Konfokalna intravitalna mikroskopija rožnice

Konfokalna mikroskopija rožnice je jedna od modernih metoda istraživanja; omogućuje provođenje intravitalnog praćenja stanja rožnice s vizualizacijom tkiva na staničnoj i mikrostrukturnoj razini.

Ova metoda, zbog originalnog dizajna mikroskopa i njegove visoke rezolucije, omogućuje vizualizaciju živih tkiva rožnice, mjerenje debljine svakog od njegovih slojeva i procjenu stupnja morfoloških poremećaja.

Svrha konfokalne mikroskopije rožnice

Karakteriziraju morfološke promjene u rožnici, koje proizlaze iz različitih upalnih i distrofičnih bolesti, kao i kirurških intervencija i učinaka CR.

Morfološki podaci potrebni su za procjenu težine patološkog procesa, učinkovitost liječenja i određivanje taktike upravljanja pacijentima.

Indikacije za postupak

• Upalne bolesti kornee ( keratitis ).
• Dystrofske bolesti rožnice ( keratoconus, Fuchsova distrofija, itd.).
• Sindrom "suhog oka".
• Uvjeti nakon kirurških zahvata na rožnici (kroz transplantaciju rožnice, keratorefrakcijske operacije).
• Uvjeti vezani za nošenje kontaktnih leća.

[1], [2], [3], [4]

Priprema

Ova studija je moguća bez upotrebe anestetika. Kapljica tekućine za uranjanje stavlja se na leću objektiva konfokalnog mikroskopa. Time se eliminira izravni kontakt leće s rožnicom i minimizira rizik od oštećenja epitelnih stanica.

[5], [6], [7], [8], [9],

Tehnika konfokalna mikroskopija rožnice

Istraživanje se provodi na konfokalnom mikroskopu ConfoScan 4 (Nider) s povećanjem od 500 puta. Uređaj vam omogućuje da pregledate rožnicu na čitavoj debljini.

Veličina ispitivane zone je 440 × 330 μm, debljina skeniranog sloja je 5 μm. Leća s kapljicom gela dovodi se do rožnice kako bi se dodirnula i postavila tako da je debljina tekućeg sloja za uranjanje 2 mm. Dizajn uređaja omogućuje pregled rožnice u središnjoj zoni i njegovim paracentralnim područjima.

Kontraindikacije u postupku

Relativna kontraindikacija označila je iritaciju oka na pozadini akutnog upalnog procesa.

[10], [11]

Uobičajena izvedba

Normalna morfološka slika rožnice

Prednji epitel se sastoji od 5-6 slojeva stanica. Prosječna debljina cijelog epitela iznosi približno 50 μm. Prema morfološkoj strukturi razlikuju se sljedeći slojevi (iznutra prema van): bazalna, podložna i površinska.

• Najdublji (bazalni) sloj predstavljaju male guste, cilindrične stanice bez vidljive jezgre. Granice bazalnih ćelija jasne su, svijetle.
• Srednji sloj sastoji se od 2-3 sloja kralježnice (krilatih) stanica s dubokim invaginacijama, u koje nastaju izrasli susjednih stanica. Mikroskopski se granice stanica relativno dobro razlikuju, a jezgre se ne mogu definirati ili biti neizrazito.
• Površinski sloj epitela predstavlja jedan ili dva sloja poligonalnih stanica s jasnim granicama i homogenu gustoću. Jezgre su obično svjetlije od citoplazme, u kojoj se također može razlikovati tamni prsten blizu jezgre.

Među stanicama površinskog sloja razlikuju se tamno i svjetlo. Povećana refleksivnost epitelnih stanica upućuje na smanjenje razine metabolizma u njima i na početku njihovog uklanjanja.

Bowmanova membrana je prozirna struktura koja ne odražava svjetlost pa je nemoguće je vizualizirati kada se izvršava konfokalna mikroskopija.

Subbasicni živčani pleksus nalazi se pod Bowman membranom. Normalno, živčana vlakna izgledaju poput svijetlih traka koje se paralelno izvode na tamnoj pozadini, međusobno se kontaktiraju. Reflektivnost (reflektivnost) može biti neujednačena u duljini vlakana.

Stromna rožnica zauzima 80 do 90% debljine rožnice i sastoji se od stanične i izvanstanične komponente. Osnovni stanični elementi strome su keratociti; čine približno 5% volumena.

Tipični mikroskopski uzorak strome uključuje nekoliko svijetlih nepravilnih tijela u obliku ovalnog oblika (keratocitne jezgre) koje leže u debljini prozirne tamnosive ili crne matrice. Obično, vizualizacija izvanstaničnih struktura nije moguće zbog svoje transparentnosti. Strom se može uvjetno podijeliti na podlogu: prednji (nalazi se neposredno ispod Bowmanove membrane i čini 10% debljine strome), prednji, srednji i stražnji.

Prosječna gustoća keratocita je veća u prednjoj stromi, postupno se smanjuje prema stražnjim slojevima. Gustoća stanica strome prednje skoro dva puta veći od stražnje stanica strome (ako je gustoća stanica strome prednjeg uzima kao 100%, zatim gustoću stražnje oko 53.7% stanica). U prednjem stromu, jezgre keratocita imaju okrugli oblik u obliku graha, au stražnjem ovalnom i izduženom.

Jezgre keratocita mogu se razlikovati po svjetlini. Različita sposobnost reflektiranja svjetlosti ovisi o njihovoj metaboličkoj situaciji. Svjetlije se stanice smatraju aktiviranim keratocitima ("stresnim stanicama"), čije su aktivnosti usmjerene na održavanje unutarnje homeostaze rožnice. U normi i vidnom polju, postoje pojedinačne aktivirane stanice.

Živčana vlakna u prednjoj stromi rožnice su vizualizirana kao svijetle homogene trake, koje često čine bifurkacije.

Membemska membrana je normalno prozirna i nije vizualizirana konfokalnom mikroskopijom.

Stražnji epitel je monosloj šesterokutnih ili poligonalnih ravnih stanica s ravnomjerno svijetlom površinom na pozadini različitih tamnih međustaničnih granica.

Uređaj pruža mogućnost ručnog ili automatskog izračuna gustoće stanica, njihovog područja i koeficijenta varijabilnosti.

Patološke promjene u strukturi rožnice

Keratoconus je karakteriziran značajnim promjenama u prednjem epitelu i stromu rožnice.

[12], [13], [14], [15], [16], [17], [18], [19], [20]