Konfokalna mikroskopija rožnice tijekom cijelog života

Konfokalna mikroskopija rožnice jedna je od modernih istraživačkih metoda; omogućuje intravitalno praćenje rožnice s vizualizacijom tkiva na staničnoj i mikrostrukturnoj razini.

Ova metoda, zbog originalnog dizajna mikroskopa i njegove visoke razlučivosti, omogućuje vizualizaciju živog tkiva rožnice, mjerenje debljine svakog njegovog sloja i procjenu stupnja morfoloških poremećaja.

Svrha konfokalne mikroskopije rožnice

Karakterizirati morfološke promjene rožnice koje se javljaju kod različitih upalnih i distrofičnih bolesti, kao i kao posljedica kirurških zahvata i izloženosti CL-u.

Podaci morfološkog pregleda potrebni su za procjenu težine patološkog procesa, učinkovitosti liječenja i određivanje taktike liječenja pacijenta.

Indikacije za postupak

• Upalne bolesti rožnice ( keratitis ).
• Distrofične bolesti rožnice ( keratokonus, Fuchsova distrofija itd.).
• Sindrom suhog oka.
• Stanja nakon kirurških zahvata na rožnici (penetrirajuća transplantacija rožnice, keratorefraktivne operacije).
• Stanja povezana s nošenjem kontaktnih leća.

[ 1 ], [ 2 ], [ 3 ], [ 4 ]

Priprema

Ovaj pregled se može provesti bez upotrebe anestetika. Kapljica tekućine za imerziju stavlja se na objektiv konfokalnog mikroskopa. Time se eliminira izravan kontakt leće s rožnicom i minimizira rizik od oštećenja epitela.

[ 5 ], [ 6 ], [ 7 ], [ 8 ], [ 9 ]

Tehnika konfokalna mikroskopija rožnice.

Studija se provodi pomoću konfokalnog mikroskopa ConfoScan 4 (Nider) s povećanjem od 500 puta. Uređaj omogućuje pregled rožnice u cijeloj njezinoj debljini.

Veličina ispitivanog područja je 440×330 μm, debljina sloja za skeniranje je 5 μm. Leća s kapljicom gela se prinosi rožnici dok je ne dodirne i postavlja se tako da debljina sloja imerzijske tekućine iznosi 2 mm. Dizajn uređaja omogućuje ispitivanje rožnice u središnjoj zoni i njezinim paracentralnim područjima.

Kontraindikacije u postupku

Relativna kontraindikacija je jaka iritacija oka zbog akutnog upalnog procesa.

[ 10 ], [ 11 ]

Uobičajena izvedba

Normalna morfološka slika rožnice

Prednji epitel sastoji se od 5-6 slojeva stanica. Prosječna debljina cijelog epitela je približno 50 µm. Prema morfološkoj strukturi razlikuju se sljedeći slojevi (od iznutra prema van): bazalni, šilaste stanice i površinski.

• Najdublji (bazalni) sloj predstavljen je malim, gustim, cilindričnim stanicama bez vidljive jezgre. Granice bazalnih stanica su jasne i svijetle.
• Srednji sloj sastoji se od 2-3 sloja bodljikavih (krilatih) stanica s dubokim invaginacijama u koje su ugrađeni izrasli dijelovi susjednih stanica. Mikroskopski se granice stanica prilično jasno razlikuju, a jezgre možda nisu definirane ili mogu biti nejasne.
• Površinski sloj epitela predstavljen je s jednim ili dva sloja poligonalnih stanica s jasnim granicama i homogenom gustoćom. Jezgre su obično svjetlije od citoplazme, u kojoj se može razaznati i perinuklearni tamni prsten.

Među stanicama površinskog sloja razlikuju se tamne i svijetle stanice. Povećana reflektivnost epitelnih stanica ukazuje na smanjenje njihove brzine metabolizma i početak deskvamacije.

Bowmanova membrana je prozirna struktura koja ne reflektira svjetlost, pa ju je obično nemoguće vizualizirati konfokalnom mikroskopijom.

Subbazalni živčani pleksus nalazi se ispod Bowmanove membrane. Normalno, živčana vlakna izgledaju kao svijetle pruge koje se protežu paralelno na tamnoj pozadini, međusobno se dodirujući. Refleksija (odbojnost) može biti neravnomjerna duž vlakna.

Stroma rožnice zauzima 80 do 90% debljine rožnice i sastoji se od staničnih i izvanstaničnih komponenti. Glavni stanični elementi strome su keratociti; oni čine otprilike 5% volumena.

Tipična mikroskopska slika strome uključuje nekoliko svijetlih nepravilnih ovalnih tijela (jezgre keratocita) koja leže u debljini prozirne tamnosive ili crne matrice. Normalno, vizualizacija izvanstaničnih struktura je nemoguća zbog njihove prozirnosti. Stroma se uvjetno može podijeliti na podslojeve: prednji (smješten neposredno ispod Bowmanove membrane i čini 10% debljine strome), prednje-srednji, srednji i stražnji.

Prosječna gustoća keratocita je veća u prednjoj stromi, postupno se smanjujući prema stražnjim slojevima. Gustoća prednjih stromalnih stanica gotovo je dvostruko veća od gustoće stražnjih stromalnih stanica (ako se gustoća prednjih stromalnih stanica uzme kao 100%, tada će gustoća stražnjih stromalnih stanica biti oko 53,7%). U prednjoj stromi jezgre keratocita imaju zaobljeni oblik graha, dok su u stražnjoj stromi ovalne i izduženije.

Jezgre keratocita mogu varirati u svjetlini. Različita sposobnost refleksije svjetlosti ovisi o njihovom metaboličkom stanju. Svjetlije stanice smatraju se aktiviranim keratocitima ("stresne" stanice), čija je aktivnost usmjerena na održavanje unutarnje homeostaze rožnice. U normi i vidnom polju nalaze se pojedinačne aktivirane stanice.

Živčana vlakna u prednjoj stromi rožnice vizualiziraju se kao svijetle homogene trake, često tvoreći bifurkacije.

Descemetova membrana je normalno prozirna i ne vidi se konfokalnom mikroskopijom.

Stražnji epitel je monosloj heksagonalnih ili poligonalnih ravnih stanica s jednoliko svijetlom površinom na pozadini jasnih tamnih međustaničnih granica.

Uređaj ima mogućnost ručnog ili automatskog izračuna gustoće stanica, njihove površine i koeficijenta varijabilnosti.

Patološke promjene u strukturi rožnice

Keratokonus karakteriziraju značajne promjene u prednjem epitelu i stromi rožnice.

[ 12 ], [ 13 ], [ 14 ], [ 15 ], [ 16 ], [ 17 ], [ 18 ], [ 19 ], [ 20 ]