Virus hepatitisa A.

Virusni hepatitis A je ljudska infektivna bolest karakterizirana dominantnim oštećenjem jetre i očituje se klinički opijenost i žutica. Hepatitis A virus je otkriven 1973. S. Feynstonom Koristeći metodu imunološkog elektronske mikroskopije i inficiranjem majmuna (i sur.) - čimpanze i majmunima. Postupak imuni elektronska mikroskopija je da izmet u filtrat se doda hepatitis Pacijent specifična antitijela (konvalescentnim serumom) i talog je podvrgnut elektronskim mikroskopom. Zbog interakcije virusa s specifičnim protutijelima, oni prolaze specifičnu agregaciju. U tom slučaju, lakše je detektirati, a agregacija pod utjecajem protutijela potvrđuje specifičnost patogena. Otkriće S. Feinstonea potvrđeno je u pokusima na volonterima.

Virus hepatitisa A ima sferični oblik, promjer viriona je 27 nm. Genom je predstavljen jednostranom pozitivnom RNA s masom od 2,6 MD. Supercapsid je odsutan. Simetrija je kubični icozaedar. Kapsid ima 32 kapsomera, formira ga četiri polipeptida (VP1-VP4). Svojim svojstvima virus hepatitisa A spada u rog Heparnovirus, obitelj Picornaviridae. Antigeno, virus hepatitisa A (HAV-hepatitis A virus) je homogeno. HAV se dobro umnožava u tijelu čimpanza, babuona, hamadrila i kockarnica (marmosets). Dugo vremena virus se nije mogao kultivirati. Tek osamdesetih godina. Bilo je moguće dobiti stanične kulture u kojima se HAV propagira. U početku se koristi za te svrhe, besmrtna embrionalne stanice bubrega rezus makak (kultura FRhK-4), a sada - presadili stanice bubrega zelenog majmuna (Kultura 4647).

Prema preporukama stručnjaka koji donijela nomenklaturom hepatitis A virus markera: hepatitis A virus - su Nau antitijela na virus hepatitisa A: anti-HAV IgM i IgG anti-HAV.

HAV su male čestice s promjerom od 27-30 nm, imaju icozaedarsku simetriju i posjeduju homogenost. Na difrakcijskom uzorku elektrona dobivenom metodom imunološke agregacije detektiraju se elektronske guste čestice s površinski smještenim simetrično raspoređenim kapsomima. S negativnim kontrastom, prepoznate su i potpune i prazne čestice u pripravcima. Nukleokapsidni NAV, za razliku od one influence, nema površinske izbočine i membrane. Također je važno da virion HAV nema srčanu strukturu.

Prema njegovim fizikalno-kemijskih svojstava Hepatitis A virus je u vezi s obitelji Picornaviridae, rod enterovirus s atomskim brojem 72. Međutim, ova taksonomija je previše neobično, a kojima je to bilo moguće ostaviti terminologiji „Hepatitis A virus”.

Kao i svi virusi obitelji Picornaviridae, virus hepatitisa A sadrži ribonukleinsku kiselinu. Neki laboratoriji pokazali su mogućnost kloniranja genoma virusa hepatitisa A, koji otvara mogućnost dobivanja pripravaka za cjepivo.

[1], [2], [3], [4], [5], [6], [7],

Otpornost na hepatitis A virus

Virus je relativno otporan na visoke temperature, kiseline, otapala masnoća (nema lipida), dezinficijensi, tolerira nisku temperaturu. Sve to doprinosi dugoročnom očuvanju u vanjskom okruženju. Na sobnoj temperaturi, preživljava nekoliko tjedana, na 60 ° C djelomično gubi infektivnost nakon 4-12 sati, potpuno - nakon nekoliko minuta na 85 ° C. Vrlo je otporan na klor, zbog čega može prodrijeti kroz vodu iz slavine kroz barijere postrojenja za obradu vode.

Sažimajući sve podatke možemo opisati virus hepatitisa A kako slijedi:

• prirodni gospodar je čovjek;
• eksperimentalne životinje - marmozet, čimpanza;
• izvor zaraze - izmet;
• bolesti - epidemija i endemična;
• put prijenosa je fekalno-usmeni;
• razdoblje inkubacije - 14-40 dana;
• prijelaz na kronični hepatitis - nije zabilježen.

Imunološka svojstva NAV su kako slijedi:

• Prototipe sojevi - MS-1, CR-326, GVG. Svi su imunološki slični ili identični;
• Protutijela - IgM i IgG, proizvedena su kao odgovor na uvođenje strukturnih proteina virusa i zaštitni su;
• I Trofično djelovanje humanog seruma y-globulin - štiti ili smanjuje bolest pod uvjetima primjene prije infekcije ili tijekom perioda inkubacije.

