Imunološka istraživanja u urologiji

Dodjeljivanje imunograma urološkom pacijentu znači da liječnik pohađa prisutnost poremećaja u imunološkom sustavu. Dvostruke virusne, gljivične infekcije, alergijske reakcije, sistemske bolesti mogu biti su simptomi, koji se odlikuju velikom broju sindroma (infekcija, rak alergijskog, autoimunog, limfoproliferacijsku). Jedan pacijent može imati više sindroma. Na primjer, kronične bolesti (infektivni infektivne sindrom) mogu dovesti do imune deficijencije imuniteta i može se manifestirati sklonost infektivnih bolesti i raka (Cancer sindrom). Osjetljivosti na infekcije se mogu pojaviti na pozadini sekundarne imunodeficijencije, koja je razvila zbog Limfoproliferacijski bolesti, kao što je leukemija. Postoje tri glavne skupine patoloških promjena u imunološkom sustavu:

• kvantitativna ili funkcionalna insuficijencija jedne ili druge veze imuniteta, što dovodi do razvoja imunodeficijenskog stanja;
• kršenje priznavanja antigena imunosnim sustavom, što dovodi do razvoja autoimunih procesa;
• hiperreaktivno ili "perverzno" imunološki odgovor, koji se manifestira razvojem alergijskih bolesti.

Postoje screening (testovi razine 1) i kvalifikacija (testovi na 2 razine) metode imunodijagnostike. Prvi postoje kako bi se ispravile kršenja imunološkog sustava, potonje - utvrditi mehanizme koji su uključeni u njihovu provedbu u svrhu daljnjeg imunološkog ispravljanja.

B-Stanična veza imuniteta

Metode probira

• Određivanje relativne i apsolutne broja B-limfocita preko imunoflorescencijom ili protočnom citometrijom pomoću monoklonskih antitijela za B-stanice antigena (CD19, CD20, naznačena time, CD - nakupina diferencijacije). Sadržaj B limfocita je normalno kod odraslih: 8-19% od ukupnog broja leukocita ili 190-380 stanica / ul. Povećanje sadržaja B limfocita pojavljuje u akutnim i kroničnim bakterijske i gljivične infekcije, kronične bolesti jetre, bolesti vezivnog tkiva sistemski, kronična limfocitna leukemija, multipli mijelom.
• Određivanje koncentracije imunoglobulina nespespetsificheskih (F, M, G, E) prema jednom radijalnom imunodifuzija ili turbometrii nefelometrijskim, radioimunološka ili enzimskom imunoanalizom (EIA). Norme za odrasle: imunoglobulin (Ig) A 0,9-4,5 g / l. IgM 03-3,7 g / l. IgG 8,0-17 g / l. Povećanjem koncentracije imunoglobulina javlja kod iste patoloških stanja za koja se odvija je povećanje sadržaja B limfocita. Smanjujući koncentraciju imunoglobulina u kongenitalnoj hipogamaglobulinemije, tumori imunološkog sustava, uklanjanje slezene, gubitka proteina, za bolesti bubrega ili crijeva, liječenja i citostatika immunodepreesantami.

Određivanje metoda

• Određivanje cirkulirajućih krvi imunosnih kompleksa selektivnim taloženjem u poliztilenglikole s naknadnim spektrofotometrijski gustoće analiza (stopa od 80-20 CU). Povećana kruži imunosnih kompleksa je karakterističan za akutne bakterijskih, gljivičnih, virusnih infekcija, autoimunih bolesti, imunokompleksa serumsku bolest, alergijske reakcije tipa 3;
• Određivanje specifičnih imunoglobulina u krvi u odnosu na bakterijskih i virusnih antigena, deoksiribonukleinske kiseline (DNA) u autoimunim bolestima, identifikacija sperme (autoimuni) i neplodnosti protivopochechnyh antitijela (pijelonefritis i glomerulonefritis) radijalnom imunodifuzija ili ELISA.
• Određivanje antispermnih antitijela u spermi [MAR-test (mješovita antiglobulinska reakcija)], norma je negativna.
• Određivanje koncentracije imunoglobulina u mokraći u svrhu diferencijalne dijagnostike između pijelonefritisa i glomerulonefritisa (selektivnost proteinurije).
• Određivanje IgE u soku prostate za dijagnozu alergijskog prostatitisa radijalnom imunodifuzija ili ELISA. 
• Istraživanje u odgovoru blasttransformation reakciji B limfocita na B stanice mitogenom (kermesa mitogen za stimulaciju blasttransformation reakcije B-limfocit u prisutnosti T-limfocita), pri čemu je standardna vrijednost 95-100%.

