Virus hepatitisa A

Virusni hepatitis A je zarazna bolest ljudi, karakterizirana prvenstveno oštećenjem jetre, a klinički se manifestira intoksikacijom i žuticom. Virus hepatitisa A otkrio je 1973. godine S. Feinstone (i sur.) metodom imunološke elektronske mikroskopije i zarazom majmuna - čimpanza i marmozeta. Bit metode imunološke elektronske mikroskopije je u tome što se specifična antitijela (serum rekonvalescencije) dodaju filtratu fecesa pacijenta s hepatitisom A, a talog se podvrgava elektronskoj mikroskopiji. Zbog interakcije virusa sa specifičnim antitijelima, oni podliježu specifičnoj agregaciji. U tom slučaju ih je lakše detektirati, a agregacija pod utjecajem antitijela potvrđuje specifičnost patogena. Otkriće S. Feinstonea potvrđeno je u eksperimentima na dobrovoljcima.

Virus hepatitisa A je sferičnog oblika, promjer viriona je 27 nm. Genom je predstavljen jednolančanom pozitivnom RNA s mm 2,6 MD. Nema superkapside. Tip simetrije je kubični - ikosaedar. Kapsida ima 32 kapsomera, formirana je od četiri polipeptida (VP1-VP4). Prema svojim svojstvima, virus hepatitisa A pripada rodu Heparnovirus, porodici Picornaviridae. Što se tiče antigena, virus hepatitisa A (HAV - virus hepatitisa A) je homogen. HAV se dobro razmnožava u tijelu čimpanza, babuna, hamadrija babuna i marmoset majmuna. Dugo se virus nije mogao uzgajati. Tek 1980-ih bilo je moguće dobiti stanične kulture u kojima se HAV razmnožava. U početku su se u te svrhe koristile kontinuirane stanične linije bubrega embrija rezus makakija (kultura FRhK-4), a sada se koristi kontinuirana stanična linija stanica bubrega zelenog majmuna (kultura 4647).

Prema preporukama stručnjaka WHO-a usvojena je sljedeća nomenklatura markera virusa hepatitisa A: virus hepatitisa A - HAV antitijela na virus hepatitisa A: anti-HAV IgM i anti-HAV IgG.

HAV je mala čestica promjera 27-30 nm, ikosaedrične simetrije i homogenosti. Elektrogram dobiven metodom imunološke agregacije otkriva čestice guste elektrone s površinski smještenim simetrično raspoređenim kapsomerima. Negativnim kontrastiranjem u preparatima se otkrivaju i pune i prazne čestice. Nukleokapsida HAV-a, za razliku od influence, nema površinske izbočine i membranu. Također je važno da HAV virion nema strukturu u obliku srca.

Na temelju svojih fizikalno-kemijskih svojstava, virus hepatitisa A klasificiran je kao pripadnik porodice pikornavirusa, roda enterovirusa sa serijskim brojem 72. Međutim, ova taksonomija pokazala se previše neobičnom te je WHO smatrao mogućim zadržati terminologiju „virus hepatitisa A“.

Kao i svi virusi iz porodice Picornaviridae, virus hepatitisa A sadrži ribonukleinsku kiselinu. Neki laboratoriji su pokazali mogućnost kloniranja genoma virusa hepatitisa A, što otvara izglede za dobivanje cjepiva.

[ 1 ], [ 2 ], [ 3 ], [ 4 ], [ 5 ], [ 6 ], [ 7 ]

Otpornost na virus hepatitisa A

Virus je relativno otporan na visoke temperature, kiseline, masna otapala (ne sadrži lipide), dezinficijense, a dobro podnosi niske temperature. Sve to doprinosi njegovom dugotrajnom očuvanju u vanjskom okruženju. Na sobnoj temperaturi preživljava nekoliko tjedana, na 60 °C djelomično gubi infektivnost nakon 4-12 sati, a potpuno - nakon nekoliko minuta na 85 °C. Vrlo je otporan na klor, zbog čega može prodrijeti u vodu iz slavine kroz barijere uređaja za pročišćavanje vode.

Sumirajući sve podatke, virus hepatitisa A možemo okarakterizirati na sljedeći način:

• prirodni domaćin je čovjek;
• pokusne životinje - marmozeti, čimpanze;
• izvor infekcije je izmet;
• bolest je epidemijska i endemska;
• put prijenosa: fekalno-oralni;
• razdoblje inkubacije - 14-40 dana;
• prijelaz na kronični hepatitis - nije opažen.

Imunološka svojstva HAV-a su sljedeća:

• Prototipski sojevi - Ms-1, CR-326, GВG. Svi su imunološki slični ili identični;
• Antitijela - IgM i IgG, nastaju kao odgovor na uvođenje strukturnih proteina virusa i imaju zaštitna svojstva;
• I. Zaštitni učinak humanog serumskog gama globulina - sprječava ili ublažava bolest ako se primijeni prije infekcije ili tijekom inkubacije.