Fizičko-kemijska svojstva NAU su kako slijedi:

• Morfologija je ne-ljuska sferična čestica s kubnom simetrijom, kapsid se sastoji od 32 kapsomera;
• Promjer je 27-30 nm;
• Gustoća u CsCl (g / cm3) je 1,38-1,46 (otvorene čestice), 1,33-1,34 (zreo virion), 1,29-1,31 (nezreli virioni, prazne čestice);
• Sedimentacijski koeficijent je 156-160 zrelih viriona;
• Nukleinska kiselina - jednolančana, linearna RNA;
• Relativna molekulska masa - 2,25 106-2,8 106KD;
• Broj nukleotida je 6.500-8.100.

Stabilnost NAV u fizikalno-kemijskim učincima je kako slijedi:

• Kloroform, eter - je stabilan;
• Klor, 0,5-1,5 mg / l, 5 ° C, 15 min - djelomična inaktivacija;
• Kloramina, 1 g / 1, 20 ° C, 15 min - potpunu inaktivaciju;
• Formalin, 1: 4000, 35-37 °, 72 sata - potpunu inaktivaciju, 1: 350, 20 °, 60 min - djelomična inaktivacija.

Temperatura:

• 20-70 ° C - stabilna;
• 56 ° C, 30 minuta - to je stabilno;
• 60 ° C, 12 sati - djelomična inaktivacija;
• 85 ° C, 1 min - puna inaktivacija;
• Autoclaviranje, 120 ° C 20 minuta - potpunu inaktivaciju;
• Suha toplina, 180 ° C, 1 h - potpunu inaktivaciju;
• UV, 1,1 W, 1 min - potpunu inaktivaciju.

Prikazani podaci pokazuju da su fizikalno-kemijske osobine virusa hepatitisa A najbliže enterovirusima. Kao i drugi enterovirusi, HAV je otporan na mnoga dezinfekcijska otopina, potpuno inaktivirana nekoliko minuta na 85 ° C i autoklavirana.

Pokazalo se da je hepatitis A virus može reproducirati u osnovnim i kontinuiranim kulturama jednoslojni ljudskim staničnim linijama, i majmuna. Posebno aktivni umnožavanje virusa hepatitisa A. U in vitro kulturama opaža kada se koristi kao početni materijal ekstrakata jetre pacijenata majmuna. Međutim, treba napomenuti da je u svim pokusima u skladu s reprodukciju virusa hepatitisa A. U in vitro kulturama spomenuti dugi inkubacijski period u osnovnim prolaza (-10 do 4 tjedna), potom nakupljanje virusnih genskih materijala povećava, ali apsolutne vrijednosti su jako manji koja dovodi do mnogih istraživača govoriti o nepotpunom replikacije virusa hepatitisa A u kulturama tkiva.

Sažimajući literaturne podatke o reprodukciji virusa hepatitisa A iz ne-korijenskih kultura, može se reći da je činjenica dugotrajnog iskustva HAV in vitro neupitna. Konačno nisu identificirane optimalne uvjete za stabilnu visoku razinu virusne replikacije, što ograničava proučavanje njezinih bioloških svojstava, proizvodnju izvora reagensa za proizvodnju dijagnostičkih sredstava i dizajn cjepiva.

Istovremeno, više se optimističnih prosudbi o ovom problemu mogu naći u literaturi. Rješenje svih pitanja vezanih uz uzgoj hepatitisa A je stvar u bliskoj budućnosti. Pri proučavanju optimalni uvjeti HAV razmnožavanje u kulture stanica embrionalnog bubrega rezus majmuna su pokazale dvije faze: faza infektivnog proizvodnje virusa (do 6-8 dana na 5 prolaza) i faze intenzivnog nakupljanja virusni antigen. Također je pokazano da se najznačajnija akumulacija virusnog antigena javlja u uvjetima tzv. Kultiviranja valjaka (rotirajuće boce). Na taj način se otvaraju široke mogućnosti dobivanja kulturnog antigena u velikim količinama, pa će se pojaviti polazni materijal za pripremu dijagnostičkih sustava i proizvodnju pripravaka cjepiva.

Epidemiologija hepatitisa A

Virus hepatitisa A ima visoku patogenost kod ljudi. Prema zaključku WHO (1987), za početak bolesti, dovoljno je zaraziti samo jedan virion. Međutim, praktična infektivna doza vjerojatno je mnogo veća. Izvor infekcije je samo zaražena osoba. Virus se u velikim količinama oslobađa izmetom 12-14 dana prije pojave žutice i unutar 3 tjedna. Razdoblju. Značajne razlike u izolaciji patogena u bolesnika s icteric, žutica i asimptomatskih oblika hepatitisa A nisu identificirani. Metoda infekcije je fekalno-usmena, uglavnom vodena, ali i domaćinstva i prehrambenih puteva. Metoda infekcije je fekalno-usmena, uglavnom vodena, ali i domaćinstva i prehrambenih puteva. Glavna (primarna) ruta prijenosa virusa je voda. Također je moguće zaraziti zrakom. Osjetljivost populacije je univerzalna. Uglavnom su djeca mlađa od 14 godina bolesna. Bolest ima izraženu jesensko-zimsku sezonu.

