Krvni test za Epstein-Barr virus na antitijela i PCR: kako proći, norme

Pod herpesom smo navikli podrazumijevati ružne, bolne mjehurićaste osipe na licu u području usana, koji potom tvore smeđe kraste. Nažalost, ovo je samo jedno od lica herpes virusa, koji se kod ljudi može pojaviti u 8 oblika. Ono što obično nazivamo herpesom je virus tipa 1 ili virus herpes simpleksa. Virus tipa 2 uzrokuje genitalni herpes, tip 3 - "vodene kozice" i herpes zoster, tip 4 - infektivnu mononukleozu i nekoliko drugih prilično opasnih patologija itd. Ovaj popis se može nastaviti, ali mi ćemo se usredotočiti na herpes virus tipa 4, koji se inače naziva Epstein-Barr virus. Pokušajmo shvatiti što je herpes virus tipa 4, zašto je opasan, kada i zašto se provodi test na Epstein-Barr virus i što pokazuju rezultati laboratorijskih testova.

Što je herpes virus tipa 4?

Herpesvirus tip 4, kao jednu od varijanti herpesvirusne infekcije, opisao je prije 53 godine engleski virolog Michael Epstein. U radu na projektu profesoru je pomagala njegova diplomirana studentica Yvonne Barr. Upravo tim ljudima virus duguje svoje ime. Međutim, 15 godina nakon otkrića virusa, njegov znanstveni naziv promijenjen je u humani herpesvirus 4, a prije godinu dana virus je nazvan humani gamavirus tip 4.

Ali što je Epstein-Barrov virus? Kao i svaki drugi virus, virion (virusna čestica) herpesvirusa tipa 4 sastoji se od genetskog materijala (u ovom slučaju, dvolančane DNA) i okolne proteinske ljuske (kapside). Osim toga, virus je okružen membranom koja mu pomaže da lako prodre u stanice domaćina.

Bilo koji virus je nestanični oblik, koji je infektivni faktor i ne može se razvijati i razmnožavati izvan stanica živog organizma. Omiljeno stanište herpes virusa tipa 4 smatraju se epitelne stanice nazofarinksa. Ne preziru ni leukocite, dajući prednost jednoj od njihovih varijanti, nazvanoj B-limfociti. Upravo B-stanice aktivno sudjeluju u pružanju imunološke obrane tijela. Kada dođu u kontakt s antigenom, što je u našem slučaju herpes virus tipa 4 (ili bolje rečeno njegovi antigeni), B-limfociti proizvode antitijela (imunoglobulinske proteine). Mogu se otkriti u krvi pacijenta provođenjem analize na Epstein-Barr virus (EBV).

Herpes virus tipa 4 ima 4 antigena koji se pojavljuju u strogo definiranom redoslijedu:

• EA je rani antigen koji se pojavljuje u početnoj fazi bolesti, kada su virusne čestice u fazi sinteze (primarna akutna infekcija ili reaktivacija latentnog virusa kada je imunitet smanjen),
• VCA je kapsidni antigen koji se nalazi u proteinskoj ljusci i također pripada ranim antigenima, jer se klinički bolest u tom razdoblju možda neće ni manifestirati,
• MA – membranski antigen, pojavljuje se kada je virion već formiran,
• EBNA – nuklearni (polipeptidni ili nuklearni) antigen jedan je od kasnih antigena, antitijela na koja se mogu otkriti čak i nekoliko mjeseci nakon bolesti i ostaju u krvi tijekom cijelog života.

Herpes virus tipa 4 vrlo je podmukao. Budući da je virus neaktivan izvan živog organizma, može se zaraziti samo od osobe koja je izvor infekcije. I uopće nije nužno da ta osoba pokazuje sve simptome bolesti; infekcija može biti latentna, prikrivena kao običan umor. Na primjer, sindrom kroničnog umora u većini je slučajeva povezan s Epstein-Barr virusom.

Pojedinačni virioni mogu se naći u krvi, slini, spermi, vaginalnim sekretima i tkivima različitih organa. Virusne čestice, zajedno sa slinom i krvlju, mogu ući u predmete oko nas, gdje će ostati neaktivne sve dok nekako ne uđu u ljudsko tijelo. U velikoj većini slučajeva infekcija se događa kapljicama u zraku ili kontaktom (ljubljenjem). No, moguć je i intrauterini prijenos virusa s majke na fetus, infekcija tijekom transfuzije krvi (ako je krv donora sadržavala virusne virione) i spolni kontakt.