Fizikalno-kemijske karakteristike NAU su sljedeće:

• Morfologija: sferična čestica bez ljuske s kubnom simetrijom, kapsida se sastoji od 32 kapsomera;
• Promjer - 27-30 nm;
• Gustoća u CsCl (g/cm3) - 1,38-1,46 (otvorene čestice), 1,33-1,34 (zreli virion), 1,29-1,31 (nezreli virioni, prazne čestice);
• Koeficijent sedimentacije - 156-160 zrelih viriona;
• Nukleinska kiselina je jednolančana, linearna RNA;
• Relativna molekularna težina - 2,25 x 106-2,8 x 106KD;
• Broj nukleotida je 6.500-8.100.

Stabilnost HAV-a pod fizičkim i kemijskim utjecajima je sljedeća:

• Kloroform, eter - stabilan;
• Klor, 0,5-1,5 mg/l, 5 °C, 15 min - djelomična inaktivacija;
• Kloramin, 1 g/l, 20 °C, 15 min - potpuna inaktivacija;
• Formalin, 1:4000, 35-37 °C, 72 h - potpuna inaktivacija, 1:350, 20 °C, 60 min - djelomična inaktivacija.

Temperatura:

• 20-70 °C - stabilno;
• 56 °C, 30 min - stabilno;
• 60 °C, 12 h - djelomična inaktivacija;
• 85 °C, 1 min - potpuna inaktivacija;
• Autoklaviranje, 120 °C. 20 min - potpuna inaktivacija;
• Suha toplina, 180 °C, 1 sat - potpuna inaktivacija;
• UFO, 1,1 W, 1 min - potpuna inaktivacija.

Prikazani podaci pokazuju da je virus hepatitisa A po svojim fizikalno-kemijskim svojstvima najbliži enterovirusima. Poput ostalih enterovirusa, HAV je otporan na mnoge dezinfekcijske otopine i potpuno se inaktivira unutar nekoliko minuta na 85 °C i autoklaviranju.

Dokazano je da se virus hepatitisa A može reproducirati u primarnim i kontinuiranim monoslojnim linijama staničnih kultura ljudi i majmuna. Posebno aktivna reprodukcija virusa hepatitisa A u in vitro kulturama opažena je kada se kao početni materijal koriste ekstrakti jetre bolesnih majmuna. Međutim, treba napomenuti da se u svim eksperimentima reprodukcije virusa hepatitisa A na in vitro kulturama pozornost privlači na dugo razdoblje inkubacije tijekom primarnih pasaža (do 4-10 tjedana), nakon čega se povećava akumulacija virusnog genetskog materijala, ali apsolutne vrijednosti ostaju vrlo beznačajne, što mnogim istraživačima daje osnovu da govore o nepotpunoj replikaciji virusa hepatitisa A u kulturama tkiva.

Sumirajući podatke iz literature o reprodukciji virusa hepatitisa A u ekstratkivnim kulturama, može se reći da je činjenica dugotrajnog preživljavanja HAV-a in vitro nesumnjiva. Optimalni uvjeti za stabilnu visoku razinu replikacije virusa nisu konačno identificirani, što otežava proučavanje njegovih bioloških svojstava, dobivanje izvora reagensa za proizvodnju dijagnostičkih sredstava i dizajn cjepiva.

Istovremeno, u literaturi se mogu pronaći optimističniji stavovi o ovom problemu. Rješenje svih pitanja vezanih uz uzgoj virusa hepatitisa A stvar je bliske budućnosti. Prilikom proučavanja optimalnih uvjeta za reprodukciju HAV-a u kulturi embrionalnih stanica bubrega rezus makakija identificirane su dvije faze: faza proizvodnje zaraznog virusa (do 6-8 dana na razini 5. pasaže) i faza intenzivnog nakupljanja virusnog antigena. Također je pokazano da se najznačajnije nakupljanje virusnog antigena događa u uvjetima tzv. kultivacije valjcima (rotirajućih tikvica). Ova metoda otvara široke mogućnosti za dobivanje kulturnog antigena u velikim količinama, a posljedično će se pojaviti i izvorni materijal za pripremu dijagnostičkih sustava i proizvodnju cjepiva.

Epidemiologija hepatitisa A

Virus hepatitisa A je visoko patogen za ljude. Prema WHO-u (1987.), infekcija samo jednim virionom dovoljna je za uzrok bolesti. Međutim, praktična zarazna doza vjerojatno je mnogo veća. Jedini izvor infekcije je zaražena osoba. Virus se izlučuje u velikim količinama stolicom 12-14 dana prije pojave žutice i tijekom 3 tjedna ikteričnog razdoblja. Nisu pronađene značajne razlike u izlučivanju patogena kod pacijenata s ikteričnim, anikteričnim i asimptomatskim oblicima hepatitisa A. Put infekcije je fekalno-oralni, uglavnom putem vode, kao i kućni i alimentarni. Put infekcije je fekalno-oralni, uglavnom putem vode, kao i kućni i alimentarni. Glavni (primarni) put prijenosa virusa je putem vode. Moguća je i infekcija kapljicama iz zraka. Osjetljivost populacije je univerzalna. Uglavnom su pogođena djeca mlađa od 14 godina. Bolest ima izraženu jesensko-zimsku sezonalnost.