[8], [9], [10], [11], [12], [13], [14], [15]

Simptomi hepatitisa A

Inkubacija je u rasponu od 15 do 50 dana, ovisno o veličini doze infektivnog virusa, ali prosječno 28-30 dana. Nakon što se u tijelu, hepatitis A virus replicira u regionalnim limfnim čvorovima, u krvi, a zatim i stanice jetre uzrokuje akutni hepatitis difuzno koji je priložen lezija jetre hepatocitima i retikuloendotelnog stanica i smanjenje njegove detoksikacije i barijera funkcije. Oštećenja hepatocita nastaje ne zbog izravnog djelovanja virusa, kao rezultat immunopathological mehanizama. Najtipičniji slika hepatitisa A je akutni ikteričan ciklički oblik: inkubacija je prodromalnom (preicteric), žutica i oporavak period. Međutim, u žarišta zaraze otkriva veliki broj pacijenata s asimptomatskim i anicteric oblika infekcije, čiji je broj dominira nad ikteričan ( „ledenjaka fenomen”).

Post-infektivni imunitet je jak i dugotrajan, uzrokovan virusnim neutralizirajućim protutijelima i stanicama imunosne memorije.

Mikrobiološka dijagnoza hepatitisa A

Dijagnoza hepatitisa A (osim infekcije životinja - čimpanzi marmozet, pavijana, koje smo) temelji se na različitim imunološkim postupcima: DGC postupkom imunofluorescencije, hemaglutinacije imunološki adhezije (kompleks antigena virusa + protutijela u prisutnosti komplementa adsorbirana na eritrocite i uzrokuje njihovo prijanjanje) , Međutim, primjenjivost tih metoda je ograničena zbog nedostatka određenih virusnih antigena i imunofluorescencije reakcije zahtijeva biopsije jetre, što je nepoželjno. Pouzdan i specifičan je način imunološke elektronske mikroskopije, ali je vrlo naporan. Stoga, dok se samo prihvatljiv postupak za imunološku reakciju je imunosorbent testa krute faze u obliku IPM ili RIM, posebno u modifikacije „hvatanje” imunoglobulinskih M. U našoj zemlji za tu svrhu predlaže sustav za ispitivanje - „diag-A-GEO”. Radni princip ovog ispitnog sustava je sljedeći. Na stijenkama prve polistirena lunochek sorbira antitijela imunoglobulina klase M (antiimmunoglobuliny M) se zatim doda u ispitivanom serumu pacijenta. Ako postoji razred protutijela IgM, oni će se vezati na protutijelo-Ti-M, a zatim doda u određenu virusni antigen (hepatitis A virus), koji je dobiven raste u kulturi stanica. Sustav se ispire i dodaju se antivirusna antitijela obilježena s hrena peroksidazom. Ako sve četiri komponente sustava komuniciraju, pojavljuje se četveroslojni "sendvič":

• antiimunoglobulini M,
• imunoglobulini M (protiv virusa hepatitisa A - u testnom serumu pacijenta),
• virusni antigen,
• antivirusna antitijela obilježena enzimom.

Da bi se detektiralo ovaj kompleks, u lunete se dodaje supstrat enzima. Pod utjecajem enzima uništava se i proizvodi se obojeni proizvod. Intenzitet boje može se kvantitativno mjeriti spektrofotometrom ili fotokolorimetrom.

Prednost metode "hvatanja" IgM je da se antitijela ove klase imunoglobulina pojavljuju na primarnom imunološkom odgovoru i ukazuju na aktivnu fazu infekcije, oni nestaju nakon prenesene bolesti. Antivirusna protutijela koja pripadaju klasi IgG, za razliku od toga, dugo ostaju nakon bolesti, osiguravajući stečenu imunost. Za detekciju virusa hepatitisa A predložena je metoda DNA probe: kao proba koristi se komplementarna vRNA sonda.

Liječenje hepatitisa A

Zbog činjenice da je proizvodnja interferona poremećena u virusnom hepatitisu, liječenje hepatitisa A temelji se na korištenju interferona i induktora njegove endogenog sinteze amixina.

Specifična prevencija hepatitisa A

Prije široko primjenjuje seroprevention hepatitis A pomoću gammaglobulin nije opravdana, međutim, naglasak je stavljen na gospodarstvu imunizacije, provedeno cijepljenje protiv hepatitisa A. U tu svrhu razvijaju se različite varijante cjepiva i već se koriste. U Rusiji je djelotvorno cjepivo protiv hepatitisa A dobiveno još 1995. Godine, a sada se uspješno primjenjuje.