Nakon ulaska u tijelo i prodiranja u stanične strukture, može proći od 5 do 50 dana prije nego što se bolest pokaže. Ali se možda neće pojaviti, te će se pojaviti u latentnom obliku, kao što je slučaj u većini slučajeva.

Da, prema istraživanjima, oko 90% odrasle populacije barem je jednom u životu imalo herpes infekciju povezanu s EBV-om. Većina ljudi to ni ne zna jer se njihovo tijelo može boriti protiv virusnog napada. Ali to nije uvijek slučaj.

Kako se manifestira Epstein-Barrov virus?

Najčešće se liječnici u svojoj praksi susreću sa sljedećim vrstama herpesvirusne infekcije tipa 4:

• Kronični oblik (javlja se nakon akutne faze bolesti, ima neke opće simptome lošeg zdravlja),
• Latentni ili skriveni oblik (nema simptoma, ali virus ostaje aktivan i oslobađa se u okoliš),
• Spori oblik (rjeđi, simptomi se javljaju jedan po jedan tijekom duljeg razdoblja, završavajući smrću pacijenta).

Ljudi se prvi put zaraze Epstein-Barr virusom, prvenstveno u djetinjstvu i adolescenciji. Vrhunac incidencije javlja se između 14. i 18. godine.

Primarna virusna infekcija ima 3 različita oblika:

• asimptomatski (bez kliničkih manifestacija),
• respiratorni (simptomi respiratorne infekcije: vrućica, iscjedak iz nosa, opća slabost itd.),
• Infektivna mononukleoza s trijadom glavnih simptoma: visoka temperatura, znakovi grlobolje sa žućkastim krastama na krajnicima, povećanje organa poput jetre i slezene; dolazi do povećanja razine leukocita i povećanja limfnih čvorova.

Postoji nekoliko mogućnosti za izlazak iz akutne faze bolesti:

• potpuni oporavak,
• simptomi bolesti nestaju, ali virus ostaje u tijelu i razvija se, iako više ne dovodi do primjetnih promjena u stanicama (stanje nosioca),
• nema simptoma bolesti, virus ne napušta tijelo, ali pokazuje i malu aktivnost (latentni oblik),
• reaktivacija virusa iz latentnog oblika,
• kronični tijek infekcije (s recidivima bolesti, kroničnim aktivnim oblikom, generaliziranim s oštećenjem organa i tjelesnih sustava).

Posljedice dugotrajnog zadržavanja virusa u tijelu mogu biti:

• Kronični oblik infektivne mononukleoze.
• Hematofagocitni sindrom: stabilna vrućica, smanjene krvne komponente (povećana koagulabilnost), povećana jetra i slezena, krvarenje sluznica, žutica (zbog disfunkcije jetre), povećani limfni čvorovi, neurološki simptomi.
• Latentni oblik s razvojem sekundarne imunodeficijencije: hipertermija tijekom duljeg vremenskog razdoblja, opća slabost, povećanje i bolnost limfnih čvorova, bolovi u mišićima i zglobovima, česte zarazne bolesti.
• Razvoj autoimunih patologija u obliku eritemskog lupusa, reumatoidnog artritisa itd.
• Manifestacije sindroma kroničnog umora s pogoršanjem općeg blagostanja i performansi.
• Generalizirani oblik kronične infekcije s oštećenjem središnjeg živčanog sustava, srčanog miokarda, bubrega, jetre i pluća.
• Razvoj onkoloških bolesti (limfocitna leukemija i limfomi), kod kojih se opaža patološko povećanje broja stanica limfnog sustava. Herpes virus tipa 4 ne uništava stanice nosača, već ih prisiljava na aktivno razmnožavanje, zbog čega se otkrivaju neoplazme iz limfoidnog tkiva.

Kao što vidimo, Epstein-Barrov virus nije tako bezopasan kao što se na prvi pogled čini, što znači da se s njim ne treba postupati nemarno. Štoviše, herpes virus tipa 4 karakteriziraju česte epizode virusonosivosti i latentni oblik, a da ne spominjemo razne oblike kronične infekcije, kada osoba ostaje izvor zaraze, a da to ni ne sumnja.

U ovom slučaju, prisutnost zaraznog agensa u tijelu može se utvrditi samo posebnom analizom za Epstein-Barr virus, čiji je biomaterijal obično krv.

