. Mikolata potiskuje enzimsko cijepanje stanične stijenke i reakcije slobodnih radikala.

Faktor žice pripisuje se 1. Skupini lipida. Povezan je s velikom toksičnošću mikobakterija i virulencijom.

Surfaktivni lipidi, ili sulfolipidi, igraju važnu ulogu u intracelularnoj adaptaciji mikobakterija. Zajedno s čimbenikom kabela formiraju citotoksične membrane -otropne komplekse.

Lipoarabinomannan je heterogena smjesa visoke molekulske lipopolisaharida: razgranatog polimera Arabinoza i manoza izvedenih diatsilglitserinovymi tuberkulostearinovoy i palmitinske kiseline.

Mycosides C su peptidoglikolidi. Formiranje vanjske ljuske mikobakterija, koje se mogu promatrati elektronskom mikroskopijom u obliku prozirne zone na periferiji stanica. Mikoside su specifični specifični spojevi. Antigena svojstva mikobakterija ovise o vrsti.

Kvantitativni i kvalitativni sastav lipidnih spojeva mikobakterija je dinamičan i ovisi o starosti stanica, sastavu nutrijenata i fizikalno-kemijskim značajkama okoliša. Mlade stanice mikobakterija počnu stvarati stanični zid od sinteze lipopolisaharida s relativno kratkim alifatskim lancima. U ovoj fazi, oni su prilično ranjivi i dostupni imunološkom sustavu. Uz rast stanične stijenke i stvaranje visoko molekularnih lipida, mikobakterije stječu stabilnost i ravnodušnost u odnosu s imunološkim sustavom.

Metabolizam ugljikohidrata

Najpoželjniji izvor ugljika za mikobakterije je glicerol.

Najvažniji ugljikohidrati su arabinoza. Manoza i maltoza - čine više od polovice saharida. Osim toga, u životu stanica igraju ulogu trehaloze, glukoze, fruktoze, galaktoze, ramnoze i nekih drugih saharida. Istodobno, sinteza ide duž hidrolaze i aldolaze. Putavata se koristi za sintezu glikogena. Arabinoza i manoza su uključeni u formiranje važnih strukturnih spojeva. Kako bi se dobila energija, koristi se pentose fosfatni put oksidacije glukoze. Pruža ih malate, izocitrat i sukcinat dehidrogenaze, što daje fleksibilnost u dišnom sustavu.

Glikoksilatni put je jedinstven, a mikobakterije se koriste za uključivanje slobodnih masnih kiselina u ciklus trikarboksilne kiseline, koji se akumuliraju tijekom rasta mikobakterija. Ovaj ciklus privlači pažnju istraživača kao mogući mehanizam za kemotaksiju mikobakterija tijekom ustrajnosti.

Metabolizam dušika i aminokiselina

Stopa iskoristivosti mikobakterija nitrata, nitrita, hidroksilamina može poslužiti za identificiranje vrsta. Kao izvor dušika, mikobakterije preferiraju asparagin. Sinteza aminokiselina je hlapljivi proces i osigurava skupina enzima koji omogućuju upotrebu drugih spojeva aminokiselina, na primjer, glutamata.

Aktivnost nitrita i nitrat reduktaze

Mycobacterium tuberculosis mogu tvoriti adenozin trifosfata (ATP) u prijenosu lančanog prijenosa elektrona završava NO ₃ - ali nije O _2. U toj reakciji nastaje rekonstituciju NO ₃ do NH ₃ u količinama koje su potrebne za sintezu aminokiselina, purinskih i pirimidinskih baza. To se postiže slijednim djelovanjem nitratnih i nitritnih reduktaza.

Djelovanje katalaze i peroksidaze

Katalaza sprječava akumulaciju vodikovog peroksida, koji nastaje tijekom aerobne oksidacije rekonstituiranih flavoproteina. Aktivnost enzima ovisi o pH mediju i temperaturi. Na temperaturi od 56 ° C, katalaza nije aktivna. Postoje testovi za pripadnost patogenom kompleksu mikobakterija, koji se temelje na toplinskoj stabilnosti katalaze.

Poznato je da 70% sojeva mycobacterium tuberculosis, otpornih na izoniazid, gubi aktivnost katalaze i peroksidaze.

Aktivnost peroksidaze i katalaze provodi se istim enzimskim kompleksom.

