13c ureazni test: priprema, rezultati, pozitivno, negativno

Od otkrića bakterije Helicobacter pylori povezane s kroničnim gastritisom i ulkusom želuca i dvanaesnika, razvijene su dijagnostičke metode, uključujući ureazni test, koji omogućuje otkrivanje ovih mikroorganizama kod određenog pacijenta, potvrđivanje njihove uključenosti u razvoj gastrointestinalnih bolesti i propisivanje učinkovitog liječenja.

Enzim ureaza kao biomarker Helicobacter infekcije

Bakterije H. pylori štite se od kiselog okoliša u lumenu želuca na dva načina. Prvo, oštećujući sluznicu svojim flagelama, mikroorganizmi dosežu njezine donje slojeve, sve do epitelnih stanica, gdje je pH viši (tj. kiselost je niža). Drugo, bakterije neutraliziraju kiselinu sintetizirajući velike količine katalitički aktivnog visokomolekularnog metaloenzima ureaze ili urea amidohidrolaze.

Upotreba ureaze u dijagnozi Helicobactera moguća je ne samo zbog citoplazmatske aktivnosti ovog enzima, već i zbog vanjske interakcije s stanicama domaćina.

Pod djelovanjem ureaze dolazi do razgradnje želučane uree na vodikov nitrid (amonijak) i ugljikov dioksid (ugljikov dioksid). Oni reagiraju s klorovodičnom kiselinom u želučanom soku i osiguravaju zonu neutralne kiselosti oko H. pylori, a također podržavaju metabolizam bakterijskih stanica.

Zato je ureaza najvažniji faktor u kolonizaciji H. pylori u ljudskoj želučanoj sluznici, a otkrivanje ureolitičke aktivnosti smatra se biomarkerom virulencije ove bakterije, koji gastroenterolozi – provođenjem ureaznog testa – koriste za dijagnosticiranje infekcije Helicobacterom, kao i za praćenje rezultata uništavanja (eradikacije) bakterija induciranog lijekovima.

Dijagnostika H. pylori infekcije uključuje invazivne i neinvazivne testove - ovisno o tome je li potreban endoskopski pregled želuca (fibrogastroduodenoskopija) ili ne. Invazivni test je brzi ureazni test ili ekspresni ureazni test (RUT-test), koji zahtijeva uzimanje uzoraka tkiva (biopsija). 13C ureazni test daha (13C-UBT) je najčešći neinvazivni test.

Treba napomenuti da se neinvazivna dijagnostika H.pylori može provesti pomoću krvnog testa na antitijela (specifičnost na razini od 75%, osjetljivost - 84%), ELISA testa urina (s osjetljivošću od 96% i specifičnošću od 79%) i koprograma za bakterijske antigene. Više informacija - Infekcija Helicobacter pylori: antitijela na Helicobacter pylori u krvi

[ 1 ], [ 2 ], [ 3 ], [ 4 ], [ 5 ], [ 6 ], [ 7 ]

Indikacije za postupak ureazni test

Kolonizacija želučane sluznice bakterijom H. pylori sama po sebi nije bolest; ona je faktor povećanog bakterijskog opterećenja tijela, što pod određenim uvjetima može potaknuti razvoj niza patologija želuca i gornjeg gastrointestinalnog trakta.

Indikacije za dijagnostiku Helicobacter infekcije, posebno ureazni test, povezane su s gastritisom s povećanom kiselošću, antralnim i atrofičnim gastritisom, duodenitisom, ulkusom želuca i dvanaesnika, MALT limfomom želuca. Nakon endoskopske resekcije raka želuca u ranom stadiju, histološki pregled može se provesti u kombinaciji s brzim ureaznim testom - FGDS s ureaznim testom.

Gastroenterolozi mogu propisati ureazni test ako se pacijenti žale na osjećaj težine i nelagode u epigastričnoj regiji, čestu žgaravicu nakon jela, kiselo ili trulo podrigivanje, gorčinu u ustima, mučninu, crijevne poremećaje, bol ili grčeve u želucu.

[ 8 ], [ 9 ]

Priprema

Priprema za 13C urea test daha sastoji se od prestanka uzimanja antibiotika 4 tjedna prije testa, te NSAID-a, inhibitora protonske pumpe (koji smanjuju kiselost želuca) i antacida ili adsorbenata koji se koriste za žgaravicu - najmanje dva tjedna prije. Uzimanje bilo kakvih lijekova treba prekinuti pet do šest dana, a pijenje alkohola i pušenje - tri dana prije testa.

Također se preporučuje izbjegavanje jedenja mahunarki otprilike tjedan dana prije testiranja, jer grah, grašak, leća, soja i grah sadrže ureazu (koja štiti biljke od bolesti i štetnika).

Večer prije testa, kasna teška večera je kontraindicirana; na dan testiranja trebali biste obavljati normalnu oralnu higijenu, a sat i pol prije testa ne biste trebali ništa piti niti koristiti žvakaće gume.