Indikacije za postupak Test na Epstein-Barrov virus.

Budući da infekciju herpesvirusom tipa 4 ponekad nije tako lako otkriti, ne posumnja se uvijek na nju. Ali postoje određeni znakovi pomoću kojih liječnik može posumnjati na prisutnost virusa u tijelu:

• teško oslabljen imunološki sustav (bolesnici s HIV infekcijom i AIDS-om, pacijenti nakon transplantacije organa ili kemoterapije su u opasnosti),
• povećanje regionalnih limfnih čvorova u bradi i okcipitalnom području glave i njihova bolnost, posebno ako se to opaža nakon transfuzije krvi ili transplantacije organa od donora.
• akutna respiratorna virusna infekcija (ARVI), koja se javlja na pozadini vrlo visokih temperatura (38-40 stupnjeva),
• pojava znakova infektivne mononukleoze, koja se najčešće javlja pod utjecajem Epstein-Barr virusa.

Čak i ako osoba nema gore navedene simptome, specijalist može posumnjati na temelju nekih rezultata rutinskih testova (opća analiza krvi i biokemija), kao i studija imunološkog statusa.

Kompletna krvna slika za Epstein-Barr virus može pokazati:

• povećanje broja limfocita,
• nizak hemoglobin, što ukazuje na smanjenje razine crvenih krvnih stanica,
• povećano zgrušavanje krvi zbog velikog broja trombocita,
• pojava virocita (atipičnih limfocita slične strukture monocitima).

Biokemijski test krvi, koji pruža informacije o stanju unutarnjih organa, pokazat će promjene u funkcioniranju jetre i slezene.

Imunotest za EBV može pokazati promjenu u broju specifičnih limfocita, nesklad u broju imunoglobulina različitih klasa (disimunoglobulinemija) i nedostatak imunoglobulina G, što ukazuje na slab imunološki sustav i njegovu nemogućnost da obuzda navalu virusa.

Takvi rezultati nespecifičnih analiza mogu upozoriti liječnike, ali još uvijek je nemoguće točno reći s čime se bave. Sve će ostati u fazi pretpostavki i preliminarne dijagnoze. U većini slučajeva liječnici sumnjaju na latentni oblik infektivne mononukleoze, iako se i druge virusne patologije (gripa, hepatitis itd.) mogu manifestirati na isti način.

Zbog visoke prevalencije hepatitisa tipa 4 i mogućnosti njegovog prijenosa s majke na dijete, test na Epstein-Barr virus bit će koristan i pri planiranju trudnoće. Ako je majka prethodno preboljela infekciju, njezino tijelo je razvilo antitijela na nju. Ponovna infekcija se obično isključuje zbog stvaranja snažnog imuniteta, a ako se dogodi, više neće imati posljedice koje su moguće pri prvom susretu s virusom. Imunitet će obuzdati aktivnost virusa tijekom cijelog života, iako će sam virus ostati unutar tijela, kao i bilo koji od herpes virusa.

Ako se buduća majka zarazi virusom herpesa tijekom trudnoće, to može dovesti do pobačaja i prijevremenog porođaja ili će virus negativno utjecati na intrauterini razvoj djeteta.

Onkolog može naručiti EBV test ako se sumnja na Burkettov limfom ili za dijagnosticiranje tumorskih procesa kod osoba s HIV-om. Terapeut može koristiti ovaj test za dijagnosticiranje herpes infekcija (diferencijalna dijagnostika za određivanje vrste virusa). Ponekad se test koristi i za procjenu učinkovitosti liječenja.

[ 1 ], [ 2 ], [ 3 ], [ 4 ], [ 5 ], [ 6 ], [ 7 ], [ 8 ], [ 9 ]

Priprema

Ovisno o vrsti istraživanja, biomaterijal za njega može biti krv, slina, urin, sputum, uzorak amnionske tekućine, struganje uzeto iz cervikalnog kanala ili uretre, cerebrospinalna tekućina (CSF). Najčešće, liječnici pribjegavaju testiranju krvi, što se smatra najinformativnijim.