[11], [12], [13], [14], [15]

Vitamini i koenzimi

Struktura M. Tuberculosis su vitamina B (riboflavin, piridoksin, cijanokobalamin, tiamin), vitamin C i K. P-aminobenzojeva kiselina i pantotensku kiselinu, nikotinsku biotin i folnu kiselinu.

Metabolizam, prehrana i disanje mikobakterija

U uobičajenim, povoljnim uvjetima, mycobacterium tuberculosis - strog aerobes i mesofili, tj. Rastu u prisutnosti kisika i u temperaturnom rasponu od 30-42 ^na C, poželjno na 37 ° C ^za S. U nepovoljnim uvjetima okoline, i (ili) kisik nedostatak Mycobacterium tuberculosis manifestiraju kao microaerophiles pa čak i anaerobe. Istodobno, njihov metabolizam prolazi kroz značajne promjene.

Na potrošnju kisika i razvoj oksidacijskih sustava, mikobakterije su slične istinitim gljivama. Kao veza između NADH-dehidrogenaze i citokroma b u sustavu prijenosa roda Mycobacterium je vitamin K ₉. Ovaj sustav citokroma sličan je mitohondrijskom sustavu. To je osjetljivo na dinitrofenol, kao i na višim organizmima.

Opisana vrsta disanja nije jedini izvor ATP formiranja. Dodatno O ₂ -terminalna. Mikobakterije mogu koristiti respiratorne lance koji nose elektrone i završavaju u nitratima (NO ₃ ^- ). Rezerva dišnog sustava mikobakterija je ciklus glikoksilata.

Otrovno (endogeno) disanje, koje se manifestira u atmosferi s koncentracijom kisika manjom od 1%, stimulira azidne spojeve koji smanjuju oksidaciju piruvata ili trehaloze.

Rast i reprodukcija mikobakterija

Mycobacterium tuberculosis pasmina iznimno polako: razdoblje udvostručenja je 18-24 sata (zajedničke bakterije podijeliti svakih 15 minuta). Stoga, da bi se dobio vidljiv rast tipičnih kolonija, potrebno je najmanje 4-6 tjedana. Jedan od razloga za sporu reprodukciju mikobakterija je njihova izražena hidrofobnost, što otežava difuziju hranjivih tvari. Vjerojatnije je da je to genetski određeno i povezano s složenijim uređajem mikobakterija. Poznato je, na primjer, da većina bakterija ima višestruke kopije ribonukleinske ribonukleinske kiseline (rRNA) operona. Polagano rastući mikobakterije (M. Tuberculosis, M. Leprae) imaju jednu kopiju operona, a brzi rast (M. Smegmatis) imaju samo dvije kopije.

Kada se uzgaja na tekućim medijima, mikobakterija raste na površini. Lagani suhi film na kraju se zgusne, postaje neravan naboran i dobiva žućkastu boju, često u usporedbi s bojom od bjelokosti. Juha ostaje prozirna i moguće je da se difuzni rast može postići samo u prisutnosti deterdženata, primjerice Tween-80. U mikroskolonijama (tj. U ranim stadijima) formiraju se strukture slične snopovima, znak koji je povezan s čvorom žice M. Tuberculosis.

Genetika mikobakterija

Rodus mikobakterija vrlo je raznolik od genetske točke gledišta. Za razliku od mnogih saprofitnih i nontuberkuloznih mikobakterija, mycobacterium tuberculosis ne sadrži ekstrakromosomske inkluzije (na primjer, plazmidi). Cijeli niz svojstava mycobacterium tuberculosis određen je njegovim kromosomom.

Genom kompleksa M. Tuberculosis izuzetno je konzervativan. Njegovi predstavnici imaju DNA homologiju na 85-100%. Dok je DNA drugih mikobakterijskih vrsta homologna za M. Tuberculosis samo 4-26%.

Predstavnici roda Mycobacterium imaju velike genome u usporedbi s drugim prokariotima - 3.1-4.5x10 ⁹ Da. Međutim, genomi patogenih vrsta su manji nego kod drugih mikobakterija (u M. Tuberculosis - 2.5x10 ⁹ Da). Klasični uzročnik humane tuberkuloze, M. Tuberculosis, ima više gena nego M. Africanum i M. Bovis, koji su tijekom evolucije izgubili dio genetskog materijala.

