Bence-Jonesov protein

Urin zdrave osobe ne sadrži Bence-Jonesov protein, koji je predstavljen lakim lancima imunoglobulina koji se otkrivaju kao rezultat stvaranja malignih tumorskih procesa.

Laboratorijski testovi za prisutnost specifičnih proteina niske molekularne težine nužni su za dijagnosticiranje niza patoloških stanja (najčešće problema s β-imunološkim sustavom), kao i za određivanje učinkovitosti korištene terapije.

U višku, Bence-Jonesov protein proizvode plazma stanice, kreće se krvotokom i izlučuje mokrenjem. Upravo to potonje svojstvo proteinskih tijela omogućuje posumnjavanje na sljedeće bolesti prilikom pregleda urina:

• mijelom;
• osteosarkom;
• plazmocitom;
• kronična limfocitna leukemija;
• limfogranulomatoza;
• primarna amiloidoza;
• makroglobulinemija;
• idijapatska monoklonska gamopatija.

Klinički je potvrđena veza između oslobađanja specifičnog proteina i naknadne disfunkcije bubrega uzrokovane toksičnim učinkom proteinskih tijela na epitelne strukture bubrežnih tubula, što pak uzrokuje fenomen distrofije, Fanconijevog sindroma i bubrežne amiloidoze.

[ 1 ], [ 2 ], [ 3 ], [ 4 ], [ 5 ], [ 6 ], [ 7 ], [ 8 ], [ 9 ]

Bence Jonesov protein u urinu

Prisutnost proteina u mokraći naziva se proteinurija. Prerenalna proteinurija shvaća se kao prisutnost ogromne količine niskomolekularnih proteina u mokraći. U ovom slučaju nema oštećenja bubrežnog filtera i tubula, a normalna funkcija bubrega nije u stanju osigurati reapsorpciju proteinskih tijela. Ekstrarenalna (lažna) proteinurija, tj. koja se javlja bez oštećenja funkcije bubrega, ukazuje na prisutnost infektivnog ili malignog procesa u tijelu. Proteinurija se opaža u 60-90% slučajeva pacijenata s mijelomom. Oko 20% patoloških stanja su Bence-Jonesovi mijelomi.

Bence-Jonesov protein u urinu diferencira se zbog humoralnih pomaka u β-imunološkom sustavu. Pojava proteinskih tijela povezana je s patologijom mijeloma, paraproteinemijskim hemoblastozama, endoteliozom, Waldenstromovom makroglobulinemijom, limfatičkom leukemijom, osteosarkomima. Detekcija Bence-Jonesovog proteina u urinu važan je dijagnostički i prognostički korak. Zbog niske molekularne težine, Bence-Jonesov protein se izlučuje urinom, oštećujući epitel bubrežnih tubula, što je prepuno razvoja zatajenja bubrega, što može dovesti do smrti. Pravovremena klasifikacija proteina prema tipu također je važna: λ-protein ima veći nefrotoksični učinak od κ.

[ 10 ], [ 11 ], [ 12 ], [ 13 ], [ 14 ]

Bence-Jonesov proteinski test

Prisutnost proteinskih tijela u mokraći, osim seruma, ukazuje na limfatičnu leukemiju, osteosarkom ili mijelom (tumorski procesi koštane srži). Bence-Jonesov protein, kada se filtrat urina zagrije na 45-60º C, taloži se kao mutni sediment koji se taloži na stijenkama epruvete. Daljnji porast temperature do vrijednosti vrenja otapa odvojenu mutnoću.

Kvantitativni test za Bence-Jonesov protein provodi se na sljedeći način:

• korištenje dijela vode i dijela dušične kiseline kao reagensa;
• stavljanje dušične kiseline (0,5-1 ml) u epruvetu s nanošenjem iste količine testiranog urina;
• procjena rezultata nakon 2 minute (pojava tankog prstena na granici tekućih medija ukazuje na prisutnost 0,033% proteinskih tijela).

Opažanje prstena nalik niti zahtijeva razrjeđivanje urina vodom u omjeru 1:1, pojava debelog prstena ukazuje na potrebu miješanja dijela urina s tri dijela vode, a u slučaju kompaktnog prstena, dio urina razrjeđuje se sa sedam dijelova vode. Štoviše, razrjeđivanje se nastavlja sve dok se karakteristični sediment ne pojavi u 2-3. minuti testiranja.

Količina sadržanih proteina izračunava se množenjem 0,033% s vrijednošću razrjeđenja. Na primjer, urin je razrijeđen 10 puta, prsten proteinskih tijela pojavio se na kraju 3. minute istraživanja, tada se postotak uključivanja proteina izračunava na sljedeći način: 0,033x10=0,33.