T-stanična veza imuniteta

Metode probira

• Određivanje relativne i apsolutne broja zrelog CD3 T limfocita imunoflorescencijom ili protoka cytofluorometry koristeći anti-SDZ monoklonskih antitijela. Norma za odrasle je 58-76% ili 1100-1700 stanica / μl. Smanjenje broja T-limfocita imunosti pokazivač kvara stanica. Ovo je karakteristika nekoliko sekundarnih i primarnih imunodeficijencija (kroničnih bakterijskih i virusnih infekcija: tuberkuloze, sindroma stečene imunodeficijencije, raka, kronične insuficijencije bubrega, traume, stres, starenje, pothranjenost, liječenje sa citotoksičnim lijekovima, ionizirajuće zračenje). Povećanjem broja limfocita T je u pozadini imunog hiperaktivnosti ili limfoproliferativnih bolesti. Uz upalu, broj T-limfocita prvi se povećava, a zatim smanjuje. Nedostatak smanjenja T-limfocita ukazuje na kronicizaciju upalnog procesa.
• Procjena subpopulacija limfocita.
  • Određivanje broja T-pomoćnih stanica (anti-CD4 protutijela). Inače, 36-55% ili 400-1100 stanica / ml. Povećanjem broja tih stanica odvija u autoimune bolesti, Waldenstromovu bolesti, imunološki aktivacije antitransplantatsionnogo; smanjenje broja T-helper stanice se javlja kod kroničnih bakterijskih, virusnih infekcija, protozoa, tuberkuloze, sindroma stečene imunodeficijencije, malignih bolesti, opeklinama, traumama, malnutricija, starenje, citostatika, liječenje ionizirajućeg zračenja.
  • Određivanje broja T-supresora (anti-CD4 protutijela). Normalno, 17-37% ili 300-700 stanica / μl. Povećanje broja T-supresora javlja se pod istim uvjetima u kojima se broj T-pomoćnika smanjuje i njihovo smanjenje pod istim uvjetima kada se povećava sadržaj T-pomoćnika.
  • Imunoregulacijski indeks CD4 / CD8 u normi 1,5-2,5. Hiperaktivnost po stopama više od 2,5 (alergijske i autoimune bolesti); hipoaktivnost - manja od 1,0 (predispozicija za kronične infekcije). Na početku upalnog procesa, imunoregulacijski indeks raste, a kad potonu, normalizira se.

Određivanje metoda

• Određivanje broja prirodnih ubojica (NK stanica) - anti-CD16 i anti-CD56-protutijela. Norma za CD 16-limfocite je 6-26%, CD56-9-19%. Povećanjem broja NK-stanica pojavljuje u odbacivanja transplantata, smanjenje - u virusne infekcije, rak, primarnim i sekundarnim imunodeficijencija opeklinama, traumama i stresa, obradom s citostaticima i ionizirajućeg zračenja. 
• Određivanje broja T limfocita s receptorom za interleukin-2 (aktivacijski marker) - anti-CD25 protutijela. Norma je 10-15%. Povećanje njihovog broja zabilježen u alergijskih bolesti, odbacivanje transplantata, kao odgovor na timusa ovisne antigene tijekom akutne primarne infekcije, smanjenje - ispod iste bolesti, koje uključuju smanjenje broja NK-stanica.
• Ispitivanje ekspresije aktivacijskog biljega - molekule histokompatibilnosti klase II HLA-DR. Povećana ekspresija javlja se u upalnim procesima, kod bolesnika s hepatitisom C, celijakije, sifilisa, akutnih respiratornih infekcija.
• Procjena apoptoze limfocita. Indikacija spremnosti apoptoze limfocita može se odrediti njihovom ekspresijom površinskih Fas receptora (CD95) u mitohondrijima i bd-2 protoonkogena. Apoptoza je procijenjena limfocita obradom dvije fluorescentne boje: propidiumjodidom, koji se veže na DNA fragmenata i aneksin Y, vezanje na fosfatidilserina na staničnoj membrani se pojavljuju u ranom apoptozom. Procjena rezultata provodi se na citofluorimetru protoka. Izračun rezultata temelji se na odnosu stanica obojenih različitim bojama. Neobojene stanice živih stanica, povezana samo s aneksin Y, - rane znakove apoptoze, s propidij jodidom, a aneksin I - kasni manifestacije apoptoze, bojanje samo propidijevog jodida označava nekroze.
• Procjena proliferacije T-limfocita in vitro.
  • Promjena stanične blastogeneze je reakcija blast-transformacije limfocita. Leukociti se inkubiraju s bilo kojim mitogenima biljnog podrijetla (lektini). Uobičajenije korištenje fitohemaglutinina 72 sata, a zatim nanesite mrlje, obojite ga i brojite eksplozije! Stimulacijski indeks - omjer postotka transformiranih stanica u kulturi eksperimenta (PHA) u postotku transformiranih stanica u kontroli (bez kulture PHA). Reakcija blast-transformacije limfocita može se procijeniti uključivanjem radioaktivne oznake (ZN-timnina) u kultivirane stanice, jer se sinteza DNA povećava kada se dijeli stanice. Poremećaji u proliferativnom odgovoru javljaju se i kod primarne i sekundarne imunodeficijencije povezane s infekcijama, onkološkim oboljenjima, insuficijencijom bubrega i kirurškim zahvatima.
  • Procjena ovih studija, ekspresija aktivacijskih markera CD25 (, transferin receptora na - CD71 molekula) i MHC klasa II HLA-DR, koji su uglavnom odsutni u mirujućih T-limfocita. T limfociti stimulirane s fitohemaglutininom nakon što je 3 dana ekspresije aktivacije markera analizirana direktnim ili indirektne imunofluorescencije, protočnom citometrijom pomoću monoklonskih protutijela luče receptora.
  • Mjerenje količine medijatora sintetizirati aktiviranim T limfocitima [interleukin (IL) 2, IL-4, IL-5, IL-6, gama-interferona, itd] radioimunotestiranjem ili ELISA. Posebno važno je procjena koncentracija y-interferon i IL-4 Th2 markera VI i u supernatantu kulture i aktiviran unutar stanice. Ako je moguće, to je korisno za određivanje ekspresije gena relevantnog za citokina razini glasničke ribonukleinske kiseline u treonin proizvodnju stanica i ekspresije receptora intenziteta za dotične citokina.
    