Godine 1998. Objavljena je nukleotidna sekvenca kromosoma soja H37Rv M. Tuberculosis. Njegova duljina je 4 411529 parova baza. Kromosom Mycobacterium tuberculosis je prstenasta struktura. Sadrži oko 4000 gena koji kodiraju proteine, kao i 60. Kodirajuće funkcionalne komponente RNA: jedinstveni ribosomalni RNA operon, 10Sa RNA. Koji su uključeni u degradaciju proteina s atipičnom matriksnom RNA. 45 transport RNA (tRNA), više od 90 lipoproteina.

Više od 20% genoma zauzima gena za metabolizam stanične stijenke masne kiseline, uključujući mycolic kiseline bogate u glicin kiselom polipeptida (obitelji PE i PPE) kodiran polimorfnih obrocima genoma PGRS (polimorfne GC-bogata ponavljajuće sekvence) i MPTR (glavni polimorfni tandem repeat) , odnosno (peti i četvrti prsten na karti genomske kromosoma). Varijabilnost ovih dijelova genoma daje razlike u antigenu i sposobnost inhibiranja imunološkog odgovora. Geni koji kontroliraju faktore virulencije široko su zastupljeni u genomu mikobakterijskog tuberkuloza.

Mycobacterium tuberculosis sintetizira sve komponente nužne za metabolizam: esencijalne aminokiseline, vitamine, enzime i kofaktore. U usporedbi s ostalim bakterijskim vrstama, povećana je aktivnost lipogeneze enzima u M. Tuberculosis. Dva gena kodiraju hemoglobin-slične proteine, koji igraju ulogu antioksidacijskih proteza ili zamke za višak staničnog kisika. Ove osobine doprinose brzoj prilagodbi mikobakterija tuberkuloze na nagle promjene u uvjetima okoline.

Osobitost genoma kompleksa M. Tuberculosis je veliki broj ponavljajućih DNA sekvenci. So. M. Tuberculosis H37Rv kromosomu broj do 56 primjeraka IS elemenata (umetanje - odsječaka ugrađen) koji omogućuju polimorfizam DNA Mycobacterium tuberculosis. Većina njih. Osim za element IS6110. Su nepromijenjene. Sastav kromosoma različitih sojeva Mycobacterium tuberculosis, općenito je prisutan u količini od 5 do 20 primjeraka IS6110, no koje se naišlo sojeva koji nemaju taj element. Uz IS-elemenata gen sadrži nekoliko vrsta kratkih ponavljanja nukleotida (PGRS i MPTR), kao i izravne ponavlja DR (Direct ponavljanje), koji se nalazi u DR-polju i zasebna varijabla sekvence - odstojnika (šesti prsten na karti kromosoma). Razlike u broju primjeraka i lokalizaciju na kromosomu genetičkih elemenata koji se koriste za razlikovanje sojeva Mycobacterium tuberculosis u molekularnoj epidemiologiji. Najnapredniji genotipiziranje sheme na temelju identifikaciju mikobakterija genomske polimorfizma izazvao IS6110 elementa, kao i DR i razmak. Karakteristično je da se divergencija M. Tuberculosis javlja u pravilu zbog rekombinacije između kopija elementa IS6110. Koji se nalaze na različitim genima.

U genomu H37Rv nalaze se dva profaga - phiRv1 i phiRv2. Poput polimorfične Dral stranice oni su. Vjerojatno povezana s patogenosti faktorima, kao što su ovi dijelovi genoma razlikuju analognih mjesta avirulentni sojeva M. Tuberculosis H37Ra i M. BOM BCG, definiranih dijelova genoma (mult, ogt-gena), odgovoran za povećanje učestalosti mutacije i adaptaciju Mycobacterium tuberculosis u pressovyh uvjeti. Otkrivanje okidač gen Mycobacterium tuberculosis dormantnosti promijenila ideju latentne infekcije tuberkuloze.

Istraživanje polimorfizma gena koji kodiraju katalazu, peroksidazu i A-podjedinicu DNA-giraze. U kompleksu M. Tuberculosis izolirane su tri genotipske skupine. Najstariji (iz stajališta evolucije) skupina I: M. Africanum, M. Bovis. M. Tuberculosis i M. Microti. Skupine II i III uključuju različite sojeve M. Tuberculosis koje se šire u nekim geografskim regijama. Klonalno ponašanje karakteristično je za skupine I i II, a sojevi skupine III vrlo rijetko uzrokuju masovne bolesti. U raznim dijelovima svijeta genetske obitelji M. Tuberculosis, koje su primile imena Haarlem, su zajedničke. Afrika, Filipino.