Jasno je da neki čimbenici mogu negativno utjecati na kvalitetu i količinu biomaterijala, stoga je vrijedno slijediti određena pravila dan prije:

• Preporučuje se da se sve pretrage (posebno krvne pretrage) rade ujutro na prazan želudac. Posljednji obrok treba biti najkasnije 12 sati prije vađenja krvi, stoga je bolje piti vodu za večeru.
• Najprihvatljivijim materijalom za analizu Epstein-Barr virusa smatra se venska krv, a prije davanja krvi iz vene uvijek se preporučuje 15-minutni odmor ako je osoba upravo stigla u laboratorij,
• Kako bi se osiguralo da uzimanje uzoraka krvi prođe bez posljedica i da su rezultati testa pouzdani, ne preporučuje se obavljanje aktivnog fizičkog rada ili bavljenje sportom, pijenje alkohola ili pušenje unutar 12 sati prije postupka.
• Na rezultate testova mogu utjecati i lijekovi koje uzimate. Trebali biste prestati uzimati lijekove najmanje 2 dana prije testa. Ako to nije moguće, morate obavijestiti laboratorijsku sestru o lijekovima koje uzimate.
• Tijekom trudnoće, prije testiranja na EBV, provodi se test na toksoplazmozu kako bi se isključila lažno pozitivna reakcija.
• Ako se djetetu mlađem od 5 godina radi krvni test na Epstein-Barr virus, pola sata prije postupka djetetu treba dati puno prokuhane vode u relativno malim porcijama.

Ako se za analizu uzima drugi biomaterijal, potrebno je unaprijed razjasniti sa svojim liječnikom sve nijanse pripreme za analizu ovisno o korištenom materijalu.

[ 10 ], [ 11 ], [ 12 ]

Tehnika Test na Epstein-Barrov virus.

Liječnici važnu ulogu u dijagnozi herpesa tipa 4 i infektivne mononukleoze pridaju specifičnim testovima koji pomažu u identificiranju DNA virusa ili jedinstvenih antitijela u biomaterijalu pacijenta. Glavne vrste laboratorijskih testova koji se koriste za otkrivanje Epstein-Barr virusa u ljudskom tijelu uključuju enzimski imunosorbentni test (ELISA) i PCR dijagnostiku. Pogledajmo pobliže bit obje metode i značajke njihove provedbe.

EBV enzimski imunološki test

ELISA je studija (analiza) venske krvi pacijenata na antitijela protiv Epstein-Barr virusa. Kao rezultat dijagnostike, u krvi pacijenata s EBV-om otkrivaju se imunoglobulini tipa IgG ili IgM (ukupno ih ima 5 tipova) na jedan od 3 antigena virusa (rani, kapsidni ili nuklearni).

Analiza se provodi u imunološkom laboratoriju, gdje se iz pacijentove vene uzima oko 10 ml krvi. Biomaterijal se zatim ostavlja na sobnoj temperaturi četvrt sata, tijekom čega se krv zgrušava. Ugrušak se pažljivo odvaja od tekućeg dijela. Tekućina se centrifugira i dobiva se čisti krvni serum. Upravo se on podvrgava daljnjem pregledu.

Ideja metode nastala je na temelju podataka da naše tijelo proizvodi specifična antitijela za svaku vrstu virusa i bakterija koje prodiru u tijelo izvana. Tijelo ih prepoznaje kao strance i uništava ih uz pomoć jedinstvenih antitijela koja se čvrsto vežu za antigen.

Bit ELISA analize temelji se na ovoj reakciji. Antitijela s oznakama pričvršćenim na njih kombiniraju se s antigenima. Na oznake se nanosi tvar koja mijenja boju uzorka pri reakciji s posebnim enzimom. Što je više takvih "lanaca", to je intenzivnija boja biomaterijala.

Enzimski imunološki test može se provesti pomoću tri metode:

• Izravni ELISA. Testna tekućina se stavlja u jažice i ostavlja oko pola sata kako bi se antigeni mogli pričvrstiti na stijenke jažica. Tekućina s obilježenim antitijelima dodaje se sorbiranim antigenima. Nakon potrebnog vremena (od pola sata do 5 sati), kada su antitijela detektirana i vezana za antigene, tekućina se ocijedi, jažice se pažljivo isperu i u njih se dodaje enzim. Koncentracija virusa u jedinici krvi određuje se metodom kolorizacije.
• Indirektni ELISA. Kod ove metode, krvni serum koji se testira i obilježena antitijela dodaju se antigenima sorbiranim na površini jažica. Kao rezultat toga, dobivaju se 2 vrste ligamenata, od kojih su neki obilježeni. Rezultat ovisi o koncentraciji antigena u uzorku koji se testira. Što je više neobilježenih antitijela, to je manje spojeva obilježenih enzimom.