[ 8 ], [ 9 ], [ 10 ], [ 11 ], [ 12 ], [ 13 ], [ 14 ], [ 15 ]

Simptomi hepatitisa A

Inkubacija varira od 15 do 50 dana, ovisno o infektivnoj dozi virusa, ali u prosjeku iznosi 28-30 dana. Jednom kada uđe u tijelo, virus hepatitisa A se razmnožava u regionalnim limfnim čvorovima, prodire u krv, a zatim u stanice jetre i uzrokuje akutni difuzni hepatitis, koji je popraćen oštećenjem hepatocita i retikuloendotelnih elemenata jetre te smanjenjem njezine detoksikacijske i barijerne funkcije. Oštećenje hepatocita ne nastaje zbog izravnog djelovanja virusa, već kao rezultat imunopatoloških mehanizama. Najtipičnija slika hepatitisa A je akutni ikterični ciklički oblik: inkubacijsko razdoblje, prodromalno (predikterično), ikterično razdoblje i rekonvalescencija. Međutim, u žarištima infekcije otkriva se veliki broj pacijenata s anikteričnim i asimptomatskim oblicima infekcije, čiji broj značajno prevladava nad ikteričnim ("fenomen ledenog brijega").

Imunitet nakon infekcije je jak i dugotrajan, uzrokovan antitijelima koja neutraliziraju virus i stanicama imunološke memorije.

Mikrobiološka dijagnostika hepatitisa A

Dijagnostika hepatitisa A (osim infekcije životinja - čimpanza, marmozeta, babuna, koje nemamo) temelji se na raznim imunološkim metodama: RSC, imunofluorescentna metoda, hemaglutinacija imunološke adhezije (kompleks virusnog antigena + antitijela u prisutnosti komplementa adsorbira se na eritrocite i uzrokuje njihovo lijepljenje). Međutim, mogućnosti korištenja ovih metoda su ograničene zbog nedostatka specifičnih virusnih antigena, a imunofluorescentna reakcija zahtijeva biopsiju jetre, što je nepoželjno. Metoda imunološke elektronske mikroskopije je pouzdana i specifična, ali je vrlo radno intenzivna. Stoga je do sada jedina prihvatljiva imunološka reakcija metoda imunosorbentne analize čvrste faze u obliku IFM-a ili RIM-a, posebno u modifikaciji "hvatanja" imunoglobulina klase M. U našoj zemlji za tu svrhu predložen je testni sustav - "DIAGN-A-HEP". Princip rada ovog testnog sustava je sljedeći. Prvo se antitijela na imunoglobuline klase M (antiimunoglobulini M) sorbiraju na stijenkama polistirenskih jažica, zatim se dodaje pacijentov serum koji se testira. Ako sadrži IgM antitijela, ona će se vezati na antiantitijela klase M, a zatim se dodaje specifični virusni antigen (virus hepatitisa A), koji se dobiva uzgojem u staničnoj kulturi. Sustav se ispire i dodaju mu se antivirusna antitijela obilježena peroksidazom hrena. Ako sve četiri komponente sustava međusobno djeluju, formira se četveroslojni "sendvič":

• antiimunoglobulini M,
• imunoglobulini M (protiv virusa hepatitisa A - u serumu pacijenta koji se proučava),
• virusni antigen,
• enzimski obilježena antivirusna antitijela.

Za detekciju ovog kompleksa, u jažice se dodaje supstrat za enzim. Pod utjecajem enzima, on se uništava i nastaje obojeni produkt. Intenzitet boje može se kvantitativno izmjeriti spektrofotometrom ili fotokolorimetrom.

Prednost metode "hvatanja" IgM je u tome što se antitijela ove klase imunoglobulina pojavljuju tijekom primarnog imunološkog odgovora i ukazuju na aktivnu fazu infekcije, a nestaju nakon preboljele bolesti. Antivirusna antitijela koja pripadaju IgG klasi, naprotiv, perzistiraju dugo nakon preboljele bolesti, osiguravajući stečeni imunitet. Za detekciju virusa hepatitisa A predložena je metoda DNA sonde: kao sonda koristi se komplementarna vRNA DNA.

Liječenje hepatitisa A

Zbog činjenice da je kod virusnog hepatitisa poremećena proizvodnja interferona, liječenje hepatitisa A temelji se na primjeni interferona i induktora njegove endogene sinteze, amiksina.

Specifična prevencija hepatitisa A

Prethodno široko korištena seroprofilaksa hepatitisa A gama globulinom nije se opravdala, stoga je glavni naglasak stavljen na provođenje cijepljenja i profilakse, provodi se cijepljenje protiv hepatitisa A. U tu svrhu razvijaju se i već se koriste različite vrste cjepiva. U Rusiji je učinkovito cjepivo protiv hepatitisa A dobiveno još 1995. godine i sada se uspješno koristi.