Posebno mjesto pripada obitelji Pekingu, prvi put identificirane u histološkim preparatima pluća tkiva 1956-1990. Od bolesnika iz predgrađa Pekinga. Danas se sojevi ove obitelji nalaze u državama Azije. Južnoj Africi, Karibima, Sjedinjenim Državama. Distribucija ovog genotipa na različitim teritorijima određena je etničkim obilježjima autohtonog stanovništva i migranata. Nedavno su dobiveni podaci o raspodjeli sojeva SI / Beijing genotipa u sjeverozapadnom europskom dijelu Rusije (Sankt Peterburg) i na područjima Sibira.

Stabilnost mikobakterija

Tijekom evolucije mycobacterium tuberculosis razvijeni su različiti mehanizmi za prevladavanje ili deaktivaciju negativnih čimbenika okoliša. Na prvom mjestu. Ovo je snažan stanični zid. Drugo, postoje velike metaboličke mogućnosti. Oni su u mogućnosti inaktivirati mnoge stanične toksine i tvari (razni peroksidi, aldehidi i drugi) koji uništavaju staničnu membranu. Treće, to je morfološka plastičnost, koja se sastoji u transformaciji mikobakterija (stvaranje L-oblika u mirovanju). Stabilnost, nakon bakterija koje stvaraju spore, zauzimaju vodeće mjesto u području prokariota.

Uzročnik zadržava njegovu održivost u suhom stanju do 3 godine. Kada se zagrijava Mycobacterium tuberculosis, može izdržati temperature iznad 80 ° C. Do danas vjeruje se da mikobakterijska tuberkuloza, koja je u ispljuvaju, ostala je održiva kad se potonji kuha u roku od 5 minuta.

Mycobacterium tuberculosis otporan na organske i anorganske kiseline, lužine, mnogim oksidacijskim sredstvima, kao i na niz antiseptički i dehidriranje tvari koje imaju štetan utjecaj na drugih patogenih mikroorganizama. Mikobakterije su otporne na alkohole i acetone.

Opaženo je da su pripravci na bazi kvaterne amonijeve tuberkuloze ne pokazuju aktivnost u određenim uvjetima, koncentracija kisikovih radikala i klor i 0,5% i ne imati katastrofalne učinak na Mycobacterium tuberculosis. To podrazumijeva nemogućnost korištenja takvog sredstva za sterilizaciju sputuma i drugih zaraženih bioloških materijala.

Mycobacterium tuberculosis je neosjetljiva na raspršenu sunčevu svjetlost i može postojati više od godinu dana u vanjskom okruženju bez gubitka održivosti. Ultraljubičasto proučavanje kratkog svjetla ima univerzalni baktericidni učinak na sve mikroorganizme. Međutim, u stvarnim uvjetima, kada je mikobakterij tuberkuloza suspendiran u obliku staničnih aglomerata s česticama prašine, njihova otpornost na ultraljubičasto zračenje raste.

Visoka stopa preživljavanja mycobacterium tuberculosis doprinosi iznimno širokom rasprostranjenju ove infekcije među stanovništvom bez obzira na klimatske uvjete. Međutim, to ne samo da doprinosi globalizaciji problema - mycobacterium tuberculosis može dugo trajati u ljudskom tijelu i može se ponovno aktivirati u neograničenim razmacima.

Lokalizacija Mycobacterium tuberculosis unutar makrofaga osigurati dovoljnu stabilnost supstrata, s obzirom na „dugovječnost” mononuklearnim fagocitima i trajanje replikaciju mikobakterija kao i izolaciju efektora humoralne imunosti. Istovremeno, patogen bira biotopa koji je zbog potencijalne opasnosti neprihvatljiv za većinu mikroorganizama. Ova simbioza osigurava niz prilagodljivih mehanizama mikobakterija.

Proces makrofage oštećenja i parazitizma u njoj izgleda ovako: prodiranje mikobakterija u makrofag bez njegove aktivacije; suzbijanje formiranja ili transformacije fagolizosoma u zonu koja je ugodno za bakterije; proboj od fagosoma u citoplazmu s inaktivacijom antimikrobnih čimbenika; smetnje u životu stanice; slabi osjetljivost makrofaga na aktivirajuće signale T-limfocita; smanjenje funkcije predstavljanja antigena makrofaga i povezano slabljenje reakcija citotoksičnih T-limfocita, prilagođenih uništenju zaraženih stanica.