Zatim se opranom sastavu dodaje poseban reagens koji se koristi za određivanje enzimske aktivnosti kompleksa antigen-antitijelo.

• "Sendvič". Razlikuje se od indirektne metode po tome što se u početku na površinu ne sorbiraju antigeni, već antitijela. Dodaje im se otopina koja sadrži antigene koji se proučavaju. Nakon ispiranja nosača dodaju se antitijela s enzimskim oznakama. Višak antitijela ponovno se uklanja i pomoću vodikovog peroksida dobiva se obojena tvar koja se proučava spektrometrijskom metodom.

Ova vrsta analize omogućuje ne samo identifikaciju specifičnih antitijela i određivanje koncentracije antigena, već i razjašnjenje stadija bolesti. Činjenica je da se različiti antigeni Epstein-Barr virusa pojavljuju u različitim fazama herpes infekcije, što znači da se antitijela na njih proizvode u određenom razdoblju bolesti.

Dakle, IgG antitijela na rani antigen (IgG EA) pojavljuju se u krvi 1-2 tjedna nakon infekcije, kada je bolest u akutnoj fazi ili fazi reaktivacije virusa. Imunoglobulini ove vrste nestaju nakon 3-6 mjeseci. U kroničnom tijeku virusne infekcije takva su antitijela posebno brojna, a u atipičnom obliku potpuno su odsutna.

IgG antitijela na kapsidni antigen (IgG VCA) također se pojavljuju rano, tijekom prva 4 tjedna bolesti, ali njihov najveći broj određen je drugim mjesecom infekcije. U akutnoj fazi nalaze se kod većine pacijenata, ali se ne moraju pojaviti kod djece. U kroničnom tijeku bolesti, posebno tijekom razdoblja reaktivacije virusa, količina IgG VCA je posebno visoka. Ova antitijela ostaju u ljudskoj krvi zauvijek, poput samog virusa, što ukazuje na formirani imunitet na zaraznog uzročnika.

IgM antitijela na kapsidni antigen (IgM VCA) mogu se pojaviti čak i prije prvih znakova bolesti. Njihova koncentracija (titar) je posebno visoka u prvih 6 tjedana bolesti. Ova vrsta antitijela karakteristična je za akutnu infekciju i reaktivaciju kronične infekcije. IgM VCA nestaju nakon 1-6 mjeseci.

IgG antitijela na nuklearni gen (IgG EBNA) mogu ukazivati na to da je osoba prethodno izravno susrela herpes infekciju. U akutnoj fazi bolesti otkrivaju se izuzetno rijetko, obično se pojavljuju tijekom razdoblja oporavka (u 3.-10. mjesecu). Mogu se otkriti u krvi nekoliko godina nakon infekcije.

Detekcija pojedinačnih antigena ne pruža potpunu sliku bolesti, stoga testove na različita antitijela treba provesti zajedno. Na primjer, ako je prisutan samo IgM VCA, a IgG EBNA nije detektiran, radi se o primarnoj infekciji.

Nažalost, enzimski imunološki test često nije dovoljan za otkrivanje primarne herpes infekcije ili kongenitalne patologije. U potonjem slučaju, antitijela se uopće ne mogu otkriti. Kao potvrdni test za primarnu bolest koristi se molekularna studija krvi ili drugog biološkog materijala za Epstein-Barr virus.

PRC analiza za Epstein-Barr virus

Ova se analiza provodi u fazi akutne primarne infekcije, inače će njezin rezultat biti netočan.

Bit PCR metode (polidimenzionalna lančana reakcija) je u tome što svaki zarazni agens ima svoj vlastiti skup gena sadržanih u molekuli DNA. DNA patogena sadržana je u biomaterijalu uzetom za istraživanje u malim količinama (sami virusi su mikroskopske veličine), pa je vrlo teško procijeniti situaciju. Ali ako se provede specifična reakcija, količina genetskog materijala značajno će se povećati, što će omogućiti imenovanje patogena.