Ako nema sedimenta, procjenjuje se stupanj zamućenosti - izraženi, slabi ili jedva prepoznatljivi tragovi zamućenosti.

[ 15 ], [ 16 ], [ 17 ], [ 18 ], [ 19 ]

Sekrecija Bence Jonesovog proteina

Ovisno o vrsti izlučenog imunoglobulina, razlikuje se:

• patologije lakih lanaca (lučenje Bence-Jonesovog proteina);
• glomerulopatija (lučenje drugih imunoglobulina).

Moguće su i razne kombinacije oštećenja bubrega. Kao što praksa pokazuje, nefropatija je posljedica limfoproliferativne patologije (multipli mijelom, kronična limfocitna leukemija, Waldenstromova bolest itd.).

Kada se otpuste u krvotok, kao i svi proteini molekularne težine do 40 kDa, laki lanci zaobilaze bubrežni filter, a zatim se putem lizosoma razgrađuju na oligopeptide i aminokiseline. Višak lakih lanaca izaziva disfunkciju reakcije katabolizma i moguće oslobađanje lizosomskih enzima, što povlači za sobom nekrozu tubularnog tkiva. Proteinska tijela dovode do nemogućnosti reapsorpcije, a kada se monoklonski laki lanci kombiniraju s Tamm-Horsfallovim proteinom, u distalnim tubulima nastaju proteinski cilindri.

Bence-Jonesov protein u mijelomu

Multipli mijelom je patološko stanje u kojem tijelo proizvodi lake imunoglobulinske lance umjesto punopravnih. Dijagnoza bolesti i praćenje stanja provode se laboratorijskim ispitivanjem urina, koje pokazuje kvantitativni sadržaj proteinskih tijela. Specifikacija podtipa mijeloma temelji se na analizi krvnog seruma. Klinički znakovi bolesti uključuju: sindrom boli u kostima, disfunkciju mokrenja, hematome nepoznatog podrijetla, zadržavanje tekućine u tijelu.

Bence-Jonesov protein u mijelomu detektira se na temelju standardnog testiranja koje pokazuje kvantitativni sadržaj proteinskih tijela i procjenjuje stupanj oštećenja bubrega. Identifikacija proteina u urinu objašnjava oštećenje epitela sklerozom bubrežne strome, što s vremenom formira zatajenje bubrega - čest uzrok smrti kao posljedica oštećenja mijeloma (Bence-Jonesov protein potpuno začepljuje tubule, sprječavajući mokrenje).

Statistički podaci pokazuju da se mijelom diferencira kod muškaraca starijih od 60 godina, s anamnezom genetske predispozicije, koji pate od pretilosti i imunosupresije, te su bili izloženi toksičnim i radioaktivnim tvarima.

[ 20 ], [ 21 ], [ 22 ], [ 23 ], [ 24 ]

Određivanje Bence-Jonesovog proteina

Za razlikovanje specifičnog proteina provodi se laboratorijska studija prosječnog dijela jutarnjeg urina (potreban je volumen od najmanje 50 ml). Prisutnost Bence-Jonesovog proteina s određivanjem kvantitativne komponente moguća je metodom imunofiksacije. Odvajanje proteina događa se elektroforezom s naknadnom imunofiksacijom pomoću posebnih seruma. Vezivanjem proteina s antitijelima lakih i teških lanaca imunoglobulina nastaju imunološki kompleksi koji se procjenjuju bojenjem.

Treba napomenuti da se čak i minimalna koncentracija proteina detektira zbog reakcije taloženja na sulfosalicilnu kiselinu. Bence-Jonesov protein određuje se kombiniranjem filtriranog urina (4 ml) s acetatnim puferom (1 ml). Naknadno zagrijavanje na 60º C u vodenoj kupelji i držanje 15 minuta s pozitivnim uzorkom daje karakteristični sediment. Ova metoda se smatra najpouzdanijom. Prekomjerno kisela ili alkalna okolina i niska relativna gustoća urina mogu negativno utjecati na rezultate analize.

Metode istraživanja u kojima se Bence-Jonesov protein otapa zagrijavanjem na 100º C ili ponovno taloži hlađenjem nisu pouzdane, budući da nemaju svi proteinski elementi odgovarajuće karakteristike. Međutim, upotreba indikatorskog papira potpuno je neprikladna za detekciju Bence-Jonesovog proteina.

[ 25 ], [ 26 ], [ 27 ], [ 28 ], [ 29 ], [ 30 ]