[ 10 ], [ 11 ], [ 12 ], [ 13 ], [ 14 ]

Tehnika ureazni test

Tehnika provedbe:

• Prvo se uzima osnovni uzorak disanja - izdisaj se stavlja u meku plastičnu posudu (i hermetički zatvara);
• tekućina s dodatkom 13C-uree uzima se oralno;
• Nakon 25-30 minuta, uzima se drugi uzorak izdahnutog zraka u drugu posudu.

Uzorci dobiveni na ovaj način analiziraju se na masenom spektrometru s odvajanjem izotopa u drugom uzorku i određivanjem njihove koncentracije. Razlika između vrijednosti u drugom i prvom uzorku izražava se kao delta (δ) u usporedbi s osnovnom razinom. Normalne vrijednosti, tj. negativne vrijednosti označenog atoma 13C kod neinficiranih pacijenata variraju od 0,15-0,46%, a pozitivne vrijednosti u prisutnosti infekcije su 1,2-9,5% uz brzinu hidrolize uree veću od 12-14 μg/min.

Jednostavno rečeno: detekcija ugljikovog dioksida obilježenog s 13C u izdahnutom zraku ukazuje na to da je urea hidrolizirana enzimom ureazom H. pylori, što, zapravo, potvrđuje činjenicu njezine prisutnosti u želucu.

H. pylori test daha

13C-UBT test ili 13C urea test daha za Helicobacter pylori jedna je od najvažnijih neinvazivnih metoda za otkrivanje ove infekcije: sa 100% osjetljivosti i 98% specifičnosti, rizik lažno pozitivnih i lažno negativnih rezultata u usporedbi s histologijom i testiranjem krvi na antitijela je 2,3% niži.

Analiza se temelji na hidrolizi oralno primijenjene tekuće uree obilježene atomom ugljika (stabilni neradioaktivni izotop) 13C (50-75 mg 13C-uree razrijeđene u 100 ml tekućine) pomoću H. pylori ureaze.

Urea obilježena izotopnim indikatorom podliježe hidrolizi u želucu uz oslobađanje amonijaka i ugljikovog dioksida koji sadrži obilježene atome, koji difundira u krv i izlučuje se iz pluća tijekom disanja. Obilježeni ugljikov dioksid bilježi se analitičkim uređajem - masenim spektrometrom, čiji se rad temelji na nedisperzivnoj izotopsko-selektivnoj spektroskopiji, ili infracrvenim spektroskopskim analizatorom.

Brzi ureazni test

Brzi ureazni test (RUT) provodi se tijekom endoskopskog pregleda želuca i dvanaesnika - korištenjem modernih endofibroskopa - i istovremenim uzimanjem uzoraka biopsije. Biomaterijal se uzima iz antralnog dijela želuca. Dakle, fibrogastroduodenoskopija ili FGDS s ureaznim testom je invazivna dijagnostička metoda.

Dobiveni biopsijski uzorak se potpuno uroni u pripremljeni standardizirani medij koji sadrži agar-agar, ureu, acidobazni indikator fenolsulfoftalein i bakteriostatsko sredstvo (dodano radi sprječavanja rasta kontaminirajućih mikroorganizama i lažno pozitivnih rezultata).

Ako su bakterije H. pylori prisutne u uzorku želučanog tkiva, ureaza koju proizvode hidrolizirat će ureu i povisiti pH, što je jasno vidljivo kako se indikator mijenja iz žute u narančastu (pri pH 6,8) i ljubičastu (pri pH > 8). 75% pozitivnih testova mijenja boju unutar 120-180 minuta, a što brže indikator mijenja boju, to je veći broj bakterija. Ali testovi koji izgledaju negativno čuvaju se 24 sata.

Brzi test ureaze pozitivan, što to znači? Pozitivan RUT test – indikator postaje crven – znači da uzorak biopsije stavljen u agar-agar medij sadrži najmanje 105 bakterija H. pylori, iako je njihova koncentracija obično veća.

Osjetljivost različitih modifikacija testa varira u rasponu od 90-98%, a specifičnost - 97-99%.

Kako su primijetili gastroenterolozi, ako pacijentov zaključak ukazuje na oštro pozitivan ureazni test (tri križića), to znači: pH> 8, a indikator je promijenio boju za manje od 60 minuta od trenutka uranjanja biopsije, što ukazuje na veliki broj H.pylori i visoku razinu ekspresije ureaze. Približan broj bakterija može se prebrojati tijekom histološkog pregleda biopsije pod mikroskopom, a ako prelazi 40-50 u vizualiziranom području, razina infekcije smatra se visokom.

13C urea u dahu rijetko daje lažno pozitivne rezultate, a kod pacijenata sa sumnjom na ulkus želuca ili dvanaesnika, jedan pozitivan test se smatra potvrdom dijagnoze, dok negativan rezultat treba potvrditi EGD-om s urea testom.