Pomoću jednokratnih instrumenata uzima se materijal za molekularna istraživanja, koji se zatim stavlja u poseban uređaj za analizu. Uređaj je termostat sa posebnim programom - termociklerom ili pojačalom. Uređaj nekoliko desetaka puta (oko 2-3 minute) izvodi puni PRC ciklus, koji ima 3 faze:

• Denaturacija (na temperaturi od 95 stupnjeva, lanci DNK se odvajaju).
• Žarenje (na temperaturi od 75 stupnjeva, u proučavani materijal uvode se posebno pripremljeni "primeri" za EBV, koji se vežu za DNA virusa).
• Proširenje ili umnožavanje genetskog materijala (sjemenu se na temperaturi od 72 stupnja dodaje poseban enzim koji ponovno stvara novi lanac DNK, čime se udvostručuje količina genetskog materijala).

Ako se puni ciklus polidimenzionalne reakcije provede 50 puta, količina materijala će se povećati 100 puta. To znači da će biti puno lakše identificirati patogen.

Test na Epstein-Barrov virus kod djeteta

Kao što već znamo, Epstein-Barr virus može uzrokovati razvoj mnogih bolesti. Nakon što uđe u ljudsko tijelo, ostaje njegov stalni stanovnik, a samo dobro koordiniran rad imunološkog sustava ne dopušta mu da aktivno parazitira unutar stanica.

Gotovo 95% odrasle svjetske populacije živi s EBV-om u sebi, a većina ih se s virusom upoznala u ranom djetinjstvu. Neki su ga naslijedili od majke, dok su drugi virus dobili od roditelja i rodbine koji su djetetu žurili s poljupcima ili kapljicama u zraku u vrtiću ili školi (zarazne bolesti tamo obično poprimaju "univerzalne" razmjere).

Mala djeca uglavnom sve stavljaju u usta, a najveći broj viriona nalazi se u slini. A ako nekoliko djece liže istu igračku u vrtiću dok su učitelji zauzeti svojim poslovima, onda ne čudi da se virus tako aktivno širi u velikim skupinama djece.

EBV se lako može nazvati bolešću djece i mladih, jer do adolescencije polovica djece već ima virus u tijelu (a do 30. godine oko 90% odraslih). Djeca u različitoj dobi obolijevaju na svoj način. Do godinu dana, dok dijete aktivno ne komunicira s ljudima, vjerojatnost da će oboljeti je mala. Dijete starije od godinu dana, čak i ako nije išlo u vrtić, postaje društvenije, igra se s vršnjacima na ulici, ide u aktivne kupovine s majkom itd., a vjerojatnost zaraze virusom postaje mnogo veća.

Ali to nije razlog da dijete zatvorite unutar 4 zida. U dobi od 1-3 godine bolest u velikoj većini slučajeva prolazi bez ikakvih simptoma, osim možda s blagim porastom temperature i blagim curenjem iz nosa, koje podsjeća na prehladu. Ispada da što se dijete ranije upozna s virusom, to takvo upoznavanje lakše prolazi.

Nije dobro ako dijete oboli bez pojave IgG VCA antitijela u krvi, što može ukazivati na to da imunitet na virus nije formiran, a reaktivacija virusa je moguća čim imunološki sustav oslabi. Razlog je najvjerojatnije nesavršenost imunološkog sustava male djece, koji je u procesu formiranja već nekoliko godina.

Školski život pruža još više preduvjeta za bolest, posebno u adolescenciji, kada mladi aktivno prakticiraju ljubljenje. Ali kod djece starije od 3 godine bolest je rjeđe asimptomatska. U većini slučajeva liječnici se susreću s infektivnom mononukleozom s njezinim karakterističnim simptomima.

Unatoč činjenici da patologija može imati dug tijek (oko 2 mjeseca), nije toliko opasna i ne zahtijeva upotrebu ozbiljnih lijekova. Liječnici propisuju protuupalne i antivirusne lijekove, ako se pridruži bakterijska infekcija, traže pomoć od antibiotika. Usput, penicilini se u ovom slučaju ne preporučuju zbog činjenice da mogu izazvati pojavu kožnog osipa.

Nemojte misliti da ako dijete ili tinejdžer dobiju zaraznu mononukleozu, to znači da se Epstein-Barrov virus nastanio u njihovom tijelu. Bolest ima i druge manje uobičajene uzročnike, poput citomegalovirusa (herpes virus tipa 5). Kako bi razumjeli s čime se suočavaju, liječnici propisuju test na Epstein-Barrov virus i, ako je potrebno, druge laboratorijske pretrage.