• Reakcija inhibicije migracije limfocita. Senzitizirani T-limfociti u reakciji s limfokinom oslobađanja antigena, uključujući čimbenike. Inhibirajući migraciju limfocita. Fenomen inhibicije opažen je kada se mitogeni uvode u kulturu stanica. Procjena stupnja inhibicije omogućuje procjenu sposobnosti limfocita da oslobode citokine. Uobičajeno, učestalost migracije, ovisno o specifičnom mitogenu, iznosi 20-80%.
• Procjena citotoksičnosti NK stanica. Odredite sposobnost prirodnih ubojitih stanica da ubiju ciljne stanice eritromieloidne linije K-562. Ako se procjenjuje citotoksičnost ovisna o antitijelima, koriste se ciljne stanice obložene IgG protutijelima. Ciljane stanice obilježene su s 3H-uridinom i inkubirane s efektorskim stanicama. Smrt ciljnih stanica procjenjuje se od otpuštanja radioaktivne oznake u otopinu. Smanjenje citotoksičnosti javlja se kod malignih neoplazmi. U nekim slučajevima, kada je potrebno prognozirati učinkovitost liječenja interleukinima, citotoksičnost NK stanica se procjenjuje kada se inkubira s određenim citokinima.

Istraživanje funkcije fagocita

Metode probira

Apsorpcija intenzitet fagociti Studija mikrobnih stanica (fagocitoza lateks čestica, ispitivane kulture aureus, Escherichia coli, ili mikroorganizama koji su izdvojeni iz pacijenta). Centrifugiranjem heparinizirane krvi leukociti dobiven suspenziju dodan serum za IV krvi opsonizacije (opsonini - proteina koji poboljšavaju fagocitozu). Suspenzija mikrobije razrijeđena je, pomiješana s leukocitima i inkubirana 120 min, uzorkovanje za analizu nakon 30.90.120 min nakon početka inkubacije. Od odabranih suspenzija leukocita nastaju razmazivanja. Odredite sljedeće pokazatelje fagocitoze:

• fagocitni indeks - postotak stanica koje su ušle u fagocitozu u 30 minuta i 120 min inkubacije; normativna vrijednost fagocitnog indeksa (30) 94% fagocitnog indeksa (120) - 92%;
• fagocitni broj - prosječan broj bakterija unutarstaničnog; normativna vrijednost fagocitnog broja (30) 11%, fagocitni broj (120) - 9,8%;  
• koeficijent fagocitnog broja - omjer fagocitnog broja (30) do fagocitnog broja (120); normalno 1,16;
• baktericidni indeks neutrofila je omjer broja mikroorganizama koji su ubijeni unutar fagocita do ukupnog broja preuzetih mikroba; u normi od 66%.

Određivanje metoda

• Istraživanje baktericidne aktivnosti fagocita u testu s nitrozin tetrazolijem (NST) je NST test. U leukocite je dodan zeleni oksid tetrazolium boja. Kada neutrofil prihvaća boju, proces redukcije odvija se pod djelovanjem slobodnih radikala kisika, što rezultira plavim bojenjem. Reakcija se provodi u pločici sa 96 jažica ravnog dna. U prve tri jažice s mješavinom HCT i leukocita, dodaje se Hanksova otopina (spontana HCT), u kasnije - čestice lateksa; inkubirati na 37 ° C tijekom 25 minuta. Rezultati se očitavaju na 540 nm na čitaču i izražavaju u konvencionalnim jedinicama. Izračunajte stimulacijski faktor (K _st ), jednak omjeru optičke gustoće u stimuliranim jažicama do prosječne optičke gustoće u jažicama bez stimulacije. U zdravih ljudi, _{HCT spont} = 90 ± 45 UE, NST _Stim = 140 ± 60 UE. K _st = 1,78 ± 0,36.
• Istraživanje adhezijskih molekula. Pomoću protoka citofluorimetrije određuje se ekspresija površinskih antigena CD11a / CD18, CD11b / CD18, CD11c / CD18. Imunodeficijencije s kršenjem adhezije očituju se rekurentnim infekcijama, sporo zacjeljivanje rana i odsutnost gnoja u infekcijama.

Istraživanje komplementarnog sustava

Metode probira

Određivanje hemolitičke aktivnosti komplementa - studija klasičnog puta aktivacije komplementa. Različita razrjeđenja seruma pacijenta i zdrave osobe se dodaju u eritrocite ovna prekrivenih protutijelima. Jedinica hemolitičke aktivnosti uzima se kao inverzno razrjeđivanje seruma, u kojem je uništeno 50% eritrocita. Stupanj hemolize se procijenjuje fotometrijski s prinosom hemoglobina u otopini. Smanjenje hemolitičke aktivnosti komplementa uočeno je u sistemskom lupus erythematosusu s uključenjem bubrega, akutnim glomerulonefritisom. Kombinirane imunodeficijencije, miastenija gravis, virusni hepatitis, limfomi, povećavaju - s opstruktivnom žuticom, tiroiditis Hashimoto. Reumatizam, reumatoidni artritis, nodularni periarteritis. Dermatomyositis, miokardijalni infarkt, ulcerativni kolitis, Reiterov sindrom, giht.

Određivanje metoda

• Određivanje komplementarnih komponenti. Kvantitativno određivanje provodi se metodom radijalne imunodifuzije i nephelometrije.
  Studija nije informativna, osim ako se antigenska svojstva komponenti komplementa ne promijene.
• Utvrđeno je da Clq-komponenta komplementa pojačava fagocitozu i posreduje u staničnoj citotoksičnosti. Njegovo smanjenje javlja se kod bolesti imunoloških kompleksa, sistemskog lupus eritematosusa, purulentnih infekcija i tumora.
• C3-komponenta sudjeluje u aktiviranju klasičnog i alternativnog puta komplementa. Smanjenje njegove koncentracije je povezano s kroničnim bakterijskim i gljivičnim infekcijama, prisustvom cirkulirajućih ili tkiva imunoloških kompleksa.
• C4 komponenta sudjeluje u aktiviranju klasičnog puta. Smanjenje koncentracije povezano je s produljenom aktivacijom komplementa s imunim kompleksima i sa smanjenjem koncentracije C1 inhibitora, koja kontrolira aktivaciju klasičnog komplementnog puta. C4 nedostatak javlja se s sistemskim lupus eritematosusom, povećanje C4 dolazi kod bolesti bubrega, odbacivanja transplantata, akutne upale i bolesti gastrointestinalnog trakta.
• C5a je mali fragment C5 molekule, odijeljen od njega kao rezultat aktivacije komplementarnog sustava. Povećanje koncentracije javlja se upalom, sepsa, atopijskih i alergijskih bolesti.
• Cl-inhibitor je višenamjenski faktor. Ona kontrolira aktivaciju C1 komponente komplementa, inhibira aktivnost kallikreina, plazmina i aktivnog faktora Hageman, proteaza Cls i Or. Nedostatak C1-inhibitora dovodi do angioedema.
• komplementarne studije. U standardni serum koji nema bilo kakvu komponentu komplementa, doda se test serum i određuje se hemolitička aktivnost komplementa. Ako se hemolitička aktivnost ne vraća u normalu, vjeruje se da se aktivnost komponente komplementa u test serumu smanjuje.

[1], [2], [3], [4], [5], [6]