Bez sumnje, u pružanju ove važne uloge igraju se značajke stanične stijenke. Kao i metaboličke i funkcionalne sposobnosti. Kada je prvi kontakt sa mikroorganizma Mycobacterium imuni sustav ne može spojiti humoralni imunitet brzo neutralizirati i eliminirati stanice iz tijela, budući da je pomični alifatski lanac od mikobakterijske stijenke ne dopuštaju procjenu površine strukture patogena i prenose relevantne informacije potrebne za sintezu niza antitijela.

Visoka hidrofobnost mikobakterija daje nespecifični, tj. Neovisno od receptora, kontakata s makrofagima. Formirajući se oko mikociklijskog staničnog fagosoma, makrofagi ga stavljaju u sebe. Receptori mogu prepoznati površinski mikosidni i lipoarabinomannanski kompleksi, no signali koji se pokreću kroz njih ne aktiviraju ili slabe aktiviraju makrofage. Kao posljedica toga, fagocitoza ne prati oslobađanje slobodnih radikala kisika i dušika. Smatra se da je u većoj mjeri to je karakteristika virulentnih sojeva M. Tuberculosis, koja je, s obzirom na strukturne značajke lipoarabinomannan iniciraju „ne agresivnu” fagocitozu. U priznavanju M. Tuberculosis, sudjeluju i drugi receptori makrofaga, posebno CD 14 i receptori komponente komplementa C3 (CR1-CR3).

Jednom unutar makrofaga, mikobakterije sadrži nekoliko mehanizama koji sprečavaju stvaranje fagolizosom: proizvodnja amonijaka, koji je zaluži okoliš u phagosome, sulfolipids sinteze, što dovodi do stvaranja negativnog naboja na površini phagosome. što sprječava fuziju fagosoma i lizosoma.

Ako je, međutim, fagolizosom nastaje zbog snažnog Mycobacterium voska ljuske u stanju ugasiti reakcije slobodnih radikala uzrokovan fagocit baktericidna tvari. Amonij zaluži okoliša, blokirajući aktivnost lizosomskih enzima i sulfolipids membranotropic neutralizira kationske proteina. Nadalje, Mycobacterium tuberculosis proizvodnju visoko aktivne enzime s katalaze i peroksidaze aktivnosti, koje se natječu s peroksidazu sustava makrofaga i istovremeno inaktivirati hidropcroksida lizosomi Sve to povećava otpornost mikobakterija na oksidativnog stresa.

Daljnja prilagodba mikobakterija sastoji se u upotrebi makrofaga koji sadrže željezo za enzimske sustave i blokira imunospecifične funkcije makrofaga. Makrofagi su jedan od glavnih rezervoara željeza, čiji se višak akumulira u obliku feritina. Sadržaj željeza u alveolarnim makrofagima je 100 puta veći nego kod monocita u krvi, što svakako doprinosi njihovoj kolonizaciji mikobakterija tuberkuloza.

Toksični učinak na makrofage mikobakterija provodi se pomoću endotoksina i nespecifičnih čimbenika. I oni i drugi prvenstveno utječu na respiratorni sustav makrofaga - mitohondrija. Endotoksini uključuju mješavine arabinolipida koji inhibiraju disanje mitohondrija. U nespecifične toksine uključuju se proizvodi sinteze lipidnog dijela mikobakterijskih stanica - ftinoidnih i fitnih kiselina, koji uzrokuju disocijaciju oksidativne fosforilacije. Intenziviranje metaboličkih procesa pod ovim uvjetima nije praćeno odgovarajućom sintezom ATP. Stanice domaćini počinju doživjeti glad u energiji, što dovodi do inhibicije njihove vitalne aktivnosti, au budućnosti citolizu i apoptozu.

Moguće je da se neki faktori patogenosti formiraju samo unutar zaraženih stanica, kao što se događa kod drugih bakterija koje preferiraju intracelularni način života. Na primjer, salmonela, parazitiranje unutar makrofaga, dodatno izražava više od 30 gena. Unatoč potpuni opis genoma mycobacterium tuberculosis. 30% kodona povezano je s proteinima s nepoznatim svojstvima.

Otpornost na lijekove mikobakterija

S kliničke točke gledišta, osjetljivost lijeka mikroorganizma određuje mogućnost korištenja standardne kemoterapije s naznačenim lijekom za liječenje bolesti uzrokovane izoliranim sojevima. Stabilnost "predviđa neuspjeh liječenja testiranjem kemoterapijskog lijeka". Drugim riječima, upotreba standardne kemoterapije koja rezultira postizanjem sistemske koncentracije lijeka, koja je obično učinkovita u normalnim uvjetima, ne potiskuje reprodukciju "rezistentnih mikroorganizama".

U mikrobiologiji, pristup populacije temelji se na definiciji osjetljivosti na lijek ili otpornosti na lijek, što podrazumijeva različit stupanj stabilnosti bazena (heterogena populacija) mikrobnih stanica. Otpornost na lijekove procjenjuje se u kvantitativnim karakteristikama, kao što je "minimalna inhibitorska koncentracija" (MIC). Na primjer, s MIK-90, 90% mikroorganizama umre (bakteriostatska koncentracija). Stoga, otpornost treba shvatiti kao njegov stupanj u dijelu mikrobne populacije koja unaprijed određuje neuspjeh liječenja u većini slučajeva. Općenito je prihvaćeno da 10% otpornih sojeva u cijeloj mikrobnoj populaciji pacijenta može imati patogeni učinak. U phthisiobacteriologiji za prve linije antituberkuloznih lijekova, to je 1%. Ili 20 jedinica za stvaranje kolonija - CFU). Ovaj dio mikrobne populacije u mjesecu može zamijeniti izvornik i oblikovati fokus lezije. Za anti-TB lijekove druge serije, kriterij stabilnosti je povećanje od 10% u mikrobnoj populaciji.

Razvoj rezistencije na lijekove kod mikroorganizama povezanih s izborom (selekcije) u prisutnosti antibiotika i sa osnovnim dijelovima preživljavanje mikrobne populacije ima obrambene mehanizme protiv antibakterijsko sredstvo. U svakoj populaciji postoji neznatna količina mutantnih stanica (obično 10 ⁶ -10 ⁹ ) otpornih na ovaj ili onaj lijek. Tijekom kemoterapije, osjetljive mikrobne stanice umiru, a otporni se umnožavaju. Kao rezultat, senzorske stanice zamjenjuju stabilne stanice.

Mikobakterije u početku imaju visoku prirodnu otpornost na mnoge antibakterijske lijekove širokog spektra djelovanja, ali različite vrste imaju različit spektar i stupanj ove osjetljivosti.

Pod pravog prirodnog konstanta stabilnosti razumjeti specifične značajke mikroorganizama povezanih s nedostatkom ciljnog antibiotskog djelovanja ili zbog nedostupnosti primarne ciljne propusnosti niske stanične stijenke, enzimskim inaktivacije tvari ili drugih mehanizama.

Dobivena otpornost je svojstvo pojedinačnih sojeva da ostanu izvedivi u onim koncentracijama antibiotika koji inhibiraju rast glavnog dijela mikrobne populacije. Stjecanje otpora u svim slučajevima genetski je uzrokovano: pojava novih genetskih informacija ili promjena razine ekspresije vlastitih gena.

U današnje vrijeme otkriveni su različiti molekularni mehanizmi rezistencije mikobakterija tuberkuloze:

• inaktivacija antibiotika (fermentacijska inaktivacija), na primjer β-laktamazama;
• modifikacija cilja djelovanja (promjena u prostornoj konfiguraciji proteina zbog mutacije odgovarajuće regije genoma):
• hiperprodukciju cilja, što dovodi do promjene omjera ciljnog agensa do oslobađanja dijela životnog proteina bakterija;
• aktivno uklanjanje lijeka iz mikrobne stanice (eflux) zbog uključivanja zaštitnih mehanizama stresa:
• promjena parametara propusnosti vanjskih mikrobnih staničnih struktura koje blokiraju sposobnost antibiotika da prodre unutrašnjost stanice;
• Uključivanje "metaboličkog skretanja" (putanje zaobići).

Osim izravnih učinaka na metabolizam stanica mikroba, mnogi antibiotici (benzilpenicilin. Streptomicin, rifampicin) i drugih nepovoljnih čimbenika (biocidi imunološki sustav) dovesti do pojave modificiranih oblika mikobakterija (protoplaste, L-oblici). Kao i prijenos stanica u stanje mirovanja: intenzitet razmjene stanica se smanjuje i bakterija postaje imuna na djelovanje antibiotika.

Svi mehanizmi čine različit stupanj otpornosti, osiguravajući otpornost na različite koncentracije kemoterapijskih lijekova, tako da nastanak otpornosti u bakterijama nije uvijek praćeno smanjenjem kliničke učinkovitosti antibiotika. Da bi se procijenila učinkovitost i prognoza liječenja, važno je znati stupanj otpornosti.

Trenutačno se određuje barem jedan gen za svaki antituberkulozni lijek prvog serija i za većinu rezervnih pripravaka. Specifične mutacije u kojima nastaju otporne varijante mikobakterija. U širokom rasprostiranju otpora lijekova u mikobakterijama, visoka učestalost mutacija in vivo važnija je od in vitro.

[16], [17], [18], [19], [20], [21], [22], [23], [24], [25],

Vrste rezistencije na lijekove mikobakterija

Razlikovati primarnu i stečenu otpornost na lijekove. Mikroorganizmi s primarnom rezistencijom uključuju sojeve izolirane od pacijenata koji nisu primili specifičnu terapiju ili koji su primali lijekove za mjesec ili manje. Ako je nemoguće razjasniti činjenicu uporabe lijekova protiv tuberkuloze, koristi se pojam "početna otpornost".

Primarni otpornost na lijek je od velikog kliničkog i epidemiološkog značaja, dakle, za njegov ispravan ocjena ne smije provoditi novih slučajeva tuberkuloze kemoterapije mikrobioloških studija dijagnostičkog materijala. Učestalost primarne rezistencije na lijek izračunava se kao odnos broja novodijagnosticiranih TBC bolesnika s primarnim otpornost na broj svih novodijagnosticiranih bolesnika koji su primali ispitivanog lijeka osjetljivost za cilj Ako otporan soj izoliran od pacijenta u pozadini protiv TB terapije provodi za mjesec dana ili više, stabilnost smatraju stečenim. Učestalost rezistencije na primarnu drogu karakterizira epidemiološko stanje patogena populacije TB.

Stečena otpornost na lijek kod novih slučajeva - rezultat neuspjeha liječenja (pogrešnog izbora lijekova, neuspjeh način prijema, manjom pripremama za doziranje nestabilna opskrbe i loše kvalitete proizvoda). Ovi čimbenici dovode do smanjenja sistemske koncentracije lijekova u krvi i njihove učinkovitosti, dok istodobno "pokreću" zaštitne stanice u mikobakterijskim stanicama.

U epidemiološke svrhe izračunava se učestalost prethodno tretiranih slučajeva. U tu svrhu uzimaju se u obzir pacijenti koji se angažiraju za ponavljanje liječenja nakon neuspješnog tijeka kemoterapije ili recidiva. Omjer broja rezistentnih kultura mycobacterium tuberculosis je izračunat prema broju svih sojeva ispitanih za prisutnost rezistencije na lijek tijekom godine među pacijentima ove skupine u vrijeme njihove registracije.

U strukturi otpornosti na lijekove razlikuju se mikobakterije tuberkuloze:

Sačuvan je monoresistencija - otpornost na jedan od antituberkuloznih lijekova, osjetljivost na druge lijekove. Kada koristite kompleksnu terapiju, mono-otpor se rijetko detektira i. U pravilu, na streptomicin (u 10-15% slučajeva među novodijagnosticiranim pacijentima).

Otpornost na više lijekova - otpornost na dva ili više lijekova.

Otpornost na više lijekova - otpornost na isoniazid i rifampicin istodobno (bez obzira na dostupnost otpornosti na druge lijekove). Uz to je u pravilu otpornost na streptomicin, itd. Danas je MDR tuberkuloznih patogena postala epidemiološki opasna pojava. Izračuni pokazuju da otkrivanje patogena s MDR u više od 6,6% slučajeva (među novodijagnosticiranim pacijentima) zahtijeva promjenu strategije Nacionalnog programa tuberkuloze. Prema praćenju otpornosti na lijekove, učestalost MDR kod novodijagnosticiranih bolesnika iznosi 4 do 15%, među recidivima - 45-55%, a među slučajevima neuspjelog liječenja - do 80%.

Superstabilnost - višestruka otpornost lijeka kombinirana s otpornošću na fluokinolone i jedan od injekcijskih lijekova (kanamicin, amikacin, capreomycin). Tuberkuloza uzrokovana sojevima s nadmoćnošću predstavlja izravnu prijetnju životu pacijenata, budući da drugi anti-tuberkulozni lijekovi drugog reda nemaju izražen antibakterijski učinak. Od 2006. Godine u nekim je zemljama pratio distribuciju sojeva mikobakterija s nadmoćnošću. U inozemstvu je uobičajeno odrediti ovu verziju MDR-a kao XDR.

Cross-resistance - kada nastanak otpornosti na jedan lijek podrazumijeva otpornost na druge lijekove. U M. Tuberculosis, u pravilu, mutacije povezane s otporom nisu međusobno povezane. Razvoj križnog otpora je zbog sličnosti kemijske strukture nekih anti-tuberkuloznih lijekova. Naročito je često prisutna križna rezistencija unutar jedne skupine lijekova, na primjer aminoglikozida. Za predviđanje križnih otpora potrebni su proučavanja kulture mikobakterija na genetskoj razini u kombinaciji s mikrobiološkom studijom otpornosti.

Neptukalektonski mekušci

Nontuberkulozni mikobakterije prenose se od osobe do osobe vrlo rijetko. Učestalost raspodjele nekih njihovih vrsta iz materijala iz bolesnika usporediva je s učestalosti tih vrsta iz objekata vanjskog okruženja. Izvori infekcije mogu biti domaće životinje i ptice, neprerađena hrana. Mikobakterije se nalaze u postmortalnom materijalu i mlijeku goveda.

Prema bakteriološkim laboratorijima, prevalencija ne-tuberkuloznih mikobakterija u 2004-2005 bio je 0,5-6,2% među svim mikobakterijama u novo dijagnosticiranim pacijentima. Vjerojatno, frekvencija može biti nešto veća, jer metoda korištena za obradu dijagnostičkog materijala nije optimalna za ne tuberkulozne mikobakterije. Saprofitnih mikobakterije može biti prisutan u dijagnostičkom materijal za prikupljanje neusklađenosti pravila ili zbog prirode materijala (npr., M. Smegmatis mogu se izolirati iz urina muških bolesnika).

U tom smislu, važno je potvrditi otkrivene vrste mikobakterija iz materijala iz pacijenta.

Mikobakterije utječu na kožu, mekano tkivo, a također mogu uzrokovati mikobakterijus pluća, što je naročito uobičajeno u imunodeficientnim uvjetima. Kod plućne lokalizacije češće se otkriva kod starijih muškaraca čija povijest ima kronične plućne bolesti, uključujući one s gljivičnim lezijama.

Od svih mikobakterija, kompleks M. Avium-intracellularae je najčešći uzročnik pluća mikobakterija kod čovjeka. To uzrokuje bolesti pluća, perifernih limfnih čvorova i diseminiranih procesa. Na sjeveru europske regije, oko 60% mycobacteriosis od pluća. Vlaknasto-kavernozni i infiltrativni procesi prevladavaju na kroničnom tijeku zbog velike otpornosti na lijekove protiv tuberkuloze.

M. Kansasii su uzročnici kronične bolesti pluća, nalik tuberkulozi. Kemoterapija je učinkovitija zbog veće osjetljivosti M. Kansasiija na antibakterijske lijekove. M. Xenopi i M. Malmoense uzrokuju uglavnom kronične bolesti pluća. Oni mogu zagađivati vodeni sustav vruće i hladne vode. Stanište M. Malmoens nije u potpunosti utvrđeno. M. Xenopi pokazuju prilično dobru osjetljivost na terapiju protiv tuberkuloze. M. Malmoense pokazuju dovoljno visoku osjetljivost na antibiotike in vitro, ali konzervativno liječenje često je neučinkovito do smrti. M. Fortuitum i M. Chelonae priznaju se kao uzročnici bolesti kostiju i mekih tkiva uslijed izravne infekcije rane s traumom, kirurškom intervencijom i prodornom ozljedom. Oni uzrokuju do 10% mycobacteriosis od pluća. Ona teče poput kroničnog, destruktivnog, bilateralnog poraza, često smrtonosnog. Antituberkulozni lijekovi i antibiotici širokog spektra nisu aktivni ili nisu jako aktivni protiv ovih tipova mikobakterija.

U južnim područjima, mikobakterija kože i mekih tkiva uzrokovana M. Leprae, M. Ulceranse. Detekcija nontuberkuloznih mikobakterija provodi se u laboratorijima vodećih anti-tuberkuloznih ustanova u zemlji. To zahtijeva visoku kvalifikaciju i dobru opremu laboratorija.