Također je istina da infektivna mononukleoza nije jedina manifestacija EBV-a u djetinjstvu. Postoje i druge bolesti povezane s ovim patogenom, ali u našoj regiji su rijetke.

Dakle, Burkittov limfom (kojem EBV duguje svoje otkrivanje) nalazi se uglavnom kod djece u afričkim zemljama, vrlo rijetko u Americi, a još rjeđe u Europi (i tada samo na pozadini AIDS-a). Tumor čeljusti s oštećenjem limfnih čvorova, bubrega i drugih organa nalazi se kod djece u dobi od 3-8 godina.

Rak nazofarinksa, značajan udio drugih limfoma, dlakava leukoplakija usta - sve su to manifestacije EBV-a na pozadini znatno smanjenog imuniteta, što se javlja kod HIV infekcije i njezine kasnije faze AIDS-a.

Kongenitalna imunodeficijencija i dodatak Epstein-Barr virusa opasna je mješavina koja može dovesti do razvoja proliferativnog sindroma kod djeteta. U ovom slučaju, povećanje broja B-limfocita dovodi do pojave granula u mnogim organima, što im sprječava normalno funkcioniranje. Ovo je bolest s visokom stopom smrtnosti, ali se ne razvija na pozadini normalnog imuniteta.

Može se reći da je u djetinjstvu Epstein-Barr virus opasan uglavnom u slučajevima imunodeficijencije zbog razvoja raznih komplikacija. U većini slučajeva sve je ograničeno na infektivnu mononukleozu. I premda ne zahtijeva poseban tretman, liječnici ipak radije utvrđuju prirodu patogena, za što se djetetu propisuje opći test krvi, enzimski imunološki test i PCR.

Budući da se primarna infekcija uglavnom događa u djetinjstvu, sasvim je moguće ograničiti se samo na kompletnu krvnu sliku i PCR, što je prilično informativno kada se bolest prvi put otkrije.

[ 13 ], [ 14 ], [ 15 ], [ 16 ], [ 17 ], [ 18 ], [ 19 ], [ 20 ], [ 21 ], [ 22 ]

Uobičajena izvedba

Rezultati PCR analize obrađuju se elektroforezom ili korištenjem označenih "primera". U potonjem slučaju dovoljno je jednostavno dodati reagens (kromogen) i bojom utvrditi postoje li virioni u uzorku. Pozitivan rezultat elektroforeze indiciran je kada se u uzorku koji se proučava detektiraju lanci DNA različitih duljina.

Tijekom inkubacijskog razdoblja bolesti i asimptomatskog nositeljstva virusa, PCR će dati negativan rezultat, kao i u slučaju apsolutne odsutnosti virusa u tijelu. Na početku razvoja primarne infekcije i u njezinim ranim fazama, PCR u stvarnom vremenu može dati i pozitivne i negativne rezultate, što nikako ne pojašnjava situaciju.

Međutim, usred bolesti (akutna faza), u njezinom kroničnom tijeku ili reaktivaciji virusa (egzacerbacija) i u slučaju atipičnih oblika, analiza će biti pozitivna. Ako je osoba dugo bolesna i virus u njezinom tijelu je u neaktivnom stanju, PCR analiza će dati negativan rezultat, tj. provođenje ove analize tijekom tog razdoblja također je neprikladno, kao i u preranim fazama bolesti.

Mora se reći da su točni rezultati ove vrste laboratorijskih istraživanja mogući samo u slučaju primarne infekcije i odsutnosti viriona drugih virusa.

Sada, što se tiče enzimskog imunološkog testa za Epstein-Barr virus. Ima iste zahtjeve. Prisutnost herpes virusa tipa 5 ili 6, toksoplazmoze i HIV infekcije u tijelu može iskriviti rezultat ne manje od nemara prema analizi ili loše kvalitete korištenih reagensa. U ovom slučaju mogu biti potrebna dodatna istraživanja, uzimajući u obzir moguće patogene.

Normalni rezultati testova, koji ukazuju na odsutnost virusa u tijelu, smatraju se negativnim rezultatom za sva 4 testa: IgG EA, IgM VCA, IgG VCA i IgG EBNA. Da, svaki test se provodi zasebno, jer se antigeni pojavljuju u različitim razdobljima bolesti. Ponekad se mogu propisati samo pojedinačni testovi, ali u većini slučajeva moraju se napraviti sva 4 testa, ali u različitim razdobljima bolesti.

Na primjer, tijekom inkubacijskog razdoblja bolesti, kao i u odsutnosti infekcije, nijedna od 4 vrste antitijela nije detektirana u krvi. Takav rezultat ne može se smatrati dovoljnim, jer ne dopušta razlikovanje osobe koja je prvi put oboljela od zdrave osobe.

Na početku razvoja primarne bolesti u krvi se pojavljuju samo IgM VCA antitijela. U ranim fazama bolesti pridružuju im se IgG VCA antitijela.

Akutna faza primarne infekcije odvija se stvaranjem tri vrste antitijela: IgG VCA, IgM VCA i IgG EA, s najvećim brojem IgG antitijela detektiranih na kapsidni antigen. Isti sastav antitijela održava se šest mjeseci nakon akutne faze bolesti, ali količina IgM VCA postupno se smanjuje na nulu.

Šest mjeseci nakon bolesti, u krvi se pojavljuju IgG EBNA antitijela, dok imunoglobulina IgG EA postaje sve manje, a IgM VCA potpuno nedostaju.

U kroničnim slučajevima bolesti ili reaktivacije virusa, mogu postojati različiti pokazatelji. Najčešće se u krvi nalaze sve 4 vrste antitijela. No, vrlo je moguće da imunoglobulini IgM VCA i IgG EBNA nisu otkriveni.

Komplikacija virusne infekcije tumorskim procesima javlja se uz odsutnost IgM VCA antitijela, a IgG EBNA imunoglobulini se ne otkrivaju u svim slučajevima.

Ali enzimski imunološki test određuje ne samo prisutnost određenih antitijela, već i njihovu koncentraciju, što nam omogućuje da s većom točnošću procijenimo stadij patologije i njezine moguće posljedice. Ovdje nema potrebe govoriti o konkretnim brojkama. Uostalom, svaki laboratorij provodi analizu na jedan od mogućih načina, koristeći različite reagense, pa se rezultati analize različitih laboratorija mogu razlikovati u digitalnom formatu.

Pacijentu je potrebno dati obrazac s naznačenim graničnim (referentnim) vrijednostima. Ako je rezultat ispod praga, smatra se normalnim (negativnim) pokazateljem. Ako je utvrđeni broj iznad referentne vrijednosti, sve ukazuje na pozitivan rezultat, što znači da virus živi u tijelu. Vrijednost utvrđene vrijednosti ukazuje na stadij bolesti i kolonizaciju tijela EBV virionima, tj. težinu patologije.

Ako je ELISA test negativan, to samo znači da osoba u prošlosti nije imala kontakt s EBV-om. No, nemoguće je sa sigurnošću reći je li virus trenutno prisutan u tijelu. Negativan rezultat može biti uzrokovan inkubacijom patogena u tijelu i asimptomatskim nošenjem virusa. Ponekad je, kako bi se osiguralo da tijelo nije naseljeno virusom, potrebno provesti drugu seriju testova nakon nekog vremena.

Ako rezultat ELISA testa za Epstein-Barrov virus samo neznatno premašuje referentne vrijednosti, rezultat se smatra upitnim. Uzrok je najčešće rani stadij bolesti ili prisutnost viriona drugog virusa u tijelu. U tom slučaju, nakon 2 tjedna, preporučuje se ponovni test na EBV i eventualno na druge patogene.

[ 23 ], [ 24 ], [ 25 ], [ 26 ], [ 27 ], [ 28 ], [ 29 ], [ 30 ]

Što se tiče pitanja koliko je vremena potrebno za napraviti test na Epstein-Barr virus i kada možete očekivati rezultate, nema posebnih poteškoća. U ozbiljnom, dobro opremljenom laboratoriju morat ćete čekati najviše 2 dana nakon predaje biomaterijala. U situacijama koje zahtijevaju hitnu analizu, odgovor se može dobiti čak i nakon nekoliko sati.

Test na Epstein-Barrov virus treba provesti u pouzdanom laboratoriju, gdje postoje i visokokvalitetni reagensi i kvalificirani stručnjaci. Uostalom, test košta (i to ne malo, test na jednu vrstu antitijela košta oko 150-170 UAH), a ne bih htio dobiti lažni rezultat, a zatim se eventualno ponovno obratiti, ali u drugi laboratorij, radi ponovljenog testa.

[ 31 ], [ 32 ], [ 33 ], [ 34 ], [